Ursodeoksikoolihappo (UDCA) CAS 128-13-2 -määritys 99,0-101,0 %

URSODEOKSIKOLIHAPPO
C24H40O4 Mr 392,6[128-13-2]
MÄÄRITELMÄ
3α,7β-dihydroksi-5β-kolaani-24-öljyhappo.
Sisältö: 99,0 % - 101,0 % (kuiva aine).
HAHMAT
Ulkonäkö: valkoinen tai melkein valkoinen jauhe.
Liukoisuus: käytännössä liukenematon veteen, liukenee hyvin etanoliin (96 %), liukenee heikosti asetoniin, käytännössä liukenematon metyleenikloridiin.
sp.: noin 202 ℃.
HENKILÖLLISYYSTODISTUS
Ensimmäinen tunnistus: A.
Toinen tunniste: B, C.
A. Infrapuna-absorptiospektrofotometria (2.2.24).
Vertailu: Ursodeoksikoolihappo CRS.
B. Tutkitaan epäpuhtauden C testissä saadut kromatogrammit.
Tulokset: testiliuoksella (b) saadun kromatogrammin päätäplä on sijainniltaan, väriltään ja kooltaan samanlainen kuin vertailuliuoksella (a) saadun kromatogrammin päätäplä.
C. Liuotetaan noin 10 mg 1 ml:aan rikkihappoa R. Lisätään 0,1 ml formaldehydiliuosta R ja annetaan seistä 5 minuuttia.Lisätään 5 ml vettä R. Saatu suspensio on vihertävänsininen.
TESTIT
Optinen ominaiskierto (2.2.7): + 58,0 - + 62,0 (kuiva aine).
Liuotetaan 0,500 g vedettömään etanoliin R ja laimennetaan 25,0 ml:ksi samalla liuottimella.
Epäpuhtaus C. Ohutkerroskromatografia (2.2.27).
Liuotinseos: vesi R, asetoni R (10:90 V/V).
Testiliuos (a).Liuotetaan 0,40 g tutkittavaa ainetta liuotinseokseen ja laimennetaan 10 ml:ksi liuotinseoksella.
Testiliuos (b).Laimennetaan 1 ml testiliuosta (a) 10 ml:ksi liuotinseoksella.
Vertailuliuos (a).Liuota 40 mg ursodeoksikoolihappoa CRS liuotinseokseen ja laimenna 10 ml:ksi liuotinseoksella.
Vertailuliuos (b).Liuota 20 mg litokolihappoa CRS (epäpuhtaus C) liuotinseokseen ja laimenna 10,0 ml:ksi liuotinseoksella (liuos A).Laimenna 2,0 ml tätä liuosta 100,0 ml:ksi liuotinseoksella.
Vertailuliuos (c).5 ml:aan liuosta A lisätään 10 mg kenodeoksikoolihappoa CRS (epäpuhtaus A) ja laimennetaan 50 ml:ksi liuotinseoksella.
Levy: TLC-silikageelilevy R.
Liikkuva faasi: jääetikka R, asetoni R, metyleenikloridi R (1:30:60 V/V/V).
Käyttö: 5μL.
Kehitys: yli 2/3 levystä.
Kuivaus: 120 ℃ 10 min.
Toteaminen: ruiskutetaan välittömästi 47,6 g/l fosfomolybdeenihapon R liuoksella seoksessa, jossa on 1 tilavuusosaa rikkihappoa R ja 20 tilavuutta jääetikkaa R, ja kuumennetaan 120 ℃:ssa, kunnes siniset täplät näkyvät vaaleammalla taustalla.
Järjestelmäsoveltuvuus: vertailuliuos (c):
- kromatogrammissa on kaksi selvästi erotettua päätäplää.
Raja: testiliuos (a):
-epäpuhtaus C: mikään epäpuhtaudesta C johtuva täplä ei ole voimakkaampi kuin vertailuliuoksella (b) saadun kromatogrammin päätäplä (0,1 %).
Samankaltaiset aineet.Nestekromatografia (2.2.29).
Liuotinseos: metanoli R, liikkuva faasi (10:90 V/V).
Testiratkaisu.Liuotetaan 60 mg tutkittavaa ainetta liuotinseokseen ja laimennetaan 20,0 ml:ksi liuotinseoksella.
Vertailuliuos (a).Liuota ursodeoksikoolihappoa sisältävän injektiopullon sisältö järjestelmäsoveltuvuutta CRS varten (sisältää epäpuhtaudet A ja H) 1,0 ml:aan liuotinseosta.
Vertailuliuos (b).Laimennetaan 1,0 ml testiliuosta 100,0 ml:ksi liuotinseoksella.Laimenna 1,0 ml tätä liuosta 10,0 ml:ksi liuotinseoksella.
Sarake:
-koko: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm;
-kiinteä faasi: päätysuljettu oktadekyylisilyylisilikageelikromatografia R (5 μm);
- lämpötila: 40℃ ± 1℃.
Liikkuva faasi: sekoitetaan 30 tilavuutta asetonitriiliä R, 37 tilavuutta natriumdivetyfosfaatin 0,78 g/l liuosta, joka on säädetty pH-arvoon 3 fosforihapolla R, ja 40 tilavuutta metanolia R.
Virtausnopeus: 0,8 ml/min.
Tunnistus: refraktometri 35 ± 1 ℃.
Ruiskutus: 150 µl.
Ajoaika: 4 kertaa ursodeoksikoolihapon retentioaika.
Epäpuhtauksien tunnistaminen: käytä ursodeoksikoolihapon mukana toimitettua kromatogrammia järjestelmän soveltuvuuden tarkistamiseksi CRS ja vertailuliuoksesta (a) saatua kromatogrammia epäpuhtauksista A ja H johtuvien piikien tunnistamiseen.
Suhteellinen retentio suhteessa ursodeoksikoolihappoon (retentioaika = noin 14 min): epäpuhtaus H = noin 0,9;epäpuhtaus A = noin 2,8.
Järjestelmän soveltuvuus: vertailuliuos (a):
-resoluutio: vähintään 1,5 piikkien välillä epäpuhtaudesta H ja ursodeoksikoolihaposta.
Rajoitukset:
- Epäpuhtaus A: enintään 10 kertaa vertailuliuoksesta (b) saadun kromatogrammin pääpiikin pinta-ala (1,0 prosenttia);
-määrittelemättömät epäpuhtaudet: kunkin epäpuhtauden osalta enintään pääpiikin pinta-ala vertailuliuoksesta (b) saadusta kromatogrammista (0,10 prosenttia);
- yhteensä: enintään 15 kertaa vertailuliuoksesta (b) saadun kromatogrammin pääpiikin pinta-ala (1,5 prosenttia);
-poikkeamaraja: 0,5 kertaa vertailuliuoksella (b) saadun kromatogrammin pääpiikin pinta-ala (0,05 prosenttia).
Raskasmetallit (2.4.8): enintään 20 ppm.
1,0 g vastaa testin C vaatimuksia. Valmistetaan vertailuliuos käyttämällä 2 ml lyijystandardiliuosta (10 ppm Pb) R.
Kuivaushäviö (2.2.32): enintään 1,0 %, määritettynä 1 000 g:lle kuivaamalla uunissa 105 ℃.
Sulfatoitua tuhkaa (2.4.14): enintään 0,1 prosenttia, määritettynä 1,0 g:lle.
MÄÄRITYS
Liuotetaan 0,350 g 50 ml:aan etanolia (96 prosenttia) R, joka on aiemmin neutraloitu 0,2 ml:aan fenoliftaleiiniliuosta R. Lisätään 50 ml vettä R ja titrataan 0,1 M natriumhydroksidilla, kunnes saadaan vaaleanpunainen väri.
1 ml 0,1 M natriumhydroksidia vastaa 39,26 mg:aa C24H40O4.
Epäpuhtaudet
Määritellyt epäpuhtaudet: A, C.
Muut havaittavissa olevat epäpuhtaudet (seuraavat aineet, jos niitä on riittävästi, voidaan havaita jommallakummalla monografian testeistä. Niitä rajoittaa muiden/määrittelemättömien epäpuhtauksien yleinen hyväksymiskriteeri ja/tai yleismonografia Aineet lääkekäyttöön (2034). Siksi näitä epäpuhtauksia ei tarvitse tunnistaa vaatimustenmukaisuuden osoittamiseksi. Katso myös 5.10.
Lääkekäyttöön tarkoitettujen aineiden epäpuhtauksien valvonta): B, D, E, F, G, H, I.
A. 3α,7α-dihydroksi-5β-kolaani-24-öljyhappo (kenodeoksikoolihappo),
B. 3α,7α,12α-trihydroksi-5β-kolaani-24-öljyhappo (koolihappo),
C. 3α-hydroksi-5β-kolaani-24-öljyhappo (litokolihappo),
D. 3α,7β,12α-trihydroksi-5β-kolaani-24-öljyhappo (ursokolihappo),
E. 3α,12α-dihydroksi-5β-kolaani-24-öljyhappo (deoksikoolihappo),
F. 3a-hydroksi-7-okso-5p-kolaani-24-happo,
G. metyyli-3α,7β-dihydroksi-5β-kolaani-24-oaatti,
H. 3β,7β-dihydroksi-5β-kolaani-24-öljyhappo,
I. 5p-kolaani-3a,7p,24-trioli.