L-4-Nitro-fenilalanin-metil-észter HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl vizsgálat >98,5% (HPLC) Gyári

Az L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) elemzési módszere (CAS: 17193-40-7)
Leírás: Helyezzen körülbelül 2 g mintát egy tiszta és száraz Petri-csészébe, és figyelje meg a minta megjelenését.Jelentés: Jelentse a megfigyelést
Azonosítás: Hasonlítsuk össze a vizsgálati készítmény kromatogramján látható főcsúcs retenciós idejét a HPLC-vel kromatográfiás tisztaság alapján kapott rendszeralkalmassági vizsgálat kromatogramján lévő főcsúcs retenciós idejével.
Szárítási veszteség: Szárítson egy üvegdugóval lezárt, sekély mérőedényt 105±2°C-on 30 percig.Excikkátorban hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni.Pontosan mérje le a dugós mérőedényt, és jegyezze fel a súlyt (W1).Vigyen át körülbelül 1–2 g pontosan lemért vizsgált anyagot a mérőedénybe.Gyengéd, oldalirányú rázással oszlassa el a próbadarabot a lehető legegyenletesebben körülbelül 5 mm-es mélységig.Mérjük le a megtöltött mérőedényt, és jegyezzük fel a súlyt (W2).Helyezze a megtöltött palackot a szárítószekrénybe, eltávolítva a dugót, és azt is a kamrában hagyja.Szárítsa a vizsgálati mintát 105±2°C-on 3 órán keresztül.A kamra kinyitásakor azonnal zárja le az üveget, és hagyja szobahőmérsékletűre melegedni exszikkátorban.Pontosan mérje le a dugós mérőedényt, és mérje vissza a súlyt (W3).Számítsa ki a minta szárítása utáni százalékos veszteséget a következő képlet segítségével:
Számítási veszteség szárításkor (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomertartalom HPLC-vel:
Vegyi anyagok és reagensek:
n-hexán AR minőségű
Metanol HPLC minőségű
Izopropil-alkohol HPLC minőségű
Dietilamin AR minőségű
Szabványok: L-4-Nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl standard;L-4-Nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl-enantiomer standard
Mozgófázis: Készítsen homogén keveréket n-hexánból, izopropil-alkoholból, metanolból és dietil-aminból (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Üres készítmény: Tegyünk 2,5 ml metanolt egy 10 ml-es mérőlombikba, hígítsuk térfogatra mozgófázissal és keverjük össze.
Rendszeralkalmassági előkészítés:
Pontosan mérjünk le és vigyünk át körülbelül 5 mg L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl-standardot és L-4-nitro-fenil-alanin-metil-észter-HCl-enantiomer-standardot egy 10 ml-es mérőlombikba, oldjuk fel kb. 2,5 ml metanolban, hígítsuk térfogatra mobil eszközzel. fázist és keverjük össze.
A teszt előkészítése:
Pontosan mérjünk le és töltsünk át körülbelül 5 mg mintát egy 10 mol-os mérőlombikba, oldjuk fel körülbelül 2,5 ml metanolban, hígítsuk térfogatra mozgófázissal és keverjük össze.
Műszeres paraméterek:
Műszer: HPLC injektorral, szivattyúval, UV detektorral és rögzítővel
Oszlop: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ vagy azzal egyenértékű
Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc
Hullámhossz: 260 nm
Befecskendezési térfogat: 10 μL
Oszlop hőm.: 25℃
Működési idő: 20 perc
Eljárás
Fecskendezze be az oldatokat a következő sorrendben leírtak szerint.Rögzítse a kromatogramokat, és erősítse meg a kritériumokat:
Az injekciók leírása Az injekciók száma kritériumai
1. üres készítmény Nem figyelhető meg zavaró csúcs az L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl vagy enantiomer retenciós idején.
A rendszer alkalmassági előkészítése 1. Az L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl és az enantiomer csúcs közötti felbontásnak legalább 2,0-nak kell lennie
A vizsgálat előkészítése 1. Használjon tesztkromatogramot a minta enantiomertartalmának meghatározásához.
Relatív megőrzési idők:
L-4-Nitro-fenilalanin-metil-észter HCl 1.0
Enantiomer Körülbelül 1.11
Az L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl retenciós ideje körülbelül 9,8 perc.
Számítás: A teszt-előkészítésből kapott kromatogramon figyelmen kívül hagyjuk az L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl-t és az enantiomert.Adja meg a minta enantiomertartalmát területnormalizációs módszerrel.
Kromatográfiás tisztaság és szennyeződések HPLC szerint:
Vegyi anyagok és reagensek:
Diammónium-foszfát AR minőségű
Foszforsav AR minőségű
Metanol HPLC minőségű
Tisztított víz
Szabványok
L-4-Nitro-fenilalanin-metil-észter HCl standard
4-Nitro-L-fenilalanin-monohidrát standard
Mobil Phase-A
Oldjunk fel 6,6 g diammónium-foszfátot 1000 ml tisztított vízben.Állítsa be ennek az oldatnak a pH-ját 6,0-ra foszforsavval.Szűrés és gáztalanítás.Az oldat pH-értékének mérése előtt kalibrálja a pH-mérőt standard pufferoldattal, pH 4,01 ÉS 7,00.
Mobil B fázis
Metanol HPLC minőségű
Rendszeralkalmassági előkészítés
Pontosan mérjünk le és vigyünk át körülbelül 25 mg L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl-standardot és 4-nitro-L-fenilalanin-monohidrát-standardot egy 50 ml-es mérőlombikba, oldjuk fel, hígítsuk térfogatra metanollal, majd keverjük össze.
A teszt előkészítése:
Mérjünk le pontosan, és töltsünk át körülbelül 25 mg mintát egy 50 ml-es mérőlombikba, oldjuk fel, hígítsuk térfogatra metanollal, majd keverjük össze.
Műszeres paraméterek:
Műszer: HPLC injektorral, szivattyúval, UV detektorral és rögzítővel
Oszlop: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ vagy azzal egyenértékű
Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc
Hullámhossz: 265 nm
Befecskendezési térfogat: 20 μL
Oszlop hőm.: 25℃
Működési idő: 45 perc
Gradiens program
Idő (perc) Mobil Fázis-A % Mobil Fázis-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Eljárás:
Fecskendezze be az oldatokat a következő sorrendben leírtak szerint.Rögzítse a kromatogramokat, és erősítse meg a kritériumokat:
1. üres készítmény Az L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl retenciós idején nem figyelhető meg zavaró csúcs.
A rendszer alkalmasságának előkészítése 1 Az L-4-nitro-fenilalanin-metil-észter-HCl-csúcs ragasztási tényezője legalább 2,0
A vizsgálat előkészítése 1. Használjon tesztkromatogramot a kromatográfiás tisztaság és a szennyeződések meghatározására.
Relatív megőrzési idők:
L-4-Nitro-fenilalanin-metil-észter HCl 1,0 (retenciós idő körülbelül 11,4 perc)
4-Nitro-L-Fenilalanin Körülbelül 0,4
Toluol Körülbelül 2.3
Számítások:
A vizsgálati előkészítés során kapott kromatogramon a vak korrekciót követően a toluol miatti csúcsot figyelmen kívül kell hagyni.Területnormalizációs módszerrel adja meg a mintában a kromatográfiás tisztaságot, a 4-nitro-L-fenilalanin-tartalmat és az összes szennyeződést.