L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl অ্যাসে >98.5% (HPLC) কারখানা

L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7) এর বিশ্লেষণের পদ্ধতি
বর্ণনা: একটি পরিষ্কার এবং শুকনো পেট্রি-ডিশে প্রায় 2 গ্রাম নমুনা রাখুন এবং নমুনার চেহারাটি পর্যবেক্ষণ করুন।রিপোর্টিং: পর্যবেক্ষণ রিপোর্ট করুন
শনাক্তকরণ: HPLC দ্বারা ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধতায় প্রাপ্ত সিস্টেমের উপযুক্ততা প্রয়োগের ক্রোমাটোগ্রামে প্রধান শিখরের ধারণ সময়ের সাথে পরীক্ষার প্রস্তুতির ক্রোমাটোগ্রামে প্রধান শিখরের ধারণ সময়ের তুলনা করুন।
শুকানোর সময় ক্ষতি: 105±2℃ তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য গ্লাস-স্টপারড, অগভীর ওজনের বোতল শুকিয়ে নিন।এটি একটি ডেসিকেটরে ঘরের তাপমাত্রায় ঠান্ডা হতে দিন।স্টপার দিয়ে ওজনের বোতলটি সঠিকভাবে ওজন করুন এবং ওজন রেকর্ড করুন (W1)।ওজনের বোতলে প্রায় 1 থেকে 2g সঠিকভাবে পরিমিত পরিমানে পরিক্ষা করা পদার্থ স্থানান্তর করুন।মৃদু, পাশের দিকে ঝাঁকুনি দিয়ে, পরীক্ষার নমুনাটি প্রায় 5 মিমি গভীরতায় ব্যবহারযোগ্য হিসাবে সমানভাবে বিতরণ করুন।লোড করা ওজনের বোতলটি ওজন করুন এবং ওজন রেকর্ড করুন (W2)।লোড করা বোতলটি শুকানোর ওভেনে রাখুন, স্টপারটি সরিয়ে চেম্বারে রেখে দিন।পরীক্ষার নমুনাটি 105±2℃ এ 3 ঘন্টার জন্য শুকিয়ে নিন।চেম্বার খোলার পরে, বোতলটি অবিলম্বে বন্ধ করুন এবং এটিকে একটি ডেসিকেটরে ঘরের তাপমাত্রায় আসতে দিন।স্টপার দিয়ে ওজনের বোতলটি সঠিকভাবে ওজন করুন এবং ওজনটি পুনরুদ্ধার করুন (W3)।নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে নমুনা শুকানোর শতকরা হার গণনা করুন:
শুকানোর সময় গণনা ক্ষতি (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
HPLC দ্বারা Enantiomer সামগ্রী:
রাসায়নিক ও বিকারক:
n-হেক্সেন এআর গ্রেড
মিথানল এইচপিএলসি গ্রেড
আইসোপ্রোপাইল অ্যালকোহল এইচপিএলসি গ্রেড
ডাইথাইলামাইন এআর গ্রেড
মান: L-4-নাইট্রোফেনিল্যালানাইন মিথাইল এস্টার এইচসিএল স্ট্যান্ডার্ড;L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl enantiomer মান
মোবাইল ফেজ: এন-হেক্সেন, আইসোপ্রোপাইল অ্যালকোহল, মিথানল এবং ডাইথাইলামাইনের একটি সমজাতীয় মিশ্রণ প্রস্তুত করুন (65:20:15:0.1 v/v/v/v)
ফাঁকা প্রস্তুতি: একটি 10-মিলি ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে 2.5 মিলি মিথানল স্থানান্তর করুন, মোবাইল ফেজ দিয়ে ভলিউমে পাতলা করুন এবং মিশ্রিত করুন।
সিস্টেমের উপযুক্ততা প্রস্তুতি:
সঠিকভাবে ওজন করুন এবং 10-মিলি ভলিউম্যাট্রিক ফ্লাস্কে L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl স্ট্যান্ডার্ড এবং L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl এন্যান্টিওমার স্ট্যান্ডার্ডের প্রায় 5 মিলিগ্রাম স্থানান্তর করুন, প্রায় 2.5 মিলি মিথানলে দ্রবীভূত করুন, মোবাইলের সাথে ভলিউম করুন ফেজ এবং মিশ্রণ.
পরীক্ষা প্রস্তুতি:
সঠিকভাবে ওজন করুন এবং 10-mol ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে প্রায় 5 মিলিগ্রাম নমুনা স্থানান্তর করুন, প্রায় 2.5 মিলি মিথানলে দ্রবীভূত করুন, মোবাইল ফেজ এবং মিশ্রণের সাথে ভলিউমে পাতলা করুন।
ইন্সট্রুমেন্টাল প্যারামিটার:
যন্ত্র: এইচপিএলসি ইনজেক্টর, পাম্প, ইউভি ডিটেক্টর এবং রেকর্ডার দিয়ে সজ্জিত
কলাম: ChiralPak-IC (4.6mm x 250mm) 5 μ বা সমতুল্য
প্রবাহের হার: 1.0 মিলি/মিনিট
তরঙ্গদৈর্ঘ্য: 260nm
ইনজেকশন ভলিউম: 10 μL
কলাম কভেন তাপমাত্রা: 25℃
রান সময়: 20 মিনিট
পদ্ধতি
নিম্নলিখিত অনুক্রমে উল্লিখিত সমাধানগুলি ইনজেকশন করুন।ক্রোমাটোগ্রাম রেকর্ড করুন এবং মানদণ্ড নিশ্চিত করুন:
ইনজেকশনের বর্ণনা ইনজেকশনের মানদণ্ডের সংখ্যা
ফাঁকা প্রস্তুতি 1 L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl বা এন্যান্টিওমার ধরে রাখার সময় কোনও হস্তক্ষেপকারী শিখর লক্ষ্য করা উচিত নয়।
সিস্টেমের উপযুক্ততা প্রস্তুতি 1 L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl এবং enantiomer পিকের মধ্যে রেজোলিউশন 2.0 এর কম হওয়া উচিত নয়
পরীক্ষার প্রস্তুতি 1 নমুনায় এন্যান্টিওমার সামগ্রী নির্ধারণ করতে পরীক্ষার ক্রোমাটোগ্রাম ব্যবহার করুন।
আপেক্ষিক ধরে রাখার সময়:
L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl 1.0
Enantiomer প্রায় 1.11
L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl এর ধরে রাখার সময় প্রায় 9.8 মিনিট।
গণনা: পরীক্ষার প্রস্তুতি থেকে প্রাপ্ত ক্রোমাটোগ্রামে, সমস্ত শিখরগুলিকে উপেক্ষা করুন L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl এবং Enantiomer.এলাকা স্বাভাবিকীকরণ পদ্ধতি দ্বারা নমুনায় enantiomer বিষয়বস্তু রিপোর্ট করুন।
HPLC দ্বারা ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধতা এবং অমেধ্য:
রাসায়নিক ও বিকারক:
ডায়ামোনিয়াম ফসফেট এআর গ্রেড
ফসফরিক অ্যাসিড এআর গ্রেড
মিথানল এইচপিএলসি গ্রেড
বিশুদ্ধ পানি
মান
L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl মান
4-নাইট্রো-এল-ফেনিল্যালানাইন মনোহাইড্রেট মান
মোবাইল ফেজ-A
1000 মিলি বিশুদ্ধ পানিতে 6.6 গ্রাম ডায়ামোনিয়াম ফসফেট দ্রবীভূত করুন।ফসফরিক অ্যাসিডের সাথে এই দ্রবণের pH 6.0 এ সামঞ্জস্য করুন।ফিল্টার এবং degas.দ্রবণের pH পরিমাপ করার আগে, pH মিটারকে স্ট্যান্ডার্ড বাফার দ্রবণ pH 4.01 এবং 7.00 দিয়ে ক্যালিব্রেট করুন।
মোবাইল ফেজ-বি
মিথানল এইচপিএলসি গ্রেড
সিস্টেম উপযুক্ততা প্রস্তুতি
সঠিকভাবে ওজন করুন এবং 50-মিলি ভলিউম্যাট্রিক ফ্লাস্কে L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl স্ট্যান্ডার্ড এবং 4-Nitro-L-ফেনিল্যালানাইন মনোহাইড্রেট স্ট্যান্ডার্ডের প্রায় 25 মিলিগ্রাম স্থানান্তর করুন, মিথেনল এবং মিশ্রণের সাথে দ্রবীভূত করুন এবং ভলিউম করুন।
পরীক্ষা প্রস্তুতি:
সঠিকভাবে ওজন করুন এবং একটি 50-মিলি ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে প্রায় 25 মিলিগ্রাম নমুনা স্থানান্তর করুন, মিথানল এবং মিশ্রণের সাথে দ্রবীভূত করুন এবং ভলিউম করুন।
ইন্সট্রুমেন্টাল প্যারামিটার:
যন্ত্র: এইচপিএলসি ইনজেক্টর, পাম্প, ইউভি ডিটেক্টর এবং রেকর্ডার দিয়ে সজ্জিত
কলাম: XTerra RP-18 (4.6mm x 150mm) 5 μ বা সমতুল্য
প্রবাহের হার: 1.0 মিলি/মিনিট
তরঙ্গদৈর্ঘ্য: 265nm
ইনজেকশন ভলিউম: 20 μL
কলাম কভেন তাপমাত্রা: 25℃
রান সময়: 45 মিনিট
গ্রেডিয়েন্ট প্রোগ্রাম
সময় (মিনিট) মোবাইল ফেজ-এ % মোবাইল ফেজ-বি %
0.01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
পদ্ধতি:
নিম্নলিখিত অনুক্রমে উল্লিখিত সমাধানগুলি ইনজেকশন করুন।ক্রোমাটোগ্রাম রেকর্ড করুন এবং মানদণ্ড নিশ্চিত করুন:
ফাঁকা প্রস্তুতি 1 L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl ধারণ করার সময় কোন হস্তক্ষেপকারী শিখর পর্যবেক্ষণ করা উচিত নয়।
সিস্টেমের উপযুক্ততা প্রস্তুতি 1 L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl পিকের জন্য টেলিং ফ্যাক্টর 2.0 এর কম হওয়া উচিত নয়
পরীক্ষার প্রস্তুতি 1 ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধতা এবং অমেধ্য নির্ধারণ করতে পরীক্ষা ক্রোমাটোগ্রাম ব্যবহার করুন।
আপেক্ষিক ধরে রাখার সময়:
L-4-Nitrophenylalanine মিথাইল এস্টার HCl 1.0 (ধারণ সময় প্রায় 11.4 মিনিট)
4-নাইট্রো-এল-ফেনিল্যালানাইন প্রায় 0.4
টলুইন প্রায় 2.3
গণনা:
পরীক্ষার প্রস্তুতি থেকে প্রাপ্ত ক্রোমাটোগ্রামে, ফাঁকা সংশোধন করার পরে, টলুইনের কারণে শিখরটিকে উপেক্ষা করুন।এলাকা স্বাভাবিকীকরণ পদ্ধতি দ্বারা নমুনায় ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধতা, 4-নাইট্রো-এল-ফেনিল্যালানাইন সামগ্রী এবং মোট অমেধ্য রিপোর্ট করুন।