Ester metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl CAS 17193-40-7 Ensaio H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl > 98,5 % (HPLC) Fábrica

Método de análise do éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Descrición: Coloque uns 2 g de mostra nunha placa de Petri limpa e seca e observe o aspecto da mostra.Informe: informe da observación
Identificación: Compare o tempo de retención do pico principal no cromatograma da preparación de ensaio co tempo de retención do pico principal no cromatograma de preparación do sistema obtido na pureza cromatográfica por HPLC.
Perda por secado: seque unha botella de peso pouco profunda con tapón de vidro a 105 ± 2 ℃ durante 30 minutos.Déixao arrefriar a temperatura ambiente nun descicador.Pesar con precisión a botella de pesaxe con tapón e rexistrar o peso (W1).Transfira entre 1 e 2 g dunha cantidade de substancia de proba pesada con precisión na botella de pesaxe.Axitando suavemente e lateralmente, distribúa a mostra da proba tan uniformemente como sexa posible a unha profundidade duns 5 mm.Pesar a botella de pesaxe cargada e rexistrar o peso (W2).Coloque a botella cargada no forno de secado, quitando o tapón e deixándoa tamén na cámara.Seque a mostra de proba a 105 ± 2 ℃ durante 3 horas.Ao abrir a cámara, pecha a botella rapidamente e deixa que chegue a temperatura ambiente nun desecador.Pesar con precisión a botella con tapón e recoger o peso (W3).Calcule a porcentaxe de perda no secado da mostra mediante a seguinte fórmula:
Cálculo Perda por secado (% p/p)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Contido de enantiómeros por HPLC:
Química e reactivos:
Grao n-hexano AR
Grao de metanol HPLC
Grao de alcohol isopropílico HPLC
Dietilamina clase AR
Estándares: L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl estándar;L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl enantiómero estándar
Fase móbil: preparar unha mestura homoxénea de n-hexano, alcohol isopropílico, metanol e dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Preparación en branco: Transfire 2,5 ml de metanol nun matraz aforado de 10 ml, dilúese a volume coa fase móbil e mestúrase.
Preparación da idoneidade do sistema:
Pese con precisión e transfire uns 5 mg de cada un de L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl estándar e L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl estándar enantiómero nun matraz aforado de 10 ml, disolva nuns 2,5 ml de metanol, dilúa a volume co móbil. fase e mestura.
Preparación da proba:
Pesar con precisión e transferir uns 5 mg de mostra nun matraz aforado de 10 moles, disolver nuns 2,5 ml de metanol, diluír a volume coa fase móbil e mesturar.
Parámetros instrumentais:
Instrumento: HPLC equipado con inxector, bomba, detector UV e gravadora
Columna: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ ou equivalente
Caudal: 1,0 ml/minuto
Lonxitude de onda: 260 nm
Volume de inxección: 10 μL
Temperatura da columna: 25℃
Tempo de execución: 20 minutos
Procedemento
Inxecta as solucións como se indica na seguinte secuencia.Rexistra os cromatogramas e confirma os criterios:
Descrición das inxeccións Número de inxeccións Criterios
Preparación en branco 1 Non se debe observar ningún pico interferente no tempo de retención do HCl do éster metílico de L-4-nitrofenilalanina ou do enantiómero.
Preparación da adecuación do sistema 1 A resolución entre HCl de éster metílico de L-4-nitrofenilalanina e o pico do enantiómero non debe ser inferior a 2,0
Preparación da proba 1 Use o cromatograma de proba para determinar o contido de enantiómeros na mostra.
Tempos de retención relativos:
L-4-nitrofenilalanina éster metílico HCl 1,0
Enantiómero Acerca de 1.11
O tempo de retención do éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl é duns 9,8 minutos.
Cálculo: no cromatograma obtido a partir da preparación da proba, ignorar todos os picos esperados L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl e enantiómero.Informe o contido de enantiómeros na mostra por método de normalización da área.
Pureza e impurezas cromatográficas por HPLC:
Química e reactivos:
Fosfato de diamónico grado AR
Ácido fosfórico grado AR
Grao de metanol HPLC
Auga Purificada
Estándares
L-4-nitrofenilalanina metil éster HCl estándar
Patrón de 4-Nitro-L-fenilalanina monohidrato
Fase móbil-A
Disolver 6,6 g de fosfato diamónico en 1000 ml de auga purificada.Axuste o pH desta solución a 6,0 con ácido fosfórico.Filtrar e desgasificar.Antes de medir o pH da solución, calibrar o pH-metro cunha solución tampón estándar pH 4,01 E 7,00.
Móbil Fase-B
Grao de metanol HPLC
Preparación da idoneidade do sistema
Pesar con precisión e transferir uns 25 mg cada un de estándar de éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl e estándar de 4-nitro-L-fenilalanina monohidrato nun matraz aforado de 50 ml, disolver e diluír a volume con metanol e mesturar.
Preparación da proba:
Pesar con precisión e transferir uns 25 mg de mostra nun matraz aforado de 50 ml, disolver e diluír a volume con metanol e mesturar.
Parámetros instrumentais:
Instrumento: HPLC equipado con inxector, bomba, detector UV e gravadora
Columna: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ ou equivalente
Caudal: 1,0 ml/minuto
Lonxitude de onda: 265 nm
Volume de inxección: 20 μL
Temperatura da columna: 25℃
Tempo de execución: 45 minutos
Programa de gradientes
Tempo (min) % Fase móbil-A % Fase móbil-B
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedemento:
Inxecta as solucións como se indica na seguinte secuencia.Rexistra os cromatogramas e confirma os criterios:
Preparación en branco 1 Non se debe observar ningún pico interferente no tempo de retención do éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl.
Preparación da adecuación do sistema 1 O factor de colas para o pico de éster metílico de L-4-nitrofenilalanina HCl non debe ser inferior a 2,0
Preparación da proba 1 Use o cromatograma de proba para determinar a pureza cromatográfica e as impurezas.
Tempos de retención relativos:
L-4-nitrofenilalanina éster metílico HCl 1,0 (tempo de retención uns 11,4 minutos)
4-Nitro-L-fenilalanina Aproximadamente 0,4
Tolueno Sobre 2.3
Cálculos:
No cromatograma obtido da preparación da proba, despois da corrección en branco, non se ten en conta o pico debido ao tolueno.Indique a pureza cromatográfica, o contido de 4-nitro-L-fenilalanina e as impurezas totais da mostra por método de normalización da área.