L-4-Nitrophenylalanine Metil Ester HCl CAS 17193-40-7 Pabrik H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl >98,5% (HPLC)

Metode Analisis L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Deskripsi: Tempatkan sekitar 2 g sampel dalam cawan petri yang bersih dan kering dan amati penampilan sampel.Pelaporan: Laporkan pengamatan
Identifikasi: Bandingkan waktu retensi puncak utama dalam kromatogram sediaan uji dengan waktu retensi puncak utama dalam kromatogram praparasi kesesuaian sistem seperti yang diperoleh dalam kemurnian kromatografi dengan HPLC.
Kehilangan Pengeringan: Keringkan botol timbang dangkal bersumbat kaca pada suhu 105±2℃ selama 30 menit.Biarkan dingin sampai suhu kamar dalam desikator.Timbang dengan teliti botol timbang dengan sumbat dan catat beratnya (W1).Pindahkan sekitar 1 hingga 2g jumlah zat uji yang telah ditimbang secara akurat ke dalam botol timbang.Dengan menggoyang lembut ke samping, distribusikan benda uji secara merata hingga kedalaman sekitar 5 mm.Timbang botol timbang yang telah diisi dan catat beratnya (W2).Tempatkan botol yang sudah diisi ke dalam oven pengering, lepaskan sumbatnya dan tinggalkan juga di dalam bilik.Keringkan sampel uji pada suhu 105±2℃ selama 3 jam.Setelah membuka bilik, segera tutup botol, dan biarkan sampai suhu kamar dalam desikator.Timbang secara akurat botol timbang dengan sumbat dan catat kembali beratnya (W3).Hitung persentase kehilangan pada pengeringan sampel dengan menggunakan rumus berikut:
Perhitungan Rugi pengeringan (% b/b)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Konten Enansiomer oleh HPLC:
Kimia & Reagen:
kelas n-Hexane AR
Kelas metanol HPLC
Kelas Isopropil Alkohol HPLC
Kelas dietilamina AR
Standar: standar L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl;Standar enansiomer L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl
Fase Gerak: Siapkan campuran homogen n-Heksana, Isopropil Alkohol, Metanol dan Dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Persiapan Blanko: Pindahkan 2,5 ml Metanol ke dalam labu ukur 10 ml, encerkan hingga tanda volume dengan fase gerak dan campur.
Persiapan kesesuaian sistem:
Timbang dengan teliti dan pindahkan masing-masing sekitar 5 mg L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl standard dan L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl standard dalam labu takar 10 ml, larutkan dalam sekitar 2,5 ml metanol, encerkan hingga volume dengan alat gerak fase dan campuran.
Persiapan Ujian:
Timbang dengan teliti dan pindahkan sekitar 5 mg sampel dalam labu takar 10 mol, larutkan dalam sekitar 2,5 ml metanol, encerkan hingga tanda dengan fase gerak dan campur.
Parameter instrumen:
Instrumen: HPLC dilengkapi dengan injektor, Pompa, detektor UV dan Perekam
Kolom: ChiralPak-IC (4.6mm x 250mm) 5 μ atau setara
Laju aliran: 1,0 ml/menit
Panjang gelombang: 260nm
Volume injeksi: 10 μL
Suhu coven kolom .: 25 ℃
Waktu berjalan: 20 menit
Prosedur
Suntikkan solusi seperti yang disebutkan dalam urutan berikut.Catat kromatogram dan konfirmasi kriteria:
Uraian Suntikan Jumlah Suntikan Kriteria
Persiapan Kosong 1 Tidak ada puncak yang mengganggu harus diamati pada waktu retensi L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl atau enansiomer.
Persiapan kesesuaian sistem 1 Resolusi antara L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl dan puncak enansiomer harus tidak kurang dari 2,0
Persiapan pengujian 1 Gunakan kromatogram uji untuk menentukan kandungan enansiomer dalam sampel.
Waktu Retensi Relatif:
L-4-Nitrofenilalanin Metil Ester HCl 1.0
Enansiomer Tentang 1.11
Waktu retensi L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl adalah sekitar 9,8 menit.
Perhitungan: Pada kromatogram yang diperoleh dari sediaan uji, abaikan semua puncak yang diharapkan L-4-Nitrofenilalanin Metil Ester HCl dan Enantiomer.Laporkan kandungan enansiomer dalam sampel dengan metode normalisasi area.
Kemurnian dan Kotoran Chromatogrpahic oleh HPLC:
Kimia & Reagen:
Kelas AR Diamonium fosfat
Kelas AR asam fosfat
Kelas metanol HPLC
Air yang dimurnikan
Standar
Standar L-4-Nitrofenilalanin Metil Ester HCl
4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate standar
Fase Seluler-A
Larutkan 6,6 g Diamonium fosfat dalam 1000ml air murni.Sesuaikan pH larutan ini menjadi 6,0 dengan asam fosfat.Saring dan degas.Sebelum mengukur pH larutan, kalibrasi pH meter dengan larutan buffer standar pH 4,01 DAN 7,00.
Fase Seluler-B
Kelas metanol HPLC
Persiapan Kesesuaian Sistem
Timbang dengan teliti dan pindahkan masing-masing sekitar 25 mg standar L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl dan standar 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate dalam labu takar 50 ml, larutkan dan encerkan dengan volume dengan metanol dan campur.
Persiapan Ujian:
Timbang dengan teliti dan pindahkan sekitar 25 mg sampel ke dalam labu takar 50 ml, larutkan dan encerkan hingga tanda dengan metanol dan campur.
Parameter instrumen:
Instrumen: HPLC dilengkapi dengan injektor, Pompa, detektor UV dan Perekam
Kolom: XTerra RP-18 (4.6mm x 150mm) 5 μ atau setara
Laju aliran: 1,0 ml/menit
Panjang gelombang: 265nm
Volume injeksi: 20 μL
Suhu coven kolom .: 25 ℃
Waktu berjalan: 45 menit
Program Gradien
Waktu (mnt) Fase Seluler-A % Fase Seluler-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Prosedur:
Suntikkan solusi seperti yang disebutkan dalam urutan berikut.Catat kromatogram dan konfirmasi kriteria:
Persiapan Kosong 1 Tidak ada puncak yang mengganggu harus diamati pada waktu retensi L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl.
Persiapan kesesuaian sistem 1 Faktor tailing untuk puncak L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl harus tidak kurang dari 2.0
Persiapan pengujian 1 Gunakan kromatogram uji untuk menentukan kemurnian dan ketidakmurnian kromatografi.
Waktu Retensi Relatif:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (waktu retensi sekitar 11,4 menit)
4-Nitro-L-Fenilalanin Sekitar 0,4
Toluena Sekitar 2.3
Perhitungan:
Pada kromatogram yang diperoleh dari sediaan uji, setelah koreksi blangko, abaikan puncak akibat toluena.Laporkan kemurnian kromatografi, kandungan 4-Nitro-L-Fenilalanin, dan total pengotor dalam sampel dengan metode normalisasi area.