L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98.5% (HPLC) Fabréck

Method vun Analyse vun L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Beschreiwung: Plaz ongeféier 2 g Probe an engem propperen an dréchene Petri-Schale a beobachtet d'Erscheinung vun der Probe.Berichterstattung: Rapport d'Observatioun
Identifikatioun: Vergläicht d'Retentiounszäit vum grousse Peak am Chromatogramm vun der Testpräparatioun mat der Retentiounszäit vum grousse Peak am Chromatogramm vun der Systemgëignungspräparatioun wéi an der chromatographescher Rengheet duerch HPLC kritt.
Verloscht bei der Trocknung: Dréchent eng flësseg Waagefläsch mat Glasstopper bei 105 ± 2 ℃ fir 30 Minutten.Loosst et an engem Desciccator op Raumtemperatur ofkillen.Weien präzis d'Gewiichtfläsch mat Stopper a notéiert d'Gewiicht (W1).Transfert ongeféier 1 bis 2g präzis gewiicht Quantitéit vun Testsubstanz an d'Gewiichtfläsch.Verdeelt d'Testexemplar esou gläichméisseg wéi méiglech op eng Tiefe vu ronn 5 mm duerch sanft, säitlech rëselen.Waacht déi gelueden Gewiichtsfläsch a notéiert d'Gewiicht (W2).Setzt déi geluede Fläsch an den Trocknenofen, hëlt de Stopper ewech a léisst et och an der Chamber.Dréchent d'Testprobe bei 105 ± 2 ℃ fir 3 Stonnen.Wann Dir d'Kammer opmaacht, maach d'Fläsch prompt zou, a léisst et op Raumtemperatur an engem Desiccator kommen.Weien präziist d'Gewiichtfläsch mat Stopper a recoed d'Gewiicht (W3).Berechent de Prozentsaz Verloscht bei der Trocknung vun der Probe mat der folgender Formel:
Berechnungsverloscht beim Trocknung (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomer Inhalt vun HPLC:
Chemesch & Reagenz:
n-Hexane AR Grad
Methanol HPLC Grad
Isopropyl Alkohol HPLC Grad
Diethylamine AR Grad
Standards: L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl Standard;L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl Enantiomer Standard
Mobil Phase: Bereet eng homogen Mëschung aus n-Hexan, Isopropylalkohol, Methanol an Diethylamine (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Blank Virbereedung: Transfer 2,5 ml Methanol an enger 10 ml Volumetresch Kolbe, verdünnt op Volumen mat mobiler Phase a vermëschen.
System suitability Virbereedung:
Maacht präzis a transferéiert ongeféier 5 mg all L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl Standard an L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl Enantiomer Standard an enger 10 ml Volumetresch Kolbe, opléisen an ongeféier 2,5 ml Methanol, verdünnt bis Volumen mat Handy Phase a mixen.
Test Virbereedung:
Maacht präzis a transferéiert ongeféier 5 mg Probe an eng 10-mol Volumetresch Kolbe, léist an ongeféier 2,5 ml Methanol op, verdënnt op Volumen mat mobiler Phase a vermëschen.
Instrumental Parameteren:
Instrument: HPLC equipéiert mat Injektor, Pompel, UV Detektor a Recorder
Kolonn: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ oder gläichwäerteg
Flowrate: 1,0 ml/min
Wellelängt: 260 nm
Injektiounsvolumen: 10 μL
Kolonne Coven Temperatur: 25 ℃
Lafzäit: 20 Minutten
Prozedur
Injizéieren d'Léisungen wéi an der folgender Sequenz erwähnt.Notéiert d'Chromatogramme a bestätegt d'Critèren:
Beschreiwung vun Injections Zuel vun Injections Critèren
Blank Virbereedung 1 Keen interferéierend Peak soll bei der Retentiounszäit vu L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl oder Enantiomer observéiert ginn.
System suitability Virbereedung 1 Resolutioun tëscht L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl an Enantiomer Peak soll net manner wéi 2,0 sinn
Testpräparatioun 1 Benotzt Testchromatogramm fir den Enantiomergehalt an der Probe ze bestëmmen.
Relativ Retentiounszäiten:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0
Enantiomer Ongeféier 1.11
Retentiounszäit vu L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ass ongeféier 9,8 Minutten.
Berechnung: Am Chromatogramm, deen aus Testpräparatioun kritt gëtt, ignoréiert all Peaks, erwaarden L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl an Enantiomer.Bericht den Enantiomergehalt an der Probe no Gebittnormaliséierungsmethod.
Chromatografesch Rengheet an Gëftstoffer duerch HPLC:
Chemesch & Reagenz:
Diammoniumphosphat AR Grad
Phosphorsäure AR Grad
Methanol HPLC Grad
Gereinigt Waasser
Standarden
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl Standard
4-Nitro-L-Phenylalanin Monohydrat Standard
Mobile Phase-A
Opléisen 6,6 g Diammoniumphosphat an 1000ml gereinegt Waasser.Ajustéiert de pH vun dëser Léisung op 6,0 mat Phosphorsäure.Filter an entgasen.Ier Dir de pH vun der Léisung moosst, kalibréiert de pH Meter mat Standard Pufferléisung pH 4.01 AN 7.00.
Mobile Phase-B
Methanol HPLC Grad
System Suitability Virbereedung
Maacht präzis a transferéiert ongeféier 25 mg all L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl Standard a 4-Nitro-L-Phenylalanin Monohydrat Standard an enger 50 ml Volumetresch Kolbe, opléisen a verdünnt op Volumen mat Methanol a vermëschen.
Test Virbereedung:
Maacht präzis a transferéiert ongeféier 25 mg Probe an eng 50 ml Volumetresch Kolbe, léist op a verdënnt mat Methanol op Volumen a vermëschen.
Instrumental Parameteren:
Instrument: HPLC equipéiert mat Injektor, Pompel, UV Detektor a Recorder
Kolonn: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ oder gläichwäerteg
Flowrate: 1,0 ml/min
Wellelängt: 265 nm
Injektiounsvolumen: 20 μL
Kolonne Coven Temperatur: 25 ℃
Lafzäit: 45 Minutten
Gradient Programm
Zäit (min) Mobile Phase-A % Mobile Phase-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Prozedur:
Injizéieren d'Léisungen wéi an der folgender Sequenz erwähnt.Notéiert d'Chromatogramme a bestätegt d'Critèren:
Blank Virbereedung 1 Keen interferéierend Peak soll bei der Retentiounszäit vu L-4-Nitrophenylalanin Methyl Ester HCl observéiert ginn.
System suitability Virbereedung 1 Tailing Faktor fir L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl Peak soll net manner wéi 2,0 sinn
Testpräparatioun 1 Benotzt Testchromatogramm fir chromatographesch Rengheet an Gëftstoffer ze bestëmmen.
Relativ Retentiounszäiten:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (Retentiounszäit ongeféier 11,4 Minutten)
4-Nitro-L-Phenylalanin Ongeféier 0,4
Toluen Ongeféier 2.3
Berechnungen:
Am Chromatogramm, deen aus der Testpräparatioun kritt gëtt, no eidel Korrektur, ignoréiert de Peak wéinst Toluen.Rapport d'chromatographesch Rengheet, 4-Nitro-L-Phenylalanine Inhalt an total Gëftstoffer an der Prouf vun Beräich Normaliséierung Method.