L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Анализ >98,5% (HPLC) Фабричен

Метод за анализ на L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Описание: Поставете около 2 g проба в чиста и суха паничка на Петри и наблюдавайте външния вид на пробата.Докладване: Докладвайте наблюдението
Идентификация: Сравнете времето на задържане на основния пик в хроматограмата на тестовия препарат с времето на задържане на основния пик в хроматограмата на препарата за пригодност на системата, получено с хроматографска чистота чрез HPLC.
Загуба при сушене: Изсушете плитка бутилка със стъклена запушалка при 105±2 ℃ за 30 минути.Оставете го да се охлади до стайна температура в ексикатор.Претеглете точно тегловната бутилка със запушалка и запишете теглото (W1).Прехвърлете около 1 до 2 g точно претеглено количество тествано вещество в тегловната бутилка.Чрез леко странично разклащане разпределете тестовия образец колкото е възможно по-равномерно на дълбочина от около 5 mm.Претеглете заредената бутилка за теглене и запишете теглото (W2).Поставете заредената бутилка в сушилнята, като отстраните запушалката и я оставите също в камерата.Изсушете тестовата проба при 105±2℃ в продължение на 3 часа.След отваряне на камерата затворете бутилката незабавно и я оставете да достигне стайна температура в ексикатор.Претеглете прецизно тегловната бутилка със запушалка и премерете теглото (W3).Изчислете процентната загуба при изсушаване на пробата, като използвате следната формула:
Изчисление Загуба при сушене (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Съдържание на енантиомери чрез HPLC:
Химикали и реактиви:
n-хексан клас AR
Клас на метанол HPLC
Изопропилов алкохол HPLC качество
Диетиламин клас AR
Стандарти: L-4-нитрофенилаланин метил естер HCl стандарт;L-4-нитрофенилаланин метил естер HCl енантиомер стандарт
Подвижна фаза: Пригответе хомогенна смес от n-хексан, изопропилов алкохол, метанол и диетиламин (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Приготвяне на празна проба: Прехвърлете 2,5 ml метанол в мерителна колба от 10 ml, разредете до обем с подвижна фаза и разбъркайте.
Подготовка за годност на системата:
Претеглете точно и прехвърлете около 5 mg всеки от L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl стандарт и L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl енантиомерен стандарт в мерителна колба от 10 ml, разтворете в около 2,5 ml метанол, разредете до обем с мобилен фаза и се смесват.
Подготовка за теста:
Претеглете точно и прехвърлете около 5 mg проба в мерителна колба от 10 mol, разтворете в около 2,5 ml метанол, разредете до обем с подвижна фаза и разбъркайте.
Инструментални параметри:
Инструмент: HPLC, оборудван с инжектор, помпа, UV детектор и записващо устройство
Колона: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ или еквивалент
Скорост на потока: 1,0 ml/минута
Дължина на вълната: 260nm
Инжекционен обем: 10 μL
Ковен температура на колоната: 25 ℃
Времетраене: 20 минути
Процедура
Инжектирайте разтворите, както е посочено в следната последователност.Запишете хроматограмите и потвърдете критериите:
Описание на инжекции Критерии за брой инжекции
Празен препарат 1 Не трябва да се наблюдава смущаващ пик при времето на задържане на L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl или енантиомер.
Подготовка за пригодност на системата 1 Разделителната способност между L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl и пика на енантиомера трябва да бъде не по-малко от 2,0
Подготовка на теста 1 Използвайте тестова хроматограма, за да определите съдържанието на енантиомер в пробата.
Относителни времена на задържане:
L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCI 1.0
Енантиомер Около 1.11
Времето на задържане на L-4-нитрофенилаланин метил естер HCI е около 9,8 минути.
Изчисление: В хроматограмата, получена от тестовия препарат, пренебрегнете всички пикове, очаквайки L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl и енантиомер.Докладвайте съдържанието на енантиомера в пробата по метода за нормализиране на площта.
Хроматографска чистота и примеси чрез HPLC:
Химикали и реактиви:
Диамониев фосфат клас AR
Фосфорна киселина клас AR
Клас на метанол HPLC
Пречистена вода
Стандарти
L-4-нитрофенилаланин метил естер HCl стандарт
4-Нитро-L-Фенилаланин монохидрат стандарт
Мобилна фаза-А
Разтворете 6,6 g диамониев фосфат в 1000 ml пречистена вода.Коригирайте pH на този разтвор до 6,0 с фосфорна киселина.Филтрирайте и дегазирайте.Преди да измерите pH на разтвора, калибрирайте pH метъра със стандартен буферен разтвор pH 4,01 И 7,00.
Мобилна фаза-B
Клас на метанол HPLC
Подготовка за годност на системата
Претеглете точно и прехвърлете около 25 mg всеки от L-4-нитрофенилаланин метил естер HCl стандарт и 4-нитро-L-фенилаланин монохидрат стандарт в 50-милилитрова мерителна колба, разтворете и разредете до обем с метанол и разбъркайте.
Подготовка на теста:
Претеглете точно и прехвърлете около 25 mg проба в мерителна колба от 50 ml, разтворете и разредете до обем с метанол и разбъркайте.
Инструментални параметри:
Инструмент: HPLC, оборудван с инжектор, помпа, UV детектор и записващо устройство
Колона: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ или еквивалент
Скорост на потока: 1,0 ml/минута
Дължина на вълната: 265nm
Инжекционен обем: 20 μL
Ковен температура на колоната: 25 ℃
Времетраене: 45 минути
Градиентна програма
Време (мин) Мобилна фаза-A % Мобилна фаза-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Процедура:
Инжектирайте разтворите, както е посочено в следната последователност.Запишете хроматограмите и потвърдете критериите:
Празен препарат 1. Не трябва да се наблюдава интерфериращ пик при времето на задържане на L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCI.
Подготовка за пригодност на системата 1 Коефициент на спиране за L-4-нитрофенилаланин метил естер HCl пик трябва да бъде не по-малко от 2,0
Подготовка на теста 1 Използвайте тестова хроматограма, за да определите хроматографската чистота и примесите.
Относителни времена на задържане:
L-4-нитрофенилаланин метилов естер HCl 1.0 (време на задържане около 11.4 минути)
4-нитро-L-фенилаланин около 0,4
Толуен Около 2.3
Изчисления:
В хроматограмата, получена от подготовката за теста, след корекция на празната проба, пренебрегнете пика, дължащ се на толуен.Отчетете хроматографската чистота, съдържанието на 4-нитро-L-фенилаланин и общите примеси в пробата чрез метода за нормализиране на площта.