Analisi CAS 128-13-2 dell'acido ursodesossicolico (UDCA) 99,0~101,0%

ACIDO URSODEOSSICOLICO
C24H40O4 Signor 392.6[128-13-2]
DEFINIZIONE
Acido 3α,7β-diidrossi-5β-colan-24-oico.
Contenuto: dal 99,0% al 101,0% (sostanza essiccata).
CARATTERI
Aspetto: polvere bianca o quasi bianca.
Solubilità: praticamente insolubile in acqua, facilmente solubile in etanolo (96 per cento), poco solubile in acetone, praticamente insolubile in cloruro di metilene.
mp: circa 202℃.
IDENTIFICAZIONE
Prima identificazione: A.
Seconda identificazione: B, C.
A. Spettrofotometria di assorbimento infrarosso (2.2.24).
Confronto: acido ursodesossicolico CRS.
B. Esaminare i cromatogrammi ottenuti nel test per l'impurità C.
Risultati: la macchia principale nel cromatogramma ottenuto con la soluzione in esame (b) è simile per posizione, colore e dimensione alla macchia principale nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (a).
C. Sciogliere circa 10 mg in 1 mL di acido solforico R. Aggiungere 0,1 mL di soluzione di formaldeide R e lasciare riposare per 5 min.Aggiungere 5 mL di acqua R. La sospensione ottenuta è blu verdastra.
PROVE
Rotazione ottica specifica (2.2.7): da + 58,0 a + 62,0 (sostanza essiccata).
Sciogliere 0,500 g in etanolo anidro R e diluire a 25,0 mL con lo stesso solvente.
Impurità C. Cromatografia su strato sottile (2.2.27).
Miscela di solventi: acqua R, acetone R (10:90 V/V).
Soluzione di prova (a).Sciogliere 0,40 g della sostanza da esaminare nella miscela di solventi e diluire a 10 mL con la miscela di solventi.
Soluzione di prova (b).Diluire 1 mL della soluzione di prova (a) a 10 mL con la miscela di solventi.
Soluzione di riferimento (a).Sciogliere 40 mg di acido ursodesossicolico CRS nella miscela di solventi e diluire a 10 mL con la miscela di solventi.
Soluzione di riferimento (b).Sciogliere 20 mg di acido litocolico CRS (impurità C) nella miscela di solventi e diluire a 10,0 mL con la miscela di solventi (soluzione A).Diluire 2,0 ml di questa soluzione a 100,0 ml con la miscela di solventi.
Soluzione di riferimento (c).A 5 mL di soluzione A aggiungere 10 mg di acido chenodesossicolico CRS (impurità A) e diluire a 50 mL con la miscela di solventi.
Piastra: piastra in gel di silice TLC R.
Fase mobile: acido acetico glaciale R, acetone R, metilenecloruro R (1:30:60 V/V/V).
Applicazione: 5μL.
Sviluppo: oltre i 2/3 del piatto.
Asciugatura: a 120℃ per 10 min.
Rilevazione: spruzzare immediatamente con una soluzione di 47,6 g/L di acido fosfomolibdico R in una miscela di 1 volume di acido solforico R e 20 volumi di acido acetico glaciale R e riscaldare a 120°C fino a quando appaiono macchie blu su uno sfondo più chiaro.
Idoneità del sistema: soluzione di riferimento (c):
- il cromatogramma mostra 2 macchie principali nettamente separate.
Limite: soluzione di prova (a):
-impurità C: qualsiasi macchia dovuta all'impurità C non è più intensa della macchia principale nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (b) (0,1 per cento).
Sostanze correlate.Cromatografia liquida (2.2.29).
Miscela di solventi: metanolo R, fase mobile (10:90 V/V).
Soluzione di prova.Sciogliere 60 mg della sostanza da esaminare nella miscela di solventi e diluire a 20,0 mL con la miscela di solventi.
Soluzione di riferimento (a).Sciogliere il contenuto di una fiala di acido ursodesossicolico per l'idoneità del sistema CRS (contenente impurità A e H) in 1,0 mL della miscela di solventi.
Soluzione di riferimento (b).Diluire 1,0 mL della soluzione di prova a 100,0 mL con la miscela di solventi.Diluire 1,0 mL di questa soluzione a 10,0 mL con la miscela di solventi.
Colonna:
-dimensione: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm;
-fase stazionaria: gel di silice octadecylsilil end-capped percromatografia R (5 μm);
- temperatura: 40℃ ± 1℃.
Fase mobile: miscelare 30 volumi di acetonitrile R, 37 volumi di una soluzione da 0,78 g/L di sodio diidrogeno fosfato R regolato a pH 3 con acido fosforico R e 40 volumi di metanolo R.
Portata: 0,8 ml/min.
Rilevamento: rifrattometro a 35 ± 1℃.
Iniezione: 150 microlitri.
Durata: 4 volte il tempo di ritenzione dell'acido ursodesossicolico.
Identificazione delle impurità: utilizzare il cromatogramma fornito con acido ursodesossicolico per l'idoneità del sistema CRS e il cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (a) per identificare i picchi dovuti alle impurità A e H.
Ritenzione relativa con riferimento all'acido ursodesossicolico (tempo di ritenzione = circa 14 min): impurità H = circa 0,9;impurità A = circa 2,8.
Idoneità del sistema: soluzione di riferimento (a):
-risoluzione: minimo 1,5 tra i picchi dovuti all'impurità H e all'acido ursodesossicolico.
Limiti:
- impurità A: non più di 10 volte l'area del picco principale nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (b) (1,0%);
- impurità non specificate: per ciascuna impurità, non più dell'area del picco principale nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (b) (0,10 per cento);
- totale: non più di 15 volte l'area del picco principale nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (b) (1,5 per cento);
-limite di esclusione: 0,5 volte l'area del picco principale nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (b) (0,05 percento).
Metalli pesanti (2.4.8): massimo 20 ppm.
1,0 g è conforme al test C. Preparare la soluzione di riferimento utilizzando 2 mL di soluzione standard di piombo (10 ppm Pb) R.
Perdita all'essiccazione (2.2.32): massimo 1,0 per cento, determinato su 1.000 g mediante essiccazione in stufa a 105℃.
Ceneri solfatate (2.4.14): massimo 0,1 per cento, determinato su 1,0 g.
SAGGIO
Sciogliere 0,350 g in 50 mL di etanolo (96%) R, precedentemente neutralizzato a 0,2 mL di soluzione di fenolftaleina R. Aggiungere 50 mL di acqua R e titolare con idrossido di sodio 0,1 M fino ad ottenere una colorazione rosa.
1 mL di idrossido di sodio 0,1 M equivale a 39,26 mg di C24H40O4.
IMPURITÀ
Impurezze specificate: A, C.
Altre impurità rilevabili (le seguenti sostanze, se presenti a un livello sufficiente, sarebbero rilevate dall'uno o dall'altro dei test nella monografia. Sono limitate dal criterio generale di accettazione per altre/non specificate impurezze e/o dalla monografia generale Sostanze per uso farmaceutico (2034).Non è pertanto necessario identificare queste impurità per dimostrare la conformità.Vedi anche 5.10.
Controllo delle impurità nelle sostanze per uso farmaceutico): B, D, E, F, G, H, I.
A. Acido 3α,7α-diidrossi-5β-colan-24-oico (acido chenodesossicolico),
B. Acido 3α,7α,12α-triidrossi-5β-colan-24-oico (acido colico),
C. Acido 3α-idrossi-5β-colan-24-oico (acido litocolico),
D. Acido 3α,7β,12α-triidrossi-5β-colan-24-oico (acido ursocolico),
E. Acido 3α,12α-diidrossi-5β-colan-24-oico (acido desossicolico),
F. Acido 3α-idrossi-7-osso-5β-colan-24-oico,
G. metil 3α,7β-diidrossi-5β-colan-24-oato,
H. Acido 3β,7β-diidrossi-5β-colan-24-oico,
I. 5β-colano-3α,7β,24-triolo.