L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl analiza >98,5% (HPLC) Tvornica

Metoda analize L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Opis: Stavite oko 2 g uzorka u čistu i suhu petrijevu zdjelicu i promatrajte izgled uzorka.Izvještavanje: Prijavite zapažanje
Identifikacija: Usporedite vrijeme zadržavanja glavnog vrha u kromatogramu ispitivanog pripravka s vremenom zadržavanja glavnog vrha u kromatogramu pripravka za prikladnost sustava dobivenog u kromatografskoj čistoći HPLC-om.
Gubitak sušenjem: Sušite plitku bocu za vaganje sa staklenim čepom na 105±2 ℃ 30 minuta.Ostavite da se ohladi na sobnu temperaturu u eksikatoru.Točno izvažite bocu za vagu s čepom i zabilježite težinu (W1).Prenesite otprilike 1 do 2 g točno izvagane količine ispitivane tvari u bocu za vaganje.Laganim bočnim trešenjem rasporedite ispitni uzorak što je moguće ravnomjernije na dubinu od oko 5 mm.Izvažite napunjenu bocu za vaganje i zabilježite težinu (W2).Stavite napunjenu bocu u sušionicu, uklonite čep i ostavite je također u komori.Osušite ispitni uzorak na 105±2℃ 3 sata.Nakon otvaranja komore, bocu odmah zatvorite i ostavite da se zagrije na sobnu temperaturu u eksikatoru.Točno izvažite bocu za vagu s čepom i ponovno izmjerite težinu (W3).Izračunajte postotak gubitka sušenjem uzorka pomoću sljedeće formule:
Izračun Gubitak sušenjem (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Sadržaj enantiomera prema HPLC-u:
Kemikalije i reagensi:
n-Heksan AR stupanj
Metanol HPLC čistoće
Isopropyl Alcohol HPLC grade
Dietilamin AR stupnja
Standardi: L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard;L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard enantiomera
Mobilna faza: Pripremite homogenu smjesu n-heksana, izopropilnog alkohola, metanola i dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Priprema slijepe probe: Prenesite 2,5 ml metanola u odmjernu tikvicu od 10 ml, razrijedite do volumena s mobilnom fazom i promiješajte.
Priprema prikladnosti sustava:
Točno izvažite i prenesite oko 5 mg svakog standarda L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl i standarda enantiomera L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl u odmjernu tikvicu od 10 ml, otopite u oko 2,5 ml metanola, razrijedite do volumena pomoću mobitela faza i miješati.
Priprema testa:
Točno izvažite i prenesite oko 5 mg uzorka u odmjernu tikvicu od 10 mola, otopite u oko 2,5 ml metanola, razrijedite do volumena s mobilnom fazom i promiješajte.
Instrumentalni parametri:
Instrument: HPLC opremljen injektorom, pumpom, UV detektorom i snimačem
Kolona: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ ili ekvivalent
Brzina protoka: 1,0 ml/minuta
Valna duljina: 260nm
Volumen injekcije: 10 μL
Temperatura koven kolone: ​​25 ℃
Trajanje: 20 minuta
Postupak
Ubrizgajte otopine kako je navedeno u sljedećem nizu.Snimite kromatograme i potvrdite kriterije:
Opis kriterija za broj injekcija
Priprema slijepe probe 1 Ne smije se primijetiti interferirajući vrh u retencijskom vremenu L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl ili enantiomera.
Priprema prikladnosti sustava 1 Rezolucija između L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl i vršne vrijednosti enantiomera ne smije biti manja od 2,0
Priprema testa 1 Koristite testni kromatogram za određivanje sadržaja enantiomera u uzorku.
Relativna vremena zadržavanja:
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl 1.0
Enantiomer Oko 1.11
Vrijeme zadržavanja L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl je oko 9,8 minuta.
Izračun: U kromatogramu dobivenom iz pripreme testa, zanemarite sve vrhove očekujući L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl i enantiomer.Izvijestite o sadržaju enantiomera u uzorku metodom normalizacije površine.
Kromatografska čistoća i nečistoće pomoću HPLC-a:
Kemikalije i reagensi:
Diamonijev fosfat AR stupnja
Fosforna kiselina AR stupnja
Metanol HPLC čistoće
Pročišćena voda
Standardi
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard
Standard 4-nitro-L-fenilalanin monohidrata
Mobilna faza-A
Otopiti 6,6 g diamonijevog fosfata u 1000 ml pročišćene vode.Podesite pH ove otopine na 6,0 pomoću fosforne kiseline.Filtrirati i otpliniti.Prije mjerenja pH otopine, kalibrirajte pH metar standardnom otopinom pufera pH 4,01 I 7,00.
Mobilna faza-B
Metanol HPLC čistoće
Priprema prikladnosti sustava
Točno izvažite i prenesite oko 25 mg standarda L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl i standarda 4-nitro-L-fenilalanin monohidrata u odmjernu tikvicu od 50 ml, otopite i razrijedite do volumena s metanolom i pomiješajte.
Priprema testa:
Točno izvažite i prenesite oko 25 mg uzorka u odmjernu tikvicu od 50 ml, otopite i razrijedite do volumena metanolom i promiješajte.
Instrumentalni parametri:
Instrument: HPLC opremljen injektorom, pumpom, UV detektorom i snimačem
Stupac: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ ili ekvivalent
Brzina protoka: 1,0 ml/minuta
Valna duljina: 265nm
Volumen injekcije: 20 μL
Temperatura koven kolone: ​​25 ℃
Trajanje: 45 minuta
Program gradijenta
Vrijeme (min) Mobilna faza-A % Mobilna faza-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Postupak:
Ubrizgajte otopine kako je navedeno u sljedećem nizu.Snimite kromatograme i potvrdite kriterije:
Priprema slijepe probe 1 Ne smije se primijetiti interferirajući vrh u retencijskom vremenu L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl.
Priprema prikladnosti sustava 1 Faktor zaostatka za vrh L-4-nitrofenilalanin metil estera HCl ne smije biti manji od 2,0
Priprema testa 1 Upotrijebite testni kromatogram za određivanje kromatografske čistoće i nečistoća.
Relativna vremena zadržavanja:
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl 1.0 (vrijeme zadržavanja oko 11.4 minuta)
4-nitro-L-fenilalanin oko 0,4
Toluen Oko 2.3
Izračuni:
U kromatogramu dobivenom iz pripreme testa, nakon korekcije slijepe probe, zanemarite vršnu vrijednost zbog toluena.Izvijestite o kromatografskoj čistoći, sadržaju 4-nitro-L-fenilalanina i ukupnim nečistoćama u uzorku metodom površinske normalizacije.