L-4-nitrofenylalanin methylester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl test >98,5 % (HPLC) továrna

Metoda analýzy methylesteru L-4-nitrofenylalaninu HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Popis: Vložte asi 2 g vzorku do čisté a suché Petriho misky a sledujte vzhled vzorku.Hlášení: Oznamte pozorování
Identifikace: Porovnejte retenční čas hlavního píku na chromatogramu zkoušeného přípravku s retenčním časem hlavního píku na chromatogramu přípravy systému vhodnosti získaného v chromatografické čistotě pomocí HPLC.
Ztráta sušením: Mělkou navažovačku se skleněnou zátkou sušte 30 minut při teplotě 105 ± 2 °C.Nechte vychladnout na pokojovou teplotu v exsikátoru.Zvažte přesně váženku se zátkou a zaznamenejte hmotnost (W1).Přeneste asi 1 až 2 g přesně odváženého množství zkoušené látky do váženky.Jemným bočním třepáním rozmístěte zkušební vzorek co nejrovnoměrněji do hloubky asi 5 mm.Zvažte naplněnou váženku a zaznamenejte hmotnost (W2).Vložte naplněnou láhev do sušárny, odstraňte zátku a ponechte ji také v komoře.Vysušte zkušební vzorek při 105 ± 2 °C po dobu 3 hodin.Po otevření komory lahvičku ihned uzavřete a v exsikátoru ji nechte ohřát na pokojovou teplotu.Zvažte přesně váženku se zátkou a znovu zvažte váhu (W3).Vypočítejte procentuální ztrátu sušením vzorku pomocí následujícího vzorce:
Výpočet Ztráta sušením (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Obsah enantiomerů pomocí HPLC:
Chemikálie a činidla:
Třída n-Hexane AR
Methanol HPLC čistoty
Isopropylalkohol HPLC čistoty
Diethylamin třídy AR
Standardy: L-4-nitrofenylalanin methylester HCl standard;L-4-nitrofenylalanin methylester HCl standard enantiomeru
Mobilní fáze: Připravte homogenní směs n-hexanu, isopropylalkoholu, methanolu a diethylaminu (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Příprava slepého pokusu: Přeneste 2,5 ml methanolu do 10ml odměrné baňky, zřeďte na objem mobilní fází a promíchejte.
Příprava na vhodnost systému:
Přesně zvažte a přeneste asi 5 mg každého standardu L-4-nitrofenylalanin methylester HCl a standardu enantiomeru L-4-nitrofenylalanin methylester HCl do 10ml odměrné baňky, rozpusťte v asi 2,5 ml methanolu, zřeďte na objem mobilním fáze a promíchejte.
Příprava na zkoušku:
Přesně zvážíme a přeneseme asi 5 mg vzorku do odměrné baňky na 10 mol, rozpustíme v asi 2,5 ml methanolu, zředíme na objem mobilní fází a promícháme.
Instrumentální parametry:
Přístroj: HPLC vybavená injektorem, pumpou, UV detektorem a záznamníkem
Kolona: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ nebo ekvivalent
Průtok: 1,0 ml/min
Vlnová délka: 260nm
Objem nástřiku: 10 μL
Teplota pece kolony: 25℃
Doba chodu: 20 minut
Postup
Vstříkněte roztoky, jak je uvedeno v následujícím pořadí.Zaznamenejte chromatogramy a potvrďte kritéria:
Popis injekcí Kritéria počtu injekcí
Slepá příprava 1 V retenčním čase L-4-nitrofenylalaninu methylester HCl nebo enantiomeru by neměl být pozorován žádný interferující pík.
Příprava vhodnosti systému 1 Rozlišení mezi L-4-nitrofenylalanin methylester HCl a pikem enantiomeru by nemělo být menší než 2,0
Příprava testu 1 Pro stanovení obsahu enantiomerů ve vzorku použijte testovací chromatogram.
Relativní doby uchování:
L-4-nitrofenylalanin methylester HC1 1,0
Enantiomer O 1.11
Retenční čas L-4-nitrofenylalaninu methylester HCl je asi 9,8 minut.
Výpočet: Na chromatogramu získaného ze zkušebního přípravku se neberou v úvahu všechny píky očekávané L-4-nitrofenylalanin methylester HCl a enantiomer.Uveďte obsah enantiomerů ve vzorku metodou plošné normalizace.
Chromatografická čistota a nečistoty pomocí HPLC:
Chemikálie a činidla:
Fosforečnan amonný třídy AR
Kyselina fosforečná AR grade
Methanol HPLC čistoty
Čištěná voda
Normy
L-4-nitrofenylalanin Methylester HCl standard
Standardní monohydrát 4-nitro-L-fenylalanin
Mobilní fáze-A
Rozpusťte 6,6 g fosforečnanu amonného v 1000 ml přečištěné vody.Upravte pH tohoto roztoku na 6,0 kyselinou fosforečnou.Filtrovat a odplyňovat.Před měřením pH roztoku zkalibrujte pH metr standardním tlumivým roztokem pH 4,01 A 7,00.
Mobilní fáze B
Methanol HPLC čistoty
Příprava na vhodnost systému
Přesně zvažte a přeneste asi 25 mg každého standardu L-4-nitrofenylalanin methylester HCl a standardu monohydrátu 4-nitro-L-fenylalaninku do 50ml odměrné baňky, rozpusťte a zřeďte na požadovaný objem methanolem a promíchejte.
Příprava testu:
Přesně se zváží a přenese se asi 25 mg vzorku do 50ml odměrné baňky, rozpustí se a zředí se na objem methanolem a promíchá se.
Instrumentální parametry:
Přístroj: HPLC vybavená injektorem, pumpou, UV detektorem a záznamníkem
Sloupec: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ nebo ekvivalent
Průtok: 1,0 ml/min
Vlnová délka: 265nm
Objem nástřiku: 20 μL
Teplota pece kolony: 25℃
Doba chodu: 45 minut
Gradientní program
Čas (min) Mobilní fáze-A % Mobilní fáze-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Postup:
Vstříkněte roztoky, jak je uvedeno v následujícím pořadí.Zaznamenejte chromatogramy a potvrďte kritéria:
Slepá příprava 1 Při retenčním čase L-4-nitrofenylalaninu methylester HCl by neměl být pozorován žádný interferující pík.
Příprava vhodnosti systému 1 Koncový faktor pro vrchol L-4-nitrofenylalanin methylester HCl by neměl být menší než 2,0
Příprava testu 1 Ke stanovení chromatografické čistoty a nečistot použijte testovací chromatogram.
Relativní doby uchování:
L-4-nitrofenylalanin methylester HCl 1,0 (retenční čas asi 11,4 minut)
4-Nitro-L-fenylalanin Asi 0,4
Toluen Asi 2.3
Výpočty:
Na chromatogramu zkoušeného přípravku se po slepé korekci k píku toluenu nepřihlíží.Uveďte chromatografickou čistotu, obsah 4-nitro-L-fenylalaninu a celkové nečistoty ve vzorku metodou plošné normalizace.