Ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Dosage > 98,5 % (HPLC) Usine

Méthode d'analyse de l'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS : 17193-40-7)
Description : Placer environ 2 g d'échantillon dans une boîte de Pétri propre et sèche et observer l'aspect de l'échantillon.Rapport : rapporter l'observation
Identification : Comparez le temps de rétention du pic majeur du chromatogramme de la préparation à tester avec le temps de rétention du pic majeur du chromatogramme de la préparation d'adéquation du système tel qu'obtenu en pureté chromatographique par HPLC.
Perte au séchage : Séchez une bouteille de pesée peu profonde à bouchon de verre à 105 ± 2 ℃ pendant 30 minutes.Laisser refroidir à température ambiante dans un dessiccateur.Peser avec précision le flacon de pesée avec bouchon et noter le poids (W1).Transférer environ 1 à 2 g de quantité pesée avec précision de substance d'essai dans le flacon de pesée.En secouant légèrement latéralement, répartir l'éprouvette aussi uniformément que possible sur une profondeur d'environ 5 mm.Peser le flacon de pesée chargé et enregistrer le poids (W2).Placer la bouteille chargée dans l'étuve de séchage, retirer le bouchon et le laisser également dans la chambre.Séchez l'échantillon d'essai à 105±2℃ pendant 3 heures.Dès l'ouverture de la chambre, refermer rapidement le flacon et le laisser revenir à température ambiante dans un dessiccateur.Peser avec précision le flacon de pesée avec bouchon et recopier le poids (W3).Calculez le pourcentage de perte lors du séchage de l'échantillon en utilisant la formule suivante :
Calcul Perte au séchage (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Teneur en énantiomère par HPLC :
Produits chimiques et réactifs :
Qualité n-Hexane AR
Qualité HPLC méthanol
Qualité HPLC d'alcool isopropylique
Qualité diéthylamine AR
Étalons : étalon de chlorhydrate d'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine ;Étalon d'énantiomère HCl de l'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine
Phase mobile : préparer un mélange homogène de n-hexane, d'alcool isopropylique, de méthanol et de diéthylamine (65 :20 :15 :0,1 v/v/v/v)
Préparation à blanc : Transférer 2,5 ml de méthanol dans une fiole jaugée de 10 ml, diluer au volume avec la phase mobile et mélanger.
Préparation à l'adéquation du système :
Peser avec précision et transférer environ 5 mg chacun de l'étalon L-4-nitrophénylalanine méthyl ester HCl et de l'étalon énantiomère L-4-nitrophénylalanine méthyl ester HCl dans une fiole jaugée de 10 ml, dissoudre dans environ 2,5 ml de méthanol, diluer au volume avec mobile Phase et mélange.
La préparation du test:
Peser précisément et transférer environ 5 mg d'échantillon dans une fiole jaugée de 10 mol, dissoudre dans environ 2,5 ml de méthanol, diluer au volume avec la phase mobile et mélanger.
Paramètres instrumentaux :
Instrument : HPLC équipé d'un injecteur, d'une pompe, d'un détecteur UV et d'un enregistreur
Colonne : ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ ou équivalent
Débit : 1,0 ml/minute
Longueur d'onde : 260 nm
Volume d'injection : 10 μL
Temp. de coven de colonne : 25℃
Durée d'exécution : 20 minutes
Procédure
Injectez les solutions comme indiqué dans la séquence suivante.Enregistrez les chromatogrammes et confirmez les critères :
Description des injections Nombre d'injections Critères
Blanc Préparation 1 Aucun pic interférant ne doit être observé au temps de rétention de L-4-nitrophénylalanine méthyl ester HCl ou énantiomère.
Préparation de l'adéquation du système 1 La résolution entre l'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine HCl et le pic de l'énantiomère ne doit pas être inférieure à 2,0
Préparation du test 1 Utiliser le chromatogramme de test pour déterminer la teneur en énantiomère de l'échantillon.
Temps de rétention relatifs :
Ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine HCl 1,0
Énantiomère À propos de 1.11
Le temps de rétention de l'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine HCl est d'environ 9,8 minutes.
Calcul : Dans le chromatogramme obtenu à partir de la préparation du test, ne tenez pas compte de tous les pics, à l'exception de l'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine HCl et de l'énantiomère.Rapporter la teneur en énantiomère dans l'échantillon par la méthode de normalisation de zone.
Pureté chromatogrpahique et impuretés par HPLC :
Produits chimiques et réactifs :
Phosphate diammonique grade AR
Grade AR acide phosphorique
Qualité HPLC méthanol
Eau purifiée
Normes
Étalon de chlorhydrate d'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine
Étalon de monohydrate de 4-nitro-L-phénylalanine
Mobile Phase-A
Dissoudre 6,6 g de phosphate diammonique dans 1000 ml d'eau purifiée.Ajuster le pH de cette solution à 6,0 avec de l'acide phosphorique.Filtrer et dégazer.Avant de mesurer le pH de la solution, étalonnez le pH-mètre avec une solution tampon standard pH 4,01 ET 7,00.
Mobile Phase-B
Qualité HPLC méthanol
Préparation à l'adéquation du système
Peser avec précision et transférer environ 25 mg chacun de l'étalon L-4-nitrophénylalanine méthyl ester HCl et de l'étalon monohydrate de 4-nitro-L-phénylalanine dans une fiole jaugée de 50 ml, dissoudre et diluer au volume avec du méthanol et mélanger.
La préparation du test:
Peser avec précision et transférer environ 25 mg d'échantillon dans une fiole jaugée de 50 ml, dissoudre et diluer au volume avec du méthanol et mélanger.
Paramètres instrumentaux :
Instrument : HPLC équipé d'un injecteur, d'une pompe, d'un détecteur UV et d'un enregistreur
Colonne : XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ ou équivalent
Débit : 1,0 ml/minute
Longueur d'onde : 265 nm
Volume d'injection : 20 μL
Temp. de coven de colonne : 25℃
Durée d'exécution : 45 minutes
Programme dégradé
Temps (min) Mobile Phase-A % Mobile Phase-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procédure:
Injectez les solutions comme indiqué dans la séquence suivante.Enregistrez les chromatogrammes et confirmez les critères :
Blanc Préparation 1 Aucun pic interférant ne doit être observé au temps de rétention de L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl.
Préparation de l'adéquation du système 1 Le facteur de traînée pour le pic de HCl de l'ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine ne doit pas être inférieur à 2,0
Préparation du test 1 Utiliser le chromatogramme de test pour déterminer la pureté chromatographique et les impuretés.
Temps de rétention relatifs :
Ester méthylique de L-4-nitrophénylalanine HCl 1,0 (temps de rétention environ 11,4 minutes)
4-Nitro-L-Phénylalanine Environ 0,4
Toluène Environ 2,3
Calculs :
Dans le chromatogramme obtenu à partir de la préparation du test, après correction du blanc, ne pas tenir compte du pic dû au toluène.Rapportez la pureté chromatographique, la teneur en 4-nitro-L-phénylalanine et les impuretés totales dans l'échantillon par la méthode de normalisation de zone.