L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl-määritys >98,5 % (HPLC) Tehdas

L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri-HCl:n (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) analyysimenetelmä (CAS: 17193-40-7)
Kuvaus: Aseta noin 2 g näytettä puhtaaseen ja kuivaan petrimaljaan ja tarkkaile näytteen ulkonäköä.Raportointi: Ilmoita havainnosta
Tunnistus: Vertaa koevalmisteen kromatogrammin pääpiikin retentioaikaa järjestelmän soveltuvuuden kromatogrammin pääpiikin retentioaikaan, joka on saatu kromatografisesti puhtaudesta HPLC:llä.
Kuivaushäviö: Kuivaa lasitulpalla varustettua matalaa punnituspulloa 105±2℃:ssa 30 minuuttia.Anna sen jäähtyä huoneenlämpötilaan eksikkaattorissa.Punnitse tarkasti punnituspullo tulpalla ja kirjaa paino (W1).Siirretään noin 1–2 g tarkasti punnittua testiainetta punnituspulloon.Levitä koekappale mahdollisimman tasaisesti noin 5 mm:n syvyyteen ravistamalla kevyesti sivuttain.Punnitse ladattu punnituspullo ja kirjaa paino (W2).Aseta täytetty pullo kuivausuuniin, poista korkki ja jätä se myös kammioon.Kuivaa testinäytettä 105±2 ℃:ssa 3 tuntia.Kun kammio avataan, sulje pullo välittömästi ja anna sen lämmetä huoneenlämpöiseksi eksikaattorissa.Punnitse punnituspullo tarkasti tulpalla ja laske paino uudelleen (W3).Laske näytteen kuivumisen prosenttiosuus seuraavalla kaavalla:
Laskennallinen kuivaushäviö (% w/w) = (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomeeripitoisuus HPLC:llä:
Kemikaalit ja reagenssit:
n-heksaani AR-laatu
Metanoli HPLC-laatu
Isopropyylialkoholi HPLC-laatu
Dietyyliamiini AR-luokka
Standardit: L-4-nitrofenyylialaniinin metyyliesteri-HCl-standardi;L-4-nitrofenyylialaniinin metyyliesteri-HCl-enantiomeeristandardi
Liikkuva faasi: Valmista homogeeninen seos n-heksaanista, isopropyylialkoholista, metanolista ja dietyyliamiinista (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Nollavalmistus: Siirrä 2,5 ml metanolia 10 ml:n mittapulloon, laimenna tilavuuteen liikkuvalla faasilla ja sekoita.
Järjestelmän soveltuvuuden valmistelu:
Punnitaan tarkasti ja siirretään noin 5 mg L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri-HCl-standardia ja L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri-HCl-enantiomeeristandardia 10 ml:n mittapulloon, liuotetaan noin 2,5 ml:aan metanolia, laimennetaan tilavuuteen mobiililaitteella. faasi ja sekoita.
Testin valmistelu:
Punnitaan tarkasti ja siirretään noin 5 mg näytettä 10 mol:n mittapulloon, liuotetaan noin 2,5 ml:aan metanolia, laimennetaan tilavuuteen liikkuvalla faasilla ja sekoitetaan.
Instrumentaaliset parametrit:
Laite: HPLC varustettu injektorilla, pumpulla, UV-ilmaisimella ja tallentimella
Pylväs: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ tai vastaava
Virtausnopeus: 1,0 ml/minuutti
Aallonpituus: 260nm
Ruiskutustilavuus: 10 μL
Kolonnin lämpötila: 25℃
Ajoaika: 20 minuuttia
Menettely
Ruiskuta liuokset seuraavassa järjestyksessä.Kirjaa kromatogrammit ja vahvista kriteerit:
Injektioiden kuvaus Injektioiden lukumäärän kriteerit
Tyhjävalmiste 1 Mitään häiritsevää piikkiä ei pitäisi havaita L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri-HCl:n tai enantiomeerin retentioajassa.
Järjestelmän soveltuvuuden valmistelu 1 L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri HCl:n ja enantiomeeripiikin välinen erotuskyky ei saa olla pienempi kuin 2,0
Testin valmistelu 1 Määritä näytteen enantiomeeripitoisuus testikromatogrammilla.
Suhteelliset säilytysajat:
L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri HCl 1,0
Enantiomeeri noin 1.11
L-4-nitrofenyylialaniinin metyyliesteri-HCl:n retentioaika on noin 9,8 minuuttia.
Laskenta: Testin valmistuksesta saadusta kromatogrammista ei oteta huomioon kaikkia odotettavissa olevia piikkejä L-4-nitrofenyylialaniinin metyyliesteri HCl ja enantiomeeri.Ilmoita enantiomeeripitoisuus näytteessä alueen normalisointimenetelmällä.
Kromatografinen puhtaus ja epäpuhtaudet HPLC:llä:
Kemikaalit ja reagenssit:
Diammoniumfosfaatti AR-laatu
Fosforihappo AR-laatu
Metanoli HPLC-laatu
Puhdistettua vettä
Standardit
L-4-nitrofenyylialaniinin metyyliesteri HCl-standardi
4-nitro-L-fenyylialaniinimonohydraattistandardi
Mobiilivaihe A
Liuota 6,6 g diammoniumfosfaattia 1000 ml:aan puhdistettua vettä.Säädä tämän liuoksen pH 6,0:aan fosforihapolla.Suodatin ja kaasut.Kalibroi pH-mittari standardipuskuriliuoksella pH 4,01 JA 7,00 ennen liuoksen pH:n mittaamista.
Mobiilivaihe-B
Metanoli HPLC-laatu
Järjestelmän soveltuvuuden valmistelu
Punnitaan tarkasti ja siirretään noin 25 mg L-4-nitrofenyylialaniinin metyyliesteri-HCl-standardia ja 4-nitro-L-fenyylialaniinimonohydraattistandardia 50 ml:n mittapulloon, liuotetaan ja laimennetaan metanolilla ja sekoitetaan.
Testin valmistelu:
Punnitaan tarkasti ja siirretään noin 25 mg näytettä 50 ml:n mittapulloon, liuotetaan ja laimennetaan metanolilla ja sekoitetaan.
Instrumentaaliset parametrit:
Laite: HPLC varustettu injektorilla, pumpulla, UV-ilmaisimella ja tallentimella
Pylväs: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ tai vastaava
Virtausnopeus: 1,0 ml/minuutti
Aallonpituus: 265 nm
Ruiskutustilavuus: 20 μL
Kolonnin lämpötila: 25℃
Ajoaika: 45 minuuttia
Gradientti-ohjelma
Aika (min) Mobiilivaihe-A % Mobiilivaihe-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Toimenpide:
Ruiskuta liuokset seuraavassa järjestyksessä.Kirjaa kromatogrammit ja vahvista kriteerit:
Tyhjävalmiste 1 Mitään häiritsevää piikkiä ei pitäisi havaita L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri HCl:n retentioajassa.
Järjestelmän soveltuvuuden valmistelu 1 L-4-nitrofenyylialaniinin metyyliesteri-HCl-piikin jättökertoimen tulee olla vähintään 2,0
Testin valmistelu 1 Käytä testikromatogrammia kromatografisen puhtauden ja epäpuhtauksien määrittämiseen.
Suhteelliset säilytysajat:
L-4-nitrofenyylialaniinimetyyliesteri HCl 1,0 (retentioaika noin 11,4 minuuttia)
4-nitro-L-fenyylialaniini noin 0,4
Tolueeni noin 2.3
Laskelmat:
Testin valmistuksesta saadusta kromatogrammista ei oteta huomioon nollakoekorjauksen jälkeen tolueenista johtuvaa piikkiä.Ilmoita näytteen kromatografinen puhtaus, 4-nitro-L-fenyylialaniinipitoisuus ja kokonaisepäpuhtaudet pinta-alan normalisointimenetelmällä.