L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-Ome ·HCl Assay >98.5% (HPLC) រោងចក្រ

វិធីសាស្រ្តនៃការវិភាគ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-Ome·HCl) (CAS: 17193-40-7)
ការពិពណ៌នា៖ ដាក់សំណាកប្រហែល 2 ក្រាមក្នុងចានស្អាត និងស្ងួត ហើយសង្កេតមើលរូបរាងរបស់គំរូ។រាយការណ៍៖ រាយការណ៍ពីការសង្កេត
ការកំណត់អត្តសញ្ញាណ៖ ប្រៀបធៀបរយៈពេលរក្សាទុកនៃកំពូលដ៏សំខាន់នៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាមនៃការរៀបចំការធ្វើតេស្តជាមួយនឹងពេលវេលារក្សាទុកនៃកំពូលដ៏សំខាន់នៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាមនៃការរៀបចំភាពស័ក្តិសមរបស់ប្រព័ន្ធ ដូចដែលទទួលបាននៅក្នុងភាពបរិសុទ្ធក្រូម៉ាតូក្រាមដោយ HPLC ។
ការបាត់បង់លើការសម្ងួត៖ សម្ងួតដបទម្ងន់រាក់ដែលបិទដោយកញ្ចក់នៅសីតុណ្ហភាព 105 ± 2 ℃ រយៈពេល 30 នាទី។ទុកវាឱ្យត្រជាក់ដល់សីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់ក្នុងម៉ាស៊ីនបន្សុត។ថ្លឹងដបថ្លឹងអោយបានត្រឹមត្រូវជាមួយ stopper និងកត់ត្រាទំងន់ (W1)។ផ្ទេរប្រហែល 1 ទៅ 2 ក្រាមនៃបរិមាណនៃសារធាតុសាកល្បងដែលបានថ្លឹងត្រឹមត្រូវទៅក្នុងដបថ្លឹង។ដោយថ្នមៗ អង្រួនចំហៀង ចែកចាយគំរូតេស្តឱ្យស្មើៗគ្នាតាមដែលអាចអនុវត្តបានទៅជម្រៅប្រហែល 5 មីលីម៉ែត្រ។ថ្លឹងទម្ងន់ដបដែលផ្ទុករួចកត់ត្រាទម្ងន់ (W2) ។ដាក់ដបដែលផ្ទុកនៅក្នុងឡសម្ងួត ដោះគម្របចេញ ហើយទុកវាក្នុងបន្ទប់ផងដែរ។សម្ងួតគំរូសាកល្បងនៅសីតុណ្ហភាព 105 ± 2 ℃ រយៈពេល 3 ម៉ោង។នៅពេលបើកអង្គជំនុំជម្រះ សូមបិទដបភ្លាមៗ ហើយអនុញ្ញាតឱ្យវាមកសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់នៅក្នុងម៉ាស៊ីន desiccator ។ថ្លឹងដបថ្លឹងអោយបានត្រឹមត្រូវដោយដាក់ទ្រនិច និងយកទម្ងន់ឡើងវិញ (W3)។គណនាភាគរយនៃការបាត់បង់លើការសម្ងួតគំរូដោយប្រើរូបមន្តខាងក្រោម៖
ការគណនាការបាត់បង់លើការសម្ងួត (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
ខ្លឹមសារ Enantiomer ដោយ HPLC៖
ជាតិគីមី និងសារធាតុប្រតិកម្ម៖
n-Hexane AR ថ្នាក់
មេតាណុល HPLC ថ្នាក់
កម្រិតជាតិអាល់កុល Isopropyl HPLC
ថ្នាក់ទី Diethylamine AR
ស្តង់ដារ៖ ស្តង់ដារ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl;L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ស្តង់ដារ enantiomer
ដំណាក់កាលចល័ត៖ រៀបចំល្បាយដូចគ្នានៃ n-Hexane, Isopropyl Alcohol, Methanol និង Diethylamine (65:20:15:0.1 v/v/v/v)
ការរៀបចំទទេ: ផ្ទេរ 2.5ml នៃ Methanol ក្នុងដប volumetric 10ml, ពនឺទៅកម្រិតសំឡេងជាមួយដំណាក់កាលចល័តនិងលាយ។
ការរៀបចំប្រព័ន្ធសមស្រប៖
ថ្លឹងទម្ងន់ឲ្យបានត្រឹមត្រូវ និងផ្ទេរប្រហែល 5mg នីមួយៗនៃស្តង់ដារ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl និង L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer standard ក្នុងដបចំណុះ 10ml រំលាយក្នុងបរិមាណមេតាណុលប្រហែល 2.5ml ពនឺតាមបរិមាណជាមួយទូរសព្ទ។ ដំណាក់កាលនិងលាយ។
ការរៀបចំតេស្តៈ
ថ្លឹងទម្ងន់ឲ្យបានត្រឹមត្រូវ និងផ្ទេរសំណាកប្រហែល 5 មីលីក្រាមក្នុងដបបរិមាណ 10 mol រំលាយក្នុងប្រហែល 2.5ml នៃមេតាណុល ពនឺទៅបរិមាណជាមួយដំណាក់កាលចល័ត និងលាយ។
ប៉ារ៉ាម៉ែត្រឧបករណ៍៖
ឧបករណ៍៖ HPLC បំពាក់ដោយ injector, Pump, UV detector and recorder
ជួរ៖ ChiralPak-IC (4.6mm x 250mm) 5 μ ឬសមមូល
អត្រាលំហូរ: 1.0 មីលីលីត្រ / នាទី។
ប្រវែងរលក៖ ២៦០ nm
បរិមាណចាក់: 10 μL
ជួរ​ឈរ​សីតុណ្ហភាព​: 25 ℃​
ពេលវេលាដំណើរការ៖ ២០ នាទី។
នីតិវិធី
ចាក់ដំណោះស្រាយដូចបានរៀបរាប់ក្នុងលំដាប់ខាងក្រោម។កត់ត្រាក្រូម៉ាតូក្រាម និងបញ្ជាក់លក្ខណៈវិនិច្ឆ័យ៖
ការពិពណ៌នាអំពីចំនួននៃការចាក់ថ្នាំ លក្ខណៈវិនិច្ឆ័យនៃការចាក់
ការត្រៀមលក្ខណៈទទេ 1 គ្មានការជ្រៀតជ្រែកណាមួយគួរតែត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅពេលរក្សាទុក L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ឬ enantiomer ។
ការរៀបចំភាពសមស្របនៃប្រព័ន្ធ 1 ដំណោះស្រាយរវាង L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl និងកំពូល enantiomer មិនគួរតិចជាង 2.0
ការរៀបចំតេស្ត 1 ប្រើតេស្តក្រូម៉ាតូក្រាមដើម្បីកំណត់មាតិកា enantiomer នៅក្នុងគំរូ។
ពេលវេលារក្សាទំនាក់ទំនង៖
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0
Enantiomer អំពី 1.11
ពេលវេលារក្សាទុក L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl គឺប្រហែល 9.8 នាទី។
ការគណនា៖ នៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាមដែលទទួលបានពីការរៀបចំការធ្វើតេស្ត មិនយកចិត្តទុកដាក់លើកំពូលទាំងអស់រំពឹងថា L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl និង Enantiomer ។រាយការណ៍អំពីមាតិកា enantiomer ក្នុងគំរូដោយវិធីសាស្ត្រធ្វើឱ្យតំបន់ធម្មតា។
ភាពបរិសុទ្ធ និងសារធាតុមិនបរិសុទ្ធ Chromatogrpahic ដោយ HPLC៖
ជាតិគីមី និងសារធាតុប្រតិកម្ម៖
Diammonium phosphate AR ថ្នាក់ទី
អាស៊ីតផូស្វ័រ AR ថ្នាក់ទី
មេតាណុល HPLC ថ្នាក់
ទឹកបរិសុទ្ធ
ស្តង់ដារ
ស្តង់ដារ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl
4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate ស្តង់ដារ
ដំណាក់កាលចល័ត A
រំលាយ 6.6 ក្រាមនៃ Diammonium phosphate ក្នុង 1000ml នៃទឹកបរិសុទ្ធ។លៃតម្រូវ pH នៃដំណោះស្រាយនេះទៅ 6.0 ជាមួយនឹងអាស៊ីតផូស្វ័រ។តម្រងនិង degas ។មុននឹងវាស់ pH នៃសូលុយស្យុង សូមក្រិតខ្នាត pH meter ជាមួយនឹងដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្នស្តង់ដារ pH 4.01 និង 7.00 ។
ដំណាក់កាលចល័ត-ខ
មេតាណុល HPLC ថ្នាក់
ការរៀបចំសមភាពប្រព័ន្ធ
ថ្លឹងទម្ងន់ឲ្យបានត្រឹមត្រូវ និងផ្ទេរប្រហែល 25mg នីមួយៗនៃស្តង់ដារ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl និងស្តង់ដារ 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate ក្នុងដបចំណុះ 50ml រំលាយក្នុងបរិមាណជាមួយមេតាណុល និងលាយ។
ការរៀបចំតេស្តៈ
ថ្លឹងទម្ងន់ឲ្យបានត្រឹមត្រូវ និងផ្ទេរគំរូប្រហែល 25mg ក្នុងដបបរិមាណ 50ml រំលាយ និងពនឺតាមបរិមាណជាមួយមេតាណុល និងលាយ។
ប៉ារ៉ាម៉ែត្រឧបករណ៍៖
ឧបករណ៍៖ HPLC បំពាក់ដោយ injector, Pump, UV detector and recorder
ជួរ៖ XTerra RP-18 (4.6mm x 150mm) 5 μ ឬសមមូល
អត្រាលំហូរ: 1.0 មីលីលីត្រ / នាទី។
ប្រវែងរលក៖ 265 nm
បរិមាណចាក់: 20 μL
ជួរ​ឈរ​សីតុណ្ហភាព​: 25 ℃​
ពេលវេលាដំណើរការ៖ ៤៥ នាទី។
កម្មវិធីជម្រាល
ពេលវេលា (នាទី) Mobile Phase-A % Mobile Phase-B %
០.០១ ៩០ ១០
១៥ ៦០ ៤០
៣៥ ៤០ ៦០
៤០ ៣៥ ៦៥
៤១ ៩០ ១០
៤៥ ៩០ ១០
នីតិវិធី៖
ចាក់ដំណោះស្រាយដូចបានរៀបរាប់ក្នុងលំដាប់ខាងក្រោម។កត់ត្រាក្រូម៉ាតូក្រាម និងបញ្ជាក់លក្ខណៈវិនិច្ឆ័យ៖
ការរៀបចំទទេ 1 គ្មានការជ្រៀតជ្រែកណាមួយគួរតែត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅពេលរក្សាទុក L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ។
ការរៀបចំភាពសមស្របរបស់ប្រព័ន្ធ 1 កត្តាកន្ទុយសម្រាប់កំពូល L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl គួរតែមិនតិចជាង 2.0
ការរៀបចំតេស្ត 1 ប្រើតេស្តក្រូម៉ាតូក្រាមដើម្បីកំណត់ភាពបរិសុទ្ធ និងភាពមិនបរិសុទ្ធនៃក្រូម៉ាតូក្រាម។
ពេលវេលារក្សាទំនាក់ទំនង៖
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (រយៈពេលរក្សាទុកប្រហែល 11.4 នាទី)
4-Nitro-L-Phenylalanine ប្រហែល 0.4
Toluene អំពី 2.3
ការគណនា៖
នៅក្នុង chromatogram ដែលទទួលបានពីការរៀបចំការធ្វើតេស្ត បន្ទាប់ពីការកែតម្រូវទទេ មិនយកចិត្តទុកដាក់លើកំពូលដោយសារតែ toluene ។រាយការណ៍ពីភាពបរិសុទ្ធ chromatographic មាតិកា 4-Nitro-L-Phenylalanine និងភាពមិនបរិសុទ្ធសរុបនៅក្នុងសំណាកដោយវិធីសាស្ត្រធ្វើឱ្យតំបន់ធម្មតា។