L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98,5% (HPLC) Fabrik

Analysemetode af L-4-nitrophenylalaninmethylester-HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Beskrivelse: Anbring ca. 2 g prøve i en ren og tør petriskål, og observer prøvens udseende.Rapportering: Rapportér observationen
Identifikation: Sammenlign retentionstiden for hovedtoppen i kromatogrammet af testpræparatet med retentionstiden for hovedtoppen i kromatogrammet af systemegnethedsfremstilling som opnået i kromatografisk renhed ved HPLC.
Tab ved tørring: Tør en flad vejeflaske med glasprop ved 105±2℃ i 30 minutter.Lad det køle af til stuetemperatur i en ekssikkator.Vej nøjagtigt vejeflasken med prop og noter vægten (W1).Overfør ca. 1 til 2 g nøjagtigt afvejet mængde teststof til vejeflasken.Ved forsigtig rystning til siden fordeles prøveemnet så jævnt som muligt til en dybde på ca. 5 mm.Vej den fyldte vejeflaske og noter vægten (W2).Placer den fyldte flaske i tørreovnen, fjern proppen og lad den også blive i kammeret.Tør testprøven ved 105±2℃ i 3 timer.Luk flasken straks efter åbning af kammeret, og lad den nå stuetemperatur i en ekssikkator.Vej nøjagtigt vejeflasken med prop og gentag vægten (W3).Beregn det procentvise tab ved tørring af prøven ved at bruge følgende formel:
Beregningstab ved tørring (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomerindhold ved HPLC:
Kemikalier og reagenser:
n-hexan AR-kvalitet
Methanol HPLC kvalitet
Isopropylalkohol HPLC-kvalitet
Diethylamin AR-kvalitet
Standarder: L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl standard;L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer standard
Mobil fase: Forbered en homogen blanding af n-hexan, isopropylalkohol, methanol og diethylamin (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Blankforberedelse: Overfør 2,5 ml methanol i en 10 ml målekolbe, fortynd til volumen med mobil fase og bland.
Forberedelse af systemegnethed:
Vej nøjagtigt og overfør ca. 5 mg hver af L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl standard og L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer standard i en 10 ml målekolbe, opløs i ca. 2,5 ml methanol, fortynd til volumen med mobil fase og bland.
Testforberedelse:
Vej nøjagtigt og overfør ca. 5 mg prøve i en 10-mol målekolbe, opløs i ca. 2,5 ml methanol, fortynd til volumen med mobil fase og bland.
Instrumentelle parametre:
Instrument: HPLC udstyret med injektor, pumpe, UV-detektor og optager
Kolonne: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ eller tilsvarende
Flowhastighed: 1,0 ml/minut
Bølgelængde: 260nm
Injektionsvolumen: 10 μL
Kolonnetemperatur: 25℃
Køretid: 20 minutter
Procedure
Injicer opløsningerne som nævnt i følgende rækkefølge.Optag kromatogrammerne og bekræft kriterierne:
Beskrivelse af injektioner Kriterier for antal injektioner
Blindpræparation 1 Der bør ikke observeres nogen interfererende top ved retentionstiden for L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl eller enantiomer.
Forberedelse af systemegnethed 1 Opløsning mellem L-4-nitrophenylalaninmethylester HCl og enantiomer-top bør ikke være mindre end 2,0
Testforberedelse 1 Brug testkromatogram til at bestemme enantiomerindholdet i prøven.
Relative opbevaringstider:
L-4-nitrophenylalaninmethylester HCI 1,0
Enantiomer ca. 1.11
Retentionstiden for L-4-nitrophenylalaninmethylester-HCl er ca. 9,8 minutter.
Beregning: I kromatogrammet opnået fra testforberedelsen ses bort fra alle toppe, der forventes L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl og Enantiomer.Rapporter enantiomerindholdet i prøven efter områdenormaliseringsmetode.
Kromatografisk renhed og urenheder ved HPLC:
Kemikalier og reagenser:
Diammoniumphosphat AR-kvalitet
Fosforsyre AR-kvalitet
Methanol HPLC kvalitet
Demineraliseret vand
Standarder
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl standard
4-Nitro-L-Phenylalanin monohydrat standard
Mobil fase-A
Opløs 6,6 g diammoniumphosphat i 1000 ml renset vand.Juster pH af denne opløsning til 6,0 med phosphorsyre.Filter og afgas.Før måling af opløsningens pH, skal pH-meteret kalibreres med standard bufferopløsning pH 4,01 OG 7,00.
Mobil fase-B
Methanol HPLC kvalitet
Forberedelse af systemegnethed
Vej nøjagtigt og overfør ca. 25 mg hver af L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl standard og 4-Nitro-L-Phenylalanin monohydrat standard i en 50 ml målekolbe, opløs i og fortynd til volumen med methanol og bland.
Testforberedelse:
Vej nøjagtigt og overfør ca. 25 mg prøve i en 50 ml målekolbe, opløs i og fortynd til volumen med methanol og bland.
Instrumentelle parametre:
Instrument: HPLC udstyret med injektor, pumpe, UV-detektor og optager
Kolonne: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ eller tilsvarende
Flowhastighed: 1,0 ml/minut
Bølgelængde: 265nm
Injektionsvolumen: 20 μL
Kolonnetemperatur: 25℃
Køretid: 45 minutter
Gradient program
Tid (min) Mobil fase-A % Mobil fase-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedure:
Injicer opløsningerne som nævnt i følgende rækkefølge.Optag kromatogrammerne og bekræft kriterierne:
Blindpræparation 1 Der bør ikke observeres nogen interfererende top ved retentionstiden for L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl.
Forberedelse af systemegnethed 1 Tailing faktor for L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl top bør være ikke mindre end 2,0
Testforberedelse 1 Brug testkromatogram til at bestemme kromatografisk renhed og urenheder.
Relative opbevaringstider:
L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl 1,0 (retentionstid ca. 11,4 minutter)
4-Nitro-L-Phenylalanin Ca. 0,4
Toluen Omkring 2,3
Beregninger:
I kromatogrammet opnået fra prøveforberedelsen ses der efter blindkorrektion bort fra toppen på grund af toluen.Rapporter den kromatografiske renhed, 4-Nitro-L-Phenylalanin-indholdet og de totale urenheder i prøven efter områdenormaliseringsmetode.