L-4-nitrofenilalanina èster metílic HCl CAS 17193-40-7 Assaig H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl > 98,5% (HPLC) Fàbrica

Mètode d'anàlisi de l'èster metílic de L-4-nitrofenilalanina HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Descripció: Col·loqueu uns 2 g de mostra en una placa de Petri neta i seca i observeu l'aspecte de la mostra.Informar: informar de l'observació
Identificació: compareu el temps de retenció del pic principal en el cromatograma de la preparació d'assaig amb el temps de retenció del pic principal en el cromatograma de preparació d'adequació del sistema obtingut en puresa cromatogràfica per HPLC.
Pèrdua a l'assecat: assequeu una ampolla de pes poc profunda amb tap de vidre a 105 ± 2 ℃ durant 30 minuts.Deixeu-ho refredar a temperatura ambient en un dessecador.Peseu amb precisió l'ampolla de pes amb tap i registreu-ne el pes (W1).Transferiu aproximadament 1 a 2 g de quantitat de substància de prova pesada amb precisió a l'ampolla de pesatge.Mitjançant una agitació suau i lateral, distribuïu la mostra de prova de la manera més uniforme possible a una profunditat d'uns 5 mm.Peseu l'ampolla carregada i registreu-ne el pes (W2).Col·loqueu l'ampolla carregada al forn d'assecatge, traient el tap i deixant-la també a la cambra.Assequeu la mostra de prova a 105 ± 2 ℃ durant 3 hores.En obrir la cambra, tanqueu l'ampolla ràpidament i deixeu-la arribar a temperatura ambient en un dessecador.Peseu amb precisió l'ampolla de pes amb tap i reconegueu el pes (W3).Calculeu el percentatge de pèrdua en l'assecat de la mostra utilitzant la fórmula següent:
Càlcul Pèrdua per assecat (% p/p)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Contingut d'enantiòmers per HPLC:
Químics i reactius:
Grau AR n-hexà
Grau HPLC de metanol
Grau HPLC d'alcohol isopropílic
Dietilamina grau AR
Estàndards: L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl estàndard;L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl enantiòmer estàndard
Fase mòbil: preparar una barreja homogènia de n-hexà, alcohol isopropílic, metanol i dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Preparació en blanc: transferir 2,5 ml de metanol en un matràs aforat de 10 ml, diluir a volum amb fase mòbil i barrejar.
Preparació de l'adequació del sistema:
Pesar amb precisió i transferir uns 5 mg cadascun de l'estàndard de L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl i l'estàndard d'enantiòmer de L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl en un matràs aforat de 10 ml, dissoldre's en uns 2,5 ml de metanol, diluir a volum amb mòbil. fase i barreja.
Preparació de la prova:
Pesar amb precisió i transferir uns 5 mg de mostra en un matràs aforat de 10 mol, dissoldre en uns 2,5 ml de metanol, diluir a volum amb fase mòbil i barrejar.
Paràmetres instrumentals:
Instrument: HPLC equipat amb injector, bomba, detector UV i gravador
Columna: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ o equivalent
Caudal: 1,0 ml/minut
Longitud d'ona: 260 nm
Volum d'injecció: 10 μL
Temperatura de la columna: 25 ℃
Temps d'execució: 20 minuts
Procediment
Injecteu les solucions tal com s'esmenta a la seqüència següent.Anoteu els cromatogrames i confirmeu els criteris:
Descripció de les injeccions Nombre d'injeccions Criteris
Preparació en blanc 1 No s'ha d'observar cap pic d'interferència en el temps de retenció de L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl o enantiòmer.
Preparació de l'adequació del sistema 1 La resolució entre l'èster metílic de L-4-nitrofenilalanina HCl i el pic de l'enantiòmer no hauria de ser inferior a 2,0
Preparació de la prova 1 Utilitzeu el cromatograma de prova per determinar el contingut d'enantiòmers de la mostra.
Temps relatius de retenció:
L-4-nitrofenilalanina èster metílic HCl 1,0
Enantiòmer Sobre 1.11
El temps de retenció de L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl és d'uns 9,8 minuts.
Càlcul: En el cromatograma obtingut de la preparació de la prova, ignora tots els pics esperats L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl i enantiòmer.Informeu el contingut d'enantiòmers a la mostra per mètode de normalització d'àrea.
Puresa i impureses cromatogràfiques per HPLC:
Químics i reactius:
Fosfat diamoni de grau AR
Grau AR àcid fosfòric
Grau HPLC de metanol
Aigua purificada
Normes
L-4-nitrofenilalanina èster metílic HCl estàndard
4-Nitro-L-fenilalanina estàndard monohidrat
Fase mòbil-A
Dissoleu 6,6 g de fosfat diamoni en 1000 ml d'aigua purificada.Ajusteu el pH d'aquesta solució a 6,0 amb àcid fosfòric.Filtrar i desgasificar.Abans de mesurar el pH de la solució, calibra el pH-metre amb una solució tampó estàndard pH 4,01 I 7,00.
Fase mòbil-B
Grau HPLC de metanol
Preparació de la idoneïtat del sistema
Pesar amb precisió i transferir uns 25 mg cadascun de l'estàndard de L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl i l'estàndard de monohidrat de 4-nitro-L-fenilalanina en un matràs aforat de 50 ml, dissoldre-hi i diluir a volum amb metanol i barrejar.
Preparació de la prova:
Pesar amb precisió i transferir uns 25 mg de mostra en un matràs aforat de 50 ml, dissoldre-hi i diluir a volum amb metanol i barrejar.
Paràmetres instrumentals:
Instrument: HPLC equipat amb injector, bomba, detector UV i gravador
Columna: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ o equivalent
Caudal: 1,0 ml/minut
Longitud d'ona: 265 nm
Volum d'injecció: 20 μL
Temperatura de la columna: 25 ℃
Temps d'execució: 45 minuts
Programa de gradients
Temps (min) % Fase mòbil-A % Fase mòbil-B
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procediment:
Injecteu les solucions tal com s'esmenta a la seqüència següent.Anoteu els cromatogrames i confirmeu els criteris:
Preparació en blanc 1 No s'ha d'observar cap pic d'interferència en el temps de retenció de L-4-nitrofenilalanina metil èster HCl.
Preparació de la idoneïtat del sistema 1 El factor de cua per al pic de l'èster metílic de L-4-nitrofenilalanina HCl no hauria de ser inferior a 2,0
Preparació de la prova 1 Utilitzeu el cromatograma de prova per determinar la puresa cromatogràfica i les impureses.
Temps relatius de retenció:
L-4-nitrofenilalanina èster metílic HCl 1,0 (temps de retenció aproximadament 11,4 minuts)
4-Nitro-L-fenilalanina Al voltant de 0,4
Toluè Al voltant de 2.3
Càlculs:
En el cromatograma obtingut a partir de la preparació de la prova, després de la correcció en blanc, ignorar el pic degut al toluè.Informar de la puresa cromatogràfica, el contingut de 4-Nitro-L-fenilalanina i les impureses totals de la mostra pel mètode de normalització de l'àrea.