L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98,5% (HPLC) Factory

Μέθοδος Ανάλυσης L-4-Νιτροφαινυλαλανίνης Μεθυλεστέρα HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Περιγραφή: Τοποθετήστε περίπου 2 g δείγματος σε καθαρό και στεγνό τρυβλίο petri και παρατηρήστε την εμφάνιση του δείγματος.Αναφορά: Αναφέρετε την παρατήρηση
Αναγνώριση: Συγκρίνετε το χρόνο κατακράτησης της κύριας κορυφής στο χρωματογράφημα του παρασκευάσματος δοκιμής με το χρόνο κατακράτησης της κύριας κορυφής στο χρωματογράφημα προετοιμασίας καταλληλότητας συστήματος όπως λήφθηκε σε χρωματογραφική καθαρότητα με HPLC.
Απώλεια κατά το στέγνωμα: Στεγνώστε ένα μπουκάλι με γυάλινο πώμα, ρηχό ζύγισμα στους 105±2℃ για 30 λεπτά.Αφήστε το να κρυώσει σε θερμοκρασία δωματίου σε έναν ξηραντήρα.Ζυγίστε με ακρίβεια τη φιάλη ζύγισης με πώμα και καταγράψτε το βάρος (W1).Μεταφέρετε περίπου 1 έως 2 g επακριβώς ζυγισμένης ποσότητας ελεγχόμενης ουσίας στη φιάλη ζύγισης.Με απαλή, πλευρική ανακίνηση, κατανείμετε το δείγμα όσο πιο ομοιόμορφα είναι δυνατόν σε βάθος περίπου 5 mm.Ζυγίστε τη φορτωμένη φιάλη ζύγισης και καταγράψτε το βάρος (W2).Τοποθετήστε το φορτωμένο μπουκάλι στο φούρνο στεγνώματος, αφαιρώντας το πώμα και αφήνοντάς το επίσης στο θάλαμο.Ξηράνετε το δείγμα δοκιμής στους 105±2℃ για 3 ώρες.Με το άνοιγμα του θαλάμου, κλείστε τη φιάλη αμέσως και αφήστε τη να έρθει σε θερμοκρασία δωματίου σε ξηραντήρα.Ζυγίστε με ακρίβεια τη φιάλη ζύγισης με πώμα και επαναλάβετε το βάρος (W3).Υπολογίστε την ποσοστιαία απώλεια κατά την ξήρανση του δείγματος χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο:
Υπολογισμός Απώλεια κατά το στέγνωμα (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Περιεχόμενο εναντιομερούς από HPLC:
Χημικά & Αντιδραστήρια:
n-εξάνιο βαθμού AR
Ποιότητα μεθανόλης HPLC
Ισοπροπυλική αλκοόλη ποιότητας HPLC
Διαιθυλαμίνη βαθμού AR
Πρότυπα: Πρότυπο HCl L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester.Πρότυπο εναντιομερούς HCl L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester
Κινητή Φάση: Προετοιμάστε ένα ομοιογενές μείγμα n-εξανίου, ισοπροπυλικής αλκοόλης, μεθανόλης και διαιθυλαμίνης (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Τυφλό Παρασκευή: Μεταφέρετε 2,5 ml Μεθανόλης σε ογκομετρική φιάλη 10 ml, αραιώστε τον όγκο με κινητή φάση και αναμίξτε.
Προετοιμασία καταλληλότητας συστήματος:
Ζυγίστε με ακρίβεια και μεταφέρετε περίπου 5 mg καθένα από το πρότυπο εναντιομερούς μεθυλεστέρα HCl L-4-νιτροφαινυλαλανίνης και εναντιομερούς μεθυλεστέρα HCl L-4-νιτροφαινυλαλανίνης σε ογκομετρική φιάλη των 10 ml, διαλύστε σε περίπου 2,5 ml μεθανόλης, αραιώστε σε όγκο με κινητό φάση και ανακατεύουμε.
Προετοιμασία δοκιμής:
Ζυγίστε με ακρίβεια και μεταφέρετε περίπου 5 mg δείγματος σε ογκομετρική φιάλη 10 mol, διαλύστε σε περίπου 2,5 ml μεθανόλης, αραιώστε σε όγκο με κινητή φάση και αναμίξτε.
Παράμετροι οργάνων:
Όργανο: HPLC εξοπλισμένο με εγχυτήρα, αντλία, ανιχνευτή UV και συσκευή εγγραφής
Στήλη: ChiralPak-IC (4,6mm x 250mm) 5 μ ή ισοδύναμο
Ρυθμός ροής: 1,0 ml/λεπτό
Μήκος κύματος: 260 nm
Όγκος ένεσης: 10 μL
Θερμοκρασία στρώσης στήλης: 25℃
Διάρκεια παράστασης: 20 λεπτά
Διαδικασία
Ενέσετε τα διαλύματα όπως αναφέρεται στην ακόλουθη σειρά.Καταγράψτε τα χρωματογραφήματα και επιβεβαιώστε τα κριτήρια:
Περιγραφή των ενέσεων Αριθμός ενέσεων Κριτήρια
Τυφλό παρασκεύασμα 1 Δεν πρέπει να παρατηρείται αιχμή παρεμβολής στο χρόνο κατακράτησης του μεθυλεστέρα HCl της L-4-νιτροφαινυλαλανίνης ή του εναντιομερούς.
Προετοιμασία καταλληλότητας συστήματος 1 Η ανάλυση μεταξύ του L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl και της κορυφής του εναντιομερούς δεν πρέπει να είναι μικρότερη από 2,0
Προετοιμασία δοκιμής 1 Χρησιμοποιήστε το χρωματογράφημα δοκιμής για να προσδιορίσετε την περιεκτικότητα σε εναντιομερές στο δείγμα.
Σχετικοί χρόνοι διατήρησης:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0
Εναντιομερές Περίπου 1.11
Ο χρόνος κατακράτησης του L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl είναι περίπου 9,8 λεπτά.
Υπολογισμός: Στο χρωματογράφημα που λαμβάνεται από την προετοιμασία της δοκιμής, αγνοήστε όλες τις κορυφές που αναμένονται L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl και Εναντιομερές.Αναφέρετε την περιεκτικότητα σε εναντιομερές στο δείγμα κατά μέθοδο κανονικοποίησης περιοχής.
Χρωματογραφική καθαρότητα και ακαθαρσίες με HPLC:
Χημικά & Αντιδραστήρια:
Φωσφορικό διαμμώνιο ποιότητας AR
Φωσφορικό οξύ βαθμού AR
Ποιότητα μεθανόλης HPLC
Εξαγνισμένο νερό
Πρότυπα
Πρότυπο HCl L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester
Πρότυπο μονοϋδρικής 4-νιτρο-L-φαινυλαλανίνης
Κινητή Φάση-Α
Διαλύστε 6,6 g φωσφορικού διαμμωνίου σε 1000 ml καθαρού νερού.Ρυθμίστε το pH αυτού του διαλύματος στο 6,0 με Φωσφορικό οξύ.Φιλτράρισμα και απαέρωση.Πριν μετρήσετε το pH του διαλύματος, βαθμονομήστε το pHόμετρο με τυπικό ρυθμιστικό διάλυμα pH 4,01 ΚΑΙ 7,00.
Κινητή Φάση-Β
Ποιότητα μεθανόλης HPLC
Προετοιμασία καταλληλότητας συστήματος
Ζυγίστε με ακρίβεια και μεταφέρετε περίπου 25 mg καθένα από τα πρότυπα L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl και 4-Nitro-L-Phenylalanine Standard σε ογκομετρική φιάλη 50 ml, διαλύστε και αραιώστε σε όγκο με μεθανόλη και αναμίξτε.
Προετοιμασία δοκιμής:
Ζυγίζεται με ακρίβεια και μεταφέρεται δείγμα περίπου 25 mg σε ογκομετρική φιάλη των 50 ml, διαλύεται και αραιώνεται σε όγκο με μεθανόλη και αναμειγνύεται.
Παράμετροι οργάνων:
Όργανο: HPLC εξοπλισμένο με εγχυτήρα, αντλία, ανιχνευτή UV και συσκευή εγγραφής
Στήλη: XTerra RP-18 (4,6mm x 150mm) 5 μ ή ισοδύναμο
Ρυθμός ροής: 1,0 ml/λεπτό
Μήκος κύματος: 265 nm
Όγκος ένεσης: 20 μL
Θερμοκρασία στρώσης στήλης: 25℃
Διάρκεια παράστασης: 45 λεπτά
Πρόγραμμα Gradient
Χρόνος (λεπτά) Φάση κινητής τηλεφωνίας-Α % Φάση κινητής τηλεφωνίας-Β %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Διαδικασία:
Ενέσετε τα διαλύματα όπως αναφέρεται στην ακόλουθη σειρά.Καταγράψτε τα χρωματογραφήματα και επιβεβαιώστε τα κριτήρια:
Τυφλό παρασκεύασμα 1 Δεν πρέπει να παρατηρείται αιχμή παρεμβολής στο χρόνο κατακράτησης του HCl μεθυλεστέρα της L-4-νιτροφαινυλαλανίνης.
Προετοιμασία καταλληλότητας συστήματος 1 Ο παράγοντας ουράς για την κορυφή HCl μεθυλεστέρα L-4-Nitrophenylalanine δεν πρέπει να είναι μικρότερος από 2,0
Προετοιμασία δοκιμής 1 Χρησιμοποιήστε το χρωματογράφημα δοκιμής για τον προσδιορισμό της χρωματογραφικής καθαρότητας και των προσμίξεων.
Σχετικοί χρόνοι διατήρησης:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (χρόνος κατακράτησης περίπου 11,4 λεπτά)
4-Νιτρο-L-Φαινυλαλανίνη Περίπου 0,4
Τολουόλιο Περίπου 2,3
Υπολογισμοί:
Στο χρωματογράφημα που λαμβάνεται από την προετοιμασία της δοκιμής, μετά τη διόρθωση του τυφλού, αγνοήστε την κορυφή που οφείλεται στο τολουόλιο.Αναφέρετε τη χρωματογραφική καθαρότητα, την περιεκτικότητα σε 4-Nitro-L-φαινυλαλανίνη και τις συνολικές ακαθαρσίες στο δείγμα κατά μέθοδο κανονικοποίησης περιοχής.