L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl test >98,5% (HPLC) tvornica

Metoda analize L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Opis: Stavite oko 2 g uzorka u čistu i suhu petrijevu posudu i posmatrajte izgled uzorka.Izvještavanje: Prijavite zapažanje
Identifikacija: Uporedite vreme zadržavanja glavnog pika na hromatogramu preparata za ispitivanje sa vremenom zadržavanja glavnog pika u hromatogramu pripreme za prikladnost sistema kako je dobijeno u hromatografskoj čistoći pomoću HPLC.
Gubitak pri sušenju: Osušite plitku bocu sa staklenim čepom na 105±2℃ 30 minuta.Ostavite da se ohladi na sobnu temperaturu u eksikatoru.Precizno izvažite bocu za vagu sa čepom i zabilježite težinu (W1).Prebacite oko 1 do 2 g tačno izmerene količine ispitivane supstance u bocu za vagu.Laganim, bočnim protresanjem, rasporedite ispitni uzorak što je moguće ravnomjernije na dubinu od oko 5 mm.Izvažite napunjenu bocu za vagu i zabilježite težinu (W2).Stavite napunjenu bocu u sušionicu, uklonite čep i ostavite je također u komori.Sušite ispitni uzorak na 105±2℃ 3 sata.Nakon otvaranja komore, odmah zatvorite bocu i ostavite da se u eksikatoru ohladi na sobnu temperaturu.Precizno izvagati bocu za vagu sa čepom i rekodirati težinu (W3).Izračunajte postotak gubitka pri sušenju uzorka koristeći sljedeću formulu:
Izračun Gubitak pri sušenju (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Sadržaj enantiomera prema HPLC:
Hemikalije i reagensi:
n-heksan AR klasa
Metanol HPLC grade
Izopropil alkohol HPLC grade
Dietilamin AR grade
Standardi: L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard;L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl enantiomer standard
Mobilna faza: Pripremite homogenu mješavinu n-heksana, izopropil alkohola, metanola i dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Prazan preparat: Prebacite 2,5 ml metanola u odmernu tikvicu od 10 ml, razblažite do zapremine sa mobilnom fazom i promešajte.
Priprema za prikladnost sistema:
Precizno odvažite i prenesite oko 5 mg svakog od L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl standarda i L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl enantiomera standarda u volumetrijsku tikvicu od 10 ml, rastvorite u oko 2,5 ml metanola, razblažite do zapremine pomoću mobilnog uređaja fazu i promešati.
Priprema testa:
Precizno odvažite i prebacite oko 5 mg uzorka u volumetrijsku tikvicu od 10 mola, rastvorite u oko 2,5 ml metanola, razblažite do zapremine sa mobilnom fazom i promešajte.
Instrumentalni parametri:
Instrument: HPLC opremljen sa injektorom, pumpom, UV detektorom i snimačem
Kolona: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ ili ekvivalentno
Brzina protoka: 1,0 ml/min
Talasna dužina: 260nm
Zapremina ubrizgavanja: 10 μL
Temperatura ljuske kolone: ​​25℃
Trajanje: 20 minuta
Procedura
Ubrizgajte rastvore kao što je navedeno u sledećem redosledu.Snimite hromatograme i potvrdite kriterijume:
Opis injekcija Kriteriji za broj injekcija
Prazan preparat 1 Ne treba primetiti ometajući vrh u vremenu zadržavanja L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl ili enantiomera.
Priprema za prikladnost sistema 1 Rezolucija između L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl i pika enantiomera ne bi trebala biti manja od 2,0
Priprema testa 1 Koristite test hromatogram da odredite sadržaj enantiomera u uzorku.
Relativna vremena zadržavanja:
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl 1.0
Enantiomer O 1.11
Vrijeme zadržavanja L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl je oko 9,8 minuta.
Proračun: U hromatogramu dobijenom iz pripreme testa, zanemarite sve pikove koji očekuju L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl i enantiomer.Navedite sadržaj enantiomera u uzorku metodom normalizacije površine.
Kromatografska čistoća i nečistoće prema HPLC:
Hemikalije i reagensi:
Diamonijum fosfat AR grade
Fosforna kiselina AR razreda
Metanol HPLC grade
Purified Water
Standardi
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard
Standard 4-nitro-L-fenilalanin monohidrat
Mobilna faza-A
Rastvorite 6,6 g diamonijum fosfata u 1000 ml prečišćene vode.Podesite pH ove otopine na 6,0 pomoću fosforne kiseline.Filtrirati i degas.Prije mjerenja pH otopine, kalibrirajte pH metar sa standardnom puferskom otopinom pH 4,01 I 7,00.
Mobilna faza-B
Metanol HPLC grade
Priprema za prikladnost sistema
Precizno odvažite i prenesite oko 25 mg svakog standarda L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl i standarda 4-nitro-L-fenilalanin monohidrata u volumetrijsku tikvicu od 50 ml, rastvorite i razblažite do zapremine metanolom i promešajte.
Priprema za test:
Precizno odvažite i prebacite oko 25 mg uzorka u volumetrijsku tikvicu od 50 ml, rastvorite i razblažite do zapremine metanolom i promešajte.
Instrumentalni parametri:
Instrument: HPLC opremljen sa injektorom, pumpom, UV detektorom i snimačem
Kolona: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ ili ekvivalentno
Brzina protoka: 1,0 ml/min
Talasna dužina: 265 nm
Zapremina ubrizgavanja: 20 μL
Temperatura ljuske kolone: ​​25℃
Trajanje: 45 minuta
Gradient Program
Vrijeme (min) Mobilna faza-A % Mobilna faza-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedura:
Ubrizgajte rastvore kao što je navedeno u sledećem redosledu.Snimite hromatograme i potvrdite kriterijume:
Prazan preparat 1 Ne treba primetiti ometajući vrh u vremenu zadržavanja L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl.
Priprema prikladnosti sistema 1 Faktor zaostalog za L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl vrh ne bi trebao biti manji od 2,0
Priprema testa 1 Koristite test hromatogram da odredite hromatografsku čistoću i nečistoće.
Relativna vremena zadržavanja:
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl 1,0 (vrijeme zadržavanja oko 11,4 minuta)
4-Nitro-L-Phenylalanine Oko 0,4
Toluen O 2.3
Izračuni:
Na hromatogramu dobijenom pripremom za ispitivanje, nakon slepe korekcije, zanemarite pik zbog toluena.Navedite hromatografsku čistoću, sadržaj 4-Nitro-L-fenilalanina i ukupne nečistoće u uzorku metodom normalizacije površine.