L-4-Nitrofenilalanina Metiléster HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Ensayo >98,5% (HPLC) Fábrica

Método de análisis del éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Descripción: Coloque unos 2 g de muestra en una placa de Petri limpia y seca y observe el aspecto de la muestra.Reporte: Reporte la observación
Identificación: Compare el tiempo de retención del pico principal en el cromatograma de la preparación de prueba con el tiempo de retención del pico principal en el cromatograma de la preparación de idoneidad del sistema según se obtiene en pureza cromatográfica por HPLC.
Pérdida por secado: seque una botella de pesaje poco profunda con tapón de vidrio a 105 ± 2 ℃ durante 30 minutos.Deje que se enfríe a temperatura ambiente en un desecador.Pese con precisión el frasco de pesaje con tapón y registre el peso (W1).Transfiera alrededor de 1 a 2 g de la cantidad de sustancia de prueba, pesada con precisión, a la botella de pesaje.Agitando suavemente lateralmente, distribuya la muestra de ensayo tan uniformemente como sea posible hasta una profundidad de unos 5 mm.Pese la botella de pesaje cargada y registre el peso (W2).Colocar la botella cargada en el horno de secado, quitando el tapón y dejándola también en la cámara.Seque la muestra de prueba a 105±2 ℃ durante 3 horas.Al abrir la cámara, cierre la botella rápidamente y deje que alcance la temperatura ambiente en un desecador.Pesar con precisión el frasco de pesaje con tapón y volver a pesar (W3).Calcular el porcentaje de pérdida por secado de la muestra usando la siguiente fórmula:
Cálculo Pérdida por secado (% p/p)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Contenido de enantiómeros por HPLC:
Reactivos químicos:
Grado AR de n-hexano
Metanol grado HPLC
Grado HPLC de alcohol isopropílico
Dietilamina grado AR
Estándares: L-4-Nitrofenilalanina Metil Éster HCl estándar;Estándar de enantiómero HCl de L-4-nitrofenilalanina metil éster
Fase Móvil: Preparar una mezcla homogénea de n-Hexano, Alcohol Isopropílico, Metanol y Dietilamina (65:20:15:0.1 v/v/v/v)
Preparación del Blanco: Transferir 2,5 ml de Metanol a un matraz aforado de 10 ml, diluir a volumen con fase móvil y mezclar.
Preparación de la idoneidad del sistema:
Pesar con precisión y transferir aproximadamente 5 mg de cada uno de los estándares de HCl de éster metílico de L-4-nitrofenilalanina y estándar de enantiómero de HCl de éster metílico de L-4-nitrofenilalanina en un matraz volumétrico de 10 ml, disolver en aproximadamente 2,5 ml de metanol, diluir al volumen fase y mezcla.
Examen de preparación:
Pesar con precisión y transferir unos 5 mg de muestra a un matraz aforado de 10 mol, disolver en unos 2,5 ml de metanol, diluir al volumen con fase móvil y mezclar.
Parámetros instrumentales:
Instrumento: HPLC equipado con inyector, bomba, detector UV y registrador
Columna: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ o equivalente
Caudal: 1,0 ml/minuto
Longitud de onda: 260nm
Volumen de inyección: 10 μL
Temperatura del aquelarre de columna: 25 ℃
Tiempo de ejecución: 20 minutos
Procedimiento
Inyecte las soluciones como se menciona en la siguiente secuencia.Registre los cromatogramas y confirme los criterios:
Descripción de las inyecciones Número de inyecciones Criterios
Preparación en blanco 1 No debe observarse ningún pico que interfiera en el tiempo de retención de L-4-nitrofenilalanina Metil éster HCl o enantiómero.
Preparación de idoneidad del sistema 1 La resolución entre el éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl y el pico del enantiómero no debe ser inferior a 2,0
Preparación de la prueba 1 Utilice el cromatograma de prueba para determinar el contenido de enantiómeros en la muestra.
Tiempos de retención relativos:
L-4-Nitrofenilalanina Metiléster HCl 1.0
Enantiómero Acerca de 1.11
El tiempo de retención del éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl es de aproximadamente 9,8 minutos.
Cálculo: En el cromatograma obtenido a partir de la preparación de la prueba, ignore todos los picos, excepto L-4-Nitrofenilalanina Metiléster HCl y Enantiómero.Informe el contenido de enantiómeros en la muestra por el método de normalización del área.
Pureza cromatográfica e impurezas por HPLC:
Reactivos químicos:
Fosfato diamónico grado AR
Ácido fosfórico grado AR
Metanol grado HPLC
Agua purificada
Estándares
Estándar de HCl de éster metílico de L-4-nitrofenilalanina
Estándar de monohidrato de 4-nitro-L-fenilalanina
Móvil Fase-A
Disolver 6,6 g de fosfato diamónico en 1000 ml de agua purificada.Ajustar el pH de esta solución a 6,0 con ácido fosfórico.Filtrar y desgasificar.Antes de medir el pH de la solución, calibre el medidor de pH con una solución tampón estándar de pH 4,01 Y 7,00.
Móvil Fase-B
Metanol grado HPLC
Preparación de la idoneidad del sistema
Pesar con precisión y transferir aproximadamente 25 mg de L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl estándar y 4-nitro-L-fenilalanina monohidrato estándar en un matraz volumétrico de 50 ml, disolver y diluir a volumen con metanol y mezclar.
Examen de preparación:
Pesar con precisión y transferir aproximadamente 25 mg de muestra a un matraz aforado de 50 ml, disolver y diluir a volumen con metanol y mezclar.
Parámetros instrumentales:
Instrumento: HPLC equipado con inyector, bomba, detector UV y registrador
Columna: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ o equivalente
Caudal: 1,0 ml/minuto
Longitud de onda: 265nm
Volumen de inyección: 20 μL
Temperatura del aquelarre de columna: 25 ℃
Tiempo de ejecución: 45 minutos
Programa de gradiente
Tiempo (min) Fase móvil-A % Fase móvil-B %
0.01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedimiento:
Inyecte las soluciones como se menciona en la siguiente secuencia.Registre los cromatogramas y confirme los criterios:
Preparación en blanco 1 No debe observarse ningún pico que interfiera en el tiempo de retención de L-4-Nitrofenilalanina Metiléster HCl.
Preparación de idoneidad del sistema 1 El factor de cola para el pico de L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl no debe ser inferior a 2,0
Preparación de la prueba 1 Use el cromatograma de prueba para determinar la pureza cromatográfica y las impurezas.
Tiempos de retención relativos:
L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl 1,0 (tiempo de retención de unos 11,4 minutos)
4-Nitro-L-Fenilalanina Alrededor de 0,4
Tolueno Sobre 2.3
Cálculos:
En el cromatograma obtenido de la preparación de la prueba, después de la corrección del blanco, ignore el pico debido al tolueno.Informe la pureza cromatográfica, el contenido de 4-nitro-L-fenilalanina y las impurezas totales en la muestra mediante el método de normalización del área.