L-4-nitrofenilalanina metil estere HCl CAS 17193-40-7 H-Phe (4-NO2) -OMe · HCl Assay >98,5% (HPLC) Fabbrica

Metodo di analisi dell'estere metilico di L-4-nitrofenilalanina HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Descrizione: Porre circa 2 g di campione in una piastra di Petri pulita e asciutta e osservare l'aspetto del campione.Segnalazione: segnalare l'osservazione
Identificazione: confrontare il tempo di ritenzione del picco maggiore nel cromatogramma della preparazione in esame con il tempo di ritenzione del picco maggiore nel cromatogramma della preparazione di idoneità del sistema ottenuto in purezza cromatografica mediante HPLC.
Perdita all'asciugatura: asciugare un biberon poco profondo con tappo di vetro a 105 ± 2 ℃ per 30 minuti.Lasciare raffreddare a temperatura ambiente in un essiccatore.Pesare accuratamente il biberon con tappo e annotare il peso (W1).Trasferire circa da 1 a 2 g di quantità accuratamente pesata di sostanza in esame nel biberon.Agitando delicatamente lateralmente, distribuire il campione di prova il più uniformemente possibile fino a una profondità di circa 5 mm.Pesare il biberon caricato e registrare il peso (W2).Mettere la bottiglia caricata nel forno di asciugatura, togliendo il tappo e lasciandola anch'essa nella camera.Asciugare il campione di prova a 105 ± 2 ℃ per 3 ore.All'apertura della camera, richiudere prontamente il flacone e lasciare che raggiunga la temperatura ambiente in un essiccatore.Pesare accuratamente il biberon con tappo e registrare il peso (W3).Calcolare la percentuale di perdita all'essiccamento del campione utilizzando la seguente formula:
Calcolo Perdita all'essiccazione (% p/p)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Contenuto di enantiomero mediante HPLC:
Chimica e reagenti:
Grado AR n-esano
Grado per HPLC a metanolo
Alcool isopropilico grado HPLC
Grado di dietilammina AR
Standard: L-4-nitrofenilalanina Methyl Ester HCl standard;Standard di enantiomero HCl dell'estere metilico di L-4-nitrofenilalanina
Fase mobile: preparare una miscela omogenea di n-esano, alcol isopropilico, metanolo e dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Preparazione del bianco: trasferire 2,5 ml di metanolo in un matraccio tarato da 10 ml, portare a volume con la fase mobile e miscelare.
Preparazione dell'idoneità del sistema:
Pesare accuratamente e trasferire circa 5 mg ciascuno di L-4-nitrofenilalanina Methyl Ester HCl standard e L-4-nitrofenilalanina Methyl Ester HCl standard in un matraccio graduato da 10 ml, sciogliere in circa 2,5 ml di metanolo, portare a volume con mobile fase e mix.
Preparazione al test:
Pesare accuratamente e trasferire circa 5 mg di campione in un matraccio tarato da 10 mol, sciogliere in circa 2,5 ml di metanolo, portare a volume con fase mobile e miscelare.
Parametri strumentali:
Strumento: HPLC dotato di iniettore, pompa, rivelatore UV e registratore
Colonna: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ o equivalente
Portata: 1,0 ml/minuto
Lunghezza d'onda: 260 nm
Volume di iniezione: 10 μL
Temp. Coven colonna: 25 ℃
Durata: 20 minuti
Procedura
Iniettare le soluzioni come indicato nella seguente sequenza.Registrare i cromatogrammi e confermare i criteri:
Descrizione delle iniezioni Numero di iniezioni Criteri
Preparazione del bianco 1 Nessun picco interferente dovrebbe essere osservato al tempo di ritenzione di L-4-nitrofenilalanina Methyl Ester HCl o enantiomero.
Preparazione dell'idoneità del sistema 1 La risoluzione tra L-4-nitrofenilalanina metil estere HCl e il picco dell'enantiomero non deve essere inferiore a 2,0
Preparazione del test 1 Utilizzare il cromatogramma di prova per determinare il contenuto di enantiomero nel campione.
Tempi di conservazione relativi:
L-4-nitrofenilalanina estere metilico HCl 1,0
Enantiomero Circa 1.11
Il tempo di ritenzione di L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl è di circa 9,8 minuti.
Calcolo: nel cromatogramma ottenuto dalla preparazione del test, ignorare tutti i picchi ad eccezione di L-4-nitrofenilalanina metil estere HCl ed enantiomero.Riportare il contenuto enantiomero nel campione per metodo di normalizzazione dell'area.
Purezza cromatografica e impurità mediante HPLC:
Chimica e reagenti:
Diammonio fosfato grado AR
Acido fosforico grado AR
Grado per HPLC a metanolo
Acqua purificata
Standard
Standard di L-4-nitrofenilalanina estere metilico HCl
Standard di 4-nitro-L-fenilalanina monoidrato
Fase mobile A
Sciogliere 6,6 g di fosfato biammonico in 1000 ml di acqua purificata.Regolare il pH di questa soluzione a 6,0 con acido fosforico.Filtrare e degasare.Prima di misurare il pH della soluzione, calibrare il pHmetro con soluzione tampone standard pH 4.01 E 7.00.
Fase mobile B
Grado per HPLC a metanolo
Preparazione dell'idoneità del sistema
Pesare accuratamente e trasferire circa 25 mg ciascuno di L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl standard e 4-Nitro-L-Phenylalanine monoidrato standard in un matraccio tarato da 50 ml, sciogliere e portare a volume con metanolo e miscelare.
Preparazione al test:
Pesare accuratamente e trasferire circa 25 mg di campione in un matraccio tarato da 50 ml, dissolvere e portare a volume con metanolo e miscelare.
Parametri strumentali:
Strumento: HPLC dotato di iniettore, pompa, rivelatore UV e registratore
Colonna: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ o equivalente
Portata: 1,0 ml/minuto
Lunghezza d'onda: 265 nm
Volume di iniezione: 20 μL
Temp. Coven colonna: 25 ℃
Durata: 45 minuti
Programma gradiente
Tempo (min) Fase mobile A % Fase mobile B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedura:
Iniettare le soluzioni come indicato nella seguente sequenza.Registrare i cromatogrammi e confermare i criteri:
Preparazione del bianco 1 Nessun picco interferente deve essere osservato al tempo di ritenzione di L-4-nitrofenilalanina Methyl Ester HCl.
Preparazione dell'idoneità del sistema 1 Il fattore di scodamento per il picco dell'estere metilico di L-4-nitrofenilalanina non deve essere inferiore a 2,0
Preparazione del test 1 Utilizzare il cromatogramma di prova per determinare la purezza cromatografica e le impurità.
Tempi di conservazione relativi:
L-4-nitrofenilalanina Methyl Ester HCl 1.0 (tempo di ritenzione circa 11,4 minuti)
4-nitro-L-fenilalanina Circa 0,4
Toluene Circa 2.3
Calcoli:
Nel cromatogramma ottenuto dalla preparazione del test, dopo la correzione del bianco, ignorare il picco dovuto al toluene.Riportare la purezza cromatografica, il contenuto di 4-nitro-L-fenilalanina e le impurità totali nel campione in base al metodo di normalizzazione dell'area.