Ursodeoxycholsyre (UDCA) CAS 128-13-2-analyse 99,0~101,0%

URSODEOXYCHOLSYRE
C24H40O4 Mr 392,6[128-13-2]
DEFINITION
3α,7β-dihydroxy-5β-cholan-24-olsyre.
Indhold: 99,0 procent til 101,0 procent (tørret stof).
KARAKTERER
Udseende: hvidt eller næsten hvidt pulver.
Opløselighed: praktisk talt uopløselig i vand, frit opløselig i ethanol (96 procent), let opløselig i acetone, praktisk talt uopløselig i methylenchlorid.
mp: omkring 202 ℃.
IDENTIFIKATION
Første identifikation: A.
Anden identifikation: B, C.
A. Infrarød absorptionsspektrofotometri (2.2.24).
Sammenligning: Ursodeoxycholsyre CRS.
B. Undersøg kromatogrammerne opnået i testen for urenhed C.
Resultater: Den primære plet i kromatogrammet opnået med testopløsning (b) svarer i position, farve og størrelse til den primære plet i kromatogrammet opnået med referenceopløsning (a).
C. Opløs ca. 10 mg i 1 mL svovlsyre R. Tilsæt 0,1 mL formaldehydopløsning R og lad det stå i 5 min.Tilsæt 5 mL vand R. Den opnåede suspension er grønlig-blå.
PRØVER
Specifik optisk rotation (2.2.7): + 58,0 til + 62,0 (tørret stof).
Opløs 0,500 g i vandfri ethanol R og fortynd til 25,0 ml med det samme opløsningsmiddel.
Urenhed C. Tyndtlagskromatografi (2.2.27).
Opløsningsmiddelblanding: vand R, acetone R (10:90 V/V).
Testopløsning (a).Opløs 0,40 g af stoffet, der skal undersøges, i opløsningsmiddelblandingen og fortynd til 10 ml med opløsningsmiddelblandingen.
Testopløsning (b).Fortynd 1 mL testopløsning (a) til 10 mL med opløsningsmiddelblandingen.
Referenceløsning (a).Opløs 40 mg ursodeoxycholsyre CRS i opløsningsmiddelblandingen og fortynd til 10 ml med opløsningsmiddelblandingen.
Referenceløsning (b).Opløs 20 mg lithocholsyre CRS (urenhed C) i opløsningsmiddelblandingen og fortynd til 10,0 ml med opløsningsmiddelblandingen (opløsning A).Fortynd 2,0 mL af denne opløsning til 100,0 mL med opløsningsmiddelblandingen.
Referenceløsning (c).Til 5 mL opløsning A tilsættes 10 mg chenodeoxycholsyre CRS (urenhed A) og fortynd til 50 mL med opløsningsmiddelblandingen.
Plade: TLC silicagel plade R.
Mobil fase: iseddike R, acetone R, methylenchlorid R (1:30:60 V/V/V).
Anvendelse: 5μL.
Udvikling: over 2/3 af pladen.
Tørring: ved 120℃ i 10 min.
Påvisning: Spray straks med en 47,6 g/L opløsning af phosphomolybdinsyre R i en blanding af 1 volumen svovlsyre R og 20 volumener iseddike R og opvarm ved 120 ℃ indtil blå pletter vises på en lysere baggrund.
Systemegnethed: referenceløsning (c):
- kromatogrammet viser 2 klart adskilte hovedpletter.
Grænse: testopløsning (a):
-urenhed C: enhver plet, der skyldes urenhed C, er ikke mere intens end den primære plet i kromatogrammet opnået med referenceopløsning (b) (0,1 %).
Beslægtede stoffer.Væskekromatografi (2.2.29).
Opløsningsmiddelblanding: methanol R, mobil fase (10:90 V/V).
Test løsning.Opløs 60 mg af stoffet, der skal undersøges, i opløsningsmiddelblandingen og fortynd til 20,0 mL med opløsningsmiddelblandingen.
Referenceløsning (a).Opløs indholdet af et hætteglas med Ursodeoxycholsyre for systemegnethed CRS (indeholdende urenheder A og H) i 1,0 ml af opløsningsmiddelblandingen.
Referenceløsning (b).Fortynd 1,0 mL af testopløsningen til 100,0 mL med opløsningsmiddelblandingen.Fortynd 1,0 mL af denne opløsning til 10,0 mL med opløsningsmiddelblandingen.
Kolonne:
-størrelse: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm;
-stationær fase: endeafsluttet octadecylsilyl silicagel tilkromatografi R (5 μm);
- temperatur: 40℃ ± 1℃.
Mobil fase: Bland 30 volumener acetonitril R, 37 volumener af en 0,78 g/L opløsning af natriumdihydrogenphosphat R justeret til pH 3 med phosphorsyre R og 40 volumener methanol R.
Flowhastighed: 0,8 ml/min.
Detektion: refraktometer ved 35 ± 1 ℃.
Injektion: 150 μL.
Køretid: 4 gange retentionstiden for Ursodeoxycholsyre.
Identifikation af urenheder: Brug kromatogrammet, der leveres med ursodeoxycholsyre til systemegnethed CRS og kromatogrammet opnået med referenceopløsning (a) til at identificere toppene på grund af urenheder A og H.
Relativ retention med reference til ursodeoxycholsyre (retentionstid = ca. 14 min): urenhed H = ca. 0,9;urenhed A = ca. 2,8.
Systemegnethed: referenceløsning (a):
-opløsning: minimum 1,5 mellem toppene på grund af urenhed H og ursodeoxycholsyre.
Grænser:
- urenhed A: ikke mere end 10 gange arealet af hovedtoppen i kromatogrammet opnået med referenceopløsning (b) (1,0 %);
-uspecificerede urenheder: for hver urenhed ikke mere end arealet af hovedtoppen i kromatogrammet opnået med referenceopløsning (b) (0,10 %);
- i alt: ikke mere end 15 gange arealet af hovedtoppen i kromatogrammet opnået med referenceopløsning (b) (1,5 %);
- se bort fra grænsen: 0,5 gange arealet af hovedtoppen i kromatogrammet opnået med referenceopløsning (b) (0,05 procent).
Tungmetaller (2.4.8): maksimalt 20 ppm.
1,0 g opfylder test C. Forbered referenceopløsningen med 2 ml blystandardopløsning (10 ppm Pb) R.
Tab ved tørring (2.2.32): maksimalt 1,0 procent, bestemt på 1.000 g ved tørring i ovn ved 105℃.
Sulfateret aske (2.4.14): maksimalt 0,1 pct., bestemt på 1,0 g.
ASSAY
Opløs 0,350 g i 50 ml ethanol (96 %) R, tidligere neutraliseret til 0,2 ml phenolphtaleinopløsning R. Tilsæt 50 ml vand R og titrér med 0,1 M natriumhydroxid, indtil der opnås en lyserød farve.
1 ml 0,1 M natriumhydroxid svarer til 39,26 mg C24H40O4.
URENHEDER
Specificerede urenheder: A, C.
Andre påviselige urenheder (følgende stoffer ville, hvis de er til stede i et tilstrækkeligt niveau, blive påvist ved en eller anden af ​​testene i monografien. De er begrænset af det generelle acceptkriterium for andre/uspecificerede urenheder og/eller af den generelle monografi Stoffer til farmaceutisk brug (2034) Det er derfor ikke nødvendigt at identificere disse urenheder for at påvise overensstemmelse Se også 5.10.
Kontrol af urenheder i stoffer til farmaceutisk brug): B, D, E, F, G, H, I.
A. 3α,7α-dihydroxy-5β-cholan-24-oic acid (chenodeoxycholsyre),
B. 3α,7α,12α-trihydroxy-5β-cholan-24-oic acid (cholsyre),
C. 3α-hydroxy-5β-cholan-24-oic acid (litocholsyre),
D. 3α,7β,12α-trihydroxy-5β-cholan-24-oic acid (ursocholsyre),
E. 3α,12α-dihydroxy-5β-cholan-24-oic acid (deoxycholsyre),
F. 3α-hydroxy-7-oxo-5β-cholan-24-oic acid,
G. methyl-3α,7β-dihydroxy-5β-cholan-24-oat,
H. 3β,7β-dihydroxy-5β-cholan-24-oic acid,
I. 5β-cholan-3a,7β,24-triol.