L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98.5% (HPLC) Factory

L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) վերլուծության մեթոդ (CAS: 17193-40-7)
Նկարագրություն. Մոտ 2 գ նմուշը դրեք մաքուր և չոր պետրի-սկավառակի մեջ և դիտեք նմուշի տեսքը:Հաշվետվություն. զեկուցեք դիտարկումը
Նույնականացում. Համեմատեք փորձարկման պատրաստման քրոմատոգրամում հիմնական գագաթնակետի պահպանման ժամանակը և համակարգի պիտանիության պատրաստման քրոմատոգրամում հիմնական գագաթնակետի պահպանման ժամանակը, որը ստացվել է HPLC-ով քրոմատոգրաֆիկ մաքրության մեջ:
Կորուստ չորացման ժամանակ. չորացրեք ապակուց փակված, մակերեսային կշռող շիշը 105±2℃ ջերմաստիճանում 30 րոպե:Թույլ տվեք, որ այն սառչի մինչև սենյակային ջերմաստիճանը չորացուցիչի մեջ:Ճշգրիտ կշռեք կշռող շիշը խցանով և գրանցեք քաշը (W1):Մոտ 1-ից 2 գ ճշգրիտ կշռված քանակությամբ փորձարկվող նյութ տեղափոխեք կշռման շշի մեջ:Մեղմ, կողային թափահարելով, փորձանմուշը հնարավորինս հավասարաչափ բաշխեք մոտ 5 մմ խորության վրա:Կշռեք բեռնված կշռման շիշը և գրանցեք քաշը (W2):Տեղադրեք բեռնված շիշը չորացման ջեռոցում՝ հանելով խցանը և թողնելով այն նաև խցիկում:Չորացնել փորձանմուշը 105±2℃ ջերմաստիճանում 3 ժամ:Խցիկը բացելուց հետո անմիջապես փակեք շիշը և թույլ տվեք, որ այն հասնի սենյակային ջերմաստիճանի չորացուցիչի մեջ:Ճշգրիտ կշռել կշռող շիշը խցանով և վերագրել քաշը (W3):Հաշվեք նմուշի չորացման տոկոսային կորուստը՝ օգտագործելով հետևյալ բանաձևը.
Հաշվարկի կորուստ չորացման ժամանակ (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Էնանտիոմերի պարունակությունը HPLC-ով.
Քիմիական և ռեակտիվներ.
n-Հեքսան AR դաս
Մեթանոլ HPLC դասի
Իզոպրոպիլ Ալկոհոլ HPLC դասի
Diethylamine AR դաս
Ստանդարտներ. L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ստանդարտ;L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer ստանդարտ
Շարժական փուլ. Պատրաստել n-հեքսանի, իզոպրոպիլային ալկոհոլի, մեթանոլի և դիէթիլամինի համասեռ խառնուրդ (65:20:15:0.1 v/v/v/v)
Բլանկի պատրաստում. 2,5 մլ մեթանոլ տեղափոխեք 10 մլ ծավալային կոլբայի մեջ, նոսրացրեք մինչև ծավալը շարժական ֆազով և խառնեք:
Համակարգի համապատասխանության նախապատրաստում.
Ճշգրիտ կշռեք և տեղափոխեք մոտ 5 մգ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ստանդարտ և L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer ստանդարտ 10 մլ ծավալային կոլբայի մեջ, լուծեք մոտ 2,5 մլ մեթանոլի մեջ, նոսրացրեք մինչև ծավալը շարժականով: փուլ և խառնել:
Թեստի պատրաստում.
Ճշգրիտ կշռել և մոտ 5 մգ նմուշ տեղափոխել 10 մոլ ծավալային կոլբայի մեջ, լուծել մոտ 2,5 մլ մեթանոլի մեջ, նոսրացնել մինչև ծավալը շարժական ֆազով և խառնել:
Գործիքային պարամետրեր.
Գործիք՝ HPLC հագեցած ներարկիչով, պոմպով, ուլտրամանուշակագույն դետեկտորով և ձայնագրիչով
Սյունակ՝ ChiralPak-IC (4,6 մմ x 250 մմ) 5 μ կամ համարժեք
Հոսքի արագությունը՝ 1,0 մլ/րոպե
Ալիքի երկարությունը՝ 260 նմ
Ներարկման ծավալը՝ 10 մկլ
Սյունակի միացման ջերմաստիճանը՝ 25℃
Տևողությունը՝ 20 րոպե
Ընթացակարգը
Ներարկեք լուծույթները, ինչպես նշված է հետևյալ հաջորդականությամբ.Գրանցեք քրոմատոգրամները և հաստատեք չափանիշները.
Ներարկումների նկարագրությունը Ներարկումների քանակը Չափանիշներ
Դատարկ պատրաստում 1 L-4-Նիտրոֆենիլալանի Մեթիլ Էսթեր HCl-ի կամ էնանտիոմերի պահպանման ժամանակ չպետք է նկատվի խանգարող գագաթնակետ:
Համակարգի պիտանիության պատրաստում 1 L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl-ի և էնանտիոմերի պիկի միջև թույլատրելիությունը պետք է լինի 2,0-ից ոչ պակաս:
Փորձարկման նախապատրաստում 1 Օգտագործեք փորձարկման քրոմատոգրամ՝ նմուշում էնանտիոմերի պարունակությունը որոշելու համար:
Հարաբերական պահպանման ժամանակներ.
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0
Էնանտիոմեր մոտ 1.11
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl-ի պահպանման ժամանակը մոտ 9,8 րոպե է:
Հաշվարկ. Փորձարկման պատրաստումից ստացված քրոմատոգրամայում անտեսեք բոլոր գագաթնակետերը, որոնք ակնկալվում են L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl և Enantiomer:Հաղորդեք էնանտիոմերի պարունակությունը նմուշում ըստ տարածքի նորմալացման մեթոդի:
Քրոմատոգրաֆիկ մաքրությունը և կեղտը HPLC-ով.
Քիմիական և ռեակտիվներ.
Դիամոնիումի ֆոսֆատ AR դաս
Ֆոսֆորական թթու AR դաս
Մեթանոլ HPLC դասի
Մաքրված ջուր
Ստանդարտներ
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ստանդարտ
4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate ստանդարտ
Բջջային փուլ-Ա
6,6 գ դիամոնիումի ֆոսֆատ լուծեք 1000 մլ մաքրված ջրի մեջ։Այս լուծույթի pH-ը ֆոսֆորաթթվով կարգավորեք մինչև 6.0:Զտել և գազազերծել:Նախքան լուծույթի pH-ը չափելը, չափավորեք pH հաշվիչը pH 4,01 և 7,00 ստանդարտ բուֆերային լուծույթով:
Բջջային փուլ-B
Մեթանոլ HPLC դասի
Համակարգի համապատասխանության նախապատրաստում
Ճշգրիտ կշռել և մոտ 25 մգ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ստանդարտ և 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate ստանդարտը տեղափոխել 50 մլ ծավալային կոլբայի մեջ, լուծել և նոսրացնել մեթանոլով և խառնել:
Թեստի պատրաստում.
Ճշգրիտ կշռում են և մոտ 25 մգ նմուշ տեղափոխում 50 մլ ծավալային կոլբայի մեջ, լուծվում և նոսրացնում մինչև ծավալը մեթանոլով և խառնում:
Գործիքային պարամետրեր.
Գործիք՝ HPLC հագեցած ներարկիչով, պոմպով, ուլտրամանուշակագույն դետեկտորով և ձայնագրիչով
Սյունակ՝ XTerra RP-18 (4,6 մմ x 150 մմ) 5 μ կամ համարժեք
Հոսքի արագությունը՝ 1,0 մլ/րոպե
Ալիքի երկարությունը՝ 265 նմ
Ներարկման ծավալը՝ 20 μL
Սյունակի միացման ջերմաստիճանը՝ 25℃
Տևողությունը՝ 45 րոպե
Գրադիենտ ծրագիր
Ժամանակ (min) Շարժական փուլ-A % Շարժական փուլ-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Ընթացակարգը:
Ներարկեք լուծույթները, ինչպես նշված է հետևյալ հաջորդականությամբ.Գրանցեք քրոմատոգրամները և հաստատեք չափանիշները.
Դատարկ պատրաստում 1 L-4-Նիտրոֆենիլալանի Մեթիլ Էսթեր HCl-ի պահպանման ժամանակում չպետք է նկատվի խանգարող գագաթնակետ:
Համակարգի համապատասխանության նախապատրաստում 1 L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl-ի պոչային գործակիցը պետք է լինի 2,0-ից ոչ պակաս:
Փորձարկման նախապատրաստում 1 Օգտագործեք փորձնական քրոմատոգրամ՝ քրոմատագրական մաքրությունը և կեղտերը որոշելու համար:
Հարաբերական պահպանման ժամանակներ.
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (պահման ժամանակը մոտ 11.4 րոպե)
4-Nitro-L-Phenylalanine Մոտ 0,4
Տոլուոլ Մոտ 2.3
Հաշվարկներ:
Փորձարկման պատրաստումից ստացված քրոմատոգրամայում դատարկ ուղղումից հետո արհամարհեք տոլուոլի գագաթնակետը:Հաղորդեք քրոմատոգրաֆիկ մաքրության, 4-Nitro-L-ֆենիլալանինի պարունակության և նմուշի ընդհանուր կեղտերի մասին՝ ըստ տարածքի նորմալացման մեթոդի: