L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98.5% (HPLC) ໂຮງງານ

ວິທີການວິເຄາະ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-Ome·HCl) (CAS: 17193-40-7)
ຄໍາອະທິບາຍ: ເອົາຕົວຢ່າງປະມານ 2 g ເຂົ້າໄປໃນຖ້ວຍ petri-dish ທີ່ສະອາດແລະແຫ້ງແລະສັງເກດເຫັນຮູບລັກສະນະຂອງຕົວຢ່າງ.ລາຍງານ: ລາຍງານການສັງເກດການ
ການລະບຸຕົວຕົນ: ປຽບທຽບເວລາເກັບຮັກສາຂອງຈຸດສູງສຸດໃນ chromatogram ຂອງການກະກຽມການທົດສອບກັບເວລາເກັບຮັກສາຂອງຈຸດສູງສຸດທີ່ສໍາຄັນໃນ chromatogram ຂອງຄວາມເຫມາະສົມລະບົບ praparation ທີ່ໄດ້ຮັບໃນຄວາມບໍລິສຸດ chromatographic ໂດຍ HPLC.
ການ​ສູນ​ເສຍ​ໃນ​ການ​ອົບ​ແຫ້ງ​: ແຫ້ງ​ແກ້ວ​ຢຸດ​, ມີ​ນ​້​ໍາ​ຫນັກ​ຕື້ນ​ຢູ່​ທີ່ 105 ± 2 ℃​ສໍາ​ລັບ 30 ນາ​ທີ​.ອະນຸຍາດໃຫ້ມັນເຢັນກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງໃນ desciccator ເປັນ.ການຊັ່ງນໍ້າໜັກຂອງຕຸກນໍ້າໜັກດ້ວຍຕົວຢຸດ ແລະບັນທຶກນໍ້າໜັກ (W1).ໂອນ 1 ຫາ 2g ປະລິມານການຊັ່ງນໍ້າຫນັກຢ່າງຖືກຕ້ອງຂອງສານທົດສອບເຂົ້າໄປໃນຂວດຊັ່ງນໍ້າຫນັກ.ໂດຍການສັ່ນສະເທືອນດ້ານຂ້າງຢ່າງອ່ອນໂຍນ, ແຈກຢາຍຕົວຢ່າງການທົດສອບໃຫ້ເທົ່າໆກັນເທົ່າທີ່ຈະປະຕິບັດໄດ້ເຖິງຄວາມເລິກປະມານ 5 ມມ.ຊັ່ງນ້ຳໜັກໃສ່ກະຕຸກນ້ຳໜັກທີ່ບັນຈຸ ແລະບັນທຶກນ້ຳໜັກ (W2).ວາງຂວດທີ່ບັນຈຸຢູ່ໃນເຕົາອົບແຫ້ງ, ເອົາ stopper ອອກແລະປ່ອຍໃຫ້ມັນຢູ່ໃນຫ້ອງ.ຕາກໃຫ້ແຫ້ງຕົວຢ່າງການທົດສອບຢູ່ທີ່ 105 ± 2 ℃ສໍາລັບ 3 ຊົ່ວໂມງ.ເມື່ອເປີດຫ້ອງດັ່ງກ່າວ, ປິດຂວດທັນທີ, ແລະປ່ອຍໃຫ້ມັນເຂົ້າໄປໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງໃນ desiccator.ການຊັ່ງນໍ້າໜັກຂອງຂວດນໍ້າໜັກດ້ວຍ stopper ແລະ recoed ນໍ້າໜັກ (W3).ຄິດ​ໄລ່​ເປີ​ເຊັນ​ການ​ສູນ​ເສຍ​ໃນ​ການ​ແຫ້ງ​ຂອງ​ຕົວ​ຢ່າງ​ໂດຍ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້​ສູດ​ດັ່ງ​ຕໍ່​ໄປ​ນີ້​:
ການຄິດໄລ່ການສູນເສຍເວລາແຫ້ງ (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
ເນື້ອໃນ Enantiomer ໂດຍ HPLC:
ສານເຄມີ ແລະທາດປະສົມ:
n-Hexane AR ເກຣດ
ເກຣດ Methanol HPLC
Isopropyl Alcohol ເກຣດ HPLC
ເກຣດ Diethylamine AR
ມາດຕະຖານ: L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ມາດຕະຖານ;L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ມາດຕະຖານ enantiomer
ໄລຍະມືຖື: ກະກຽມສ່ວນປະສົມຂອງ n-Hexane, Isopropyl Alcohol, Methanol ແລະ Diethylamine (65:20:15:0.1 v/v/v/v)
ການກະກຽມຫວ່າງເປົ່າ: ໂອນ 2.5ml ຂອງ Methanol ໃນນ້ໍາປະລິມານ 10 ml, ເຈືອຈາງກັບປະລິມານທີ່ມີໄລຍະມືຖືແລະປະສົມ.
ການກະກຽມຄວາມເໝາະສົມຂອງລະບົບ:
ນ້ໍາຫນັກຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະໂອນປະມານ 5 mg ແຕ່ລະ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ມາດຕະຖານແລະ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer ມາດຕະຖານໃນ 10-ml volumetric flask, ລະລາຍໃນປະມານ 2.5ml ຂອງ methanol, dilute ກັບປະລິມານກັບມືຖື. ໄລຍະແລະປະສົມ.
ການ​ກະ​ກຽມ​ການ​ທົດ​ສອບ​:
ນ້ໍາຫນັກຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະໂອນປະມານ 5 ມລກຂອງຕົວຢ່າງໃນ 10-mol volumetric flask, ລະລາຍໃນປະມານ 2.5ml ຂອງ methanol, dilute ກັບປະລິມານທີ່ມີໄລຍະມືຖືແລະປະສົມ.
ຕົວກໍານົດການເຄື່ອງມື:
ເຄື່ອງມື: HPLC ຕິດຕັ້ງຫົວສີດ, ປໍ້າ, ເຄື່ອງກວດຈັບ UV ແລະເຄື່ອງບັນທຶກ
ຖັນ: ChiralPak-IC (4.6mm x 250mm) 5 μ ຫຼື ທຽບເທົ່າ
ອັດຕາການໄຫຼ: 1.0 ມລ/ນາທີ
ຄວາມຍາວຄື້ນ: 260nm
ປະລິມານການສັກຢາ: 10 μL
ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຂອງ​ຖັນ​: 25 ℃​
ເວລາແລ່ນ: 20 ນາທີ
ຂັ້ນຕອນ
ສັກຢາແກ້ໄຂດັ່ງທີ່ໄດ້ກ່າວມາໃນລໍາດັບຕໍ່ໄປນີ້.ບັນທຶກ chromatograms ແລະຢືນຢັນເງື່ອນໄຂ:
ລາຍ​ລະ​ອຽດ​ຂອງ​ການ​ສັກ​ຢາ​ຈໍາ​ນວນ​ຂອງ​ມາດ​ຕະ​ຖານ​ການ​ສັກ​ຢາ​
ການກະກຽມຫວ່າງເປົ່າ 1 ບໍ່ມີການແຊກແຊງສູງສຸດທີ່ຄວນຈະຖືກສັງເກດເຫັນໃນເວລາທີ່ເກັບຮັກສາໄວ້ຂອງ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ຫຼື enantiomer.
ການກະກຽມຄວາມເໝາະສົມຂອງລະບົບ 1 ຄວາມລະອຽດລະຫວ່າງ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ແລະສູງສຸດຂອງ enantiomer ຄວນບໍ່ໜ້ອຍກວ່າ 2.0.
ການກະກຽມການທົດສອບ 1 ໃຊ້ chromatogram ທົດສອບເພື່ອກໍານົດເນື້ອໃນ enantiomer ໃນຕົວຢ່າງ.
ເວລາຮັກສາພີ່ນ້ອງ:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0
Enantiomer ກ່ຽວກັບ 1.11
ເວລາເກັບຮັກສາ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ແມ່ນປະມານ 9.8 ນາທີ.
ການຄິດໄລ່: ໃນ chromatogram ທີ່ໄດ້ຮັບຈາກການກະກຽມການທົດສອບ, ບໍ່ສົນໃຈຈຸດສູງສຸດທັງຫມົດຄາດວ່າຈະມີ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ແລະ Enantiomer.ລາຍງານເນື້ອໃນ enantiomer ໃນຕົວຢ່າງໂດຍວິທີການປົກກະຕິພື້ນທີ່.
ຄວາມບໍລິສຸດ Chromatogrpahic ແລະ impurities ໂດຍ HPLC:
ສານເຄມີ ແລະທາດປະສົມ:
ເກຣດ Diammonium phosphate AR
ເກຣດ AR ອາຊິດຟອສຟໍຣິກ
ເກຣດ Methanol HPLC
ນ້ໍາບໍລິສຸດ
ມາດຕະຖານ
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ມາດຕະຖານ
ມາດຕະຖານ 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate
ມືຖືໄລຍະ A
ລະລາຍ 6.6 g ຂອງ Diammonium phosphate ໃນ 1000ml ຂອງນ້ໍາບໍລິສຸດ.ປັບ pH ຂອງການແກ້ໄຂນີ້ເປັນ 6.0 ດ້ວຍອາຊິດ Phosphoric.ການກັ່ນຕອງແລະ degas.ກ່ອນທີ່ຈະວັດແທກ pH ຂອງການແກ້ໄຂ, calibrate ເຄື່ອງວັດແທກ pH ດ້ວຍການແກ້ໄຂ buffer ມາດຕະຖານ pH 4.01 ແລະ 7.00.
ມືຖືໄລຍະ B
ເກຣດ Methanol HPLC
ການກະກຽມຄວາມເໝາະສົມຂອງລະບົບ
ນ້ໍາຫນັກຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະໂອນປະມານ 25 mg ແຕ່ລະ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ມາດຕະຖານແລະມາດຕະຖານ 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate ໃນ 50-ml volumetric flask, ລະລາຍໃນແລະເຈືອຈາງກັບປະລິມານທີ່ມີ methanol ແລະປະສົມ.
ການກະກຽມການທົດສອບ:
ຊັ່ງນໍ້າຫນັກຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະໂອນຕົວຢ່າງປະມານ 25 ມລກໃນກະປ໋ອງປະລິມານ 50 ມລ, ລະລາຍແລະເຈືອຈາງກັບປະລິມານທີ່ມີເມທານອນແລະປະສົມ.
ຕົວກໍານົດການເຄື່ອງມື:
ເຄື່ອງມື: HPLC ຕິດຕັ້ງຫົວສີດ, ປໍ້າ, ເຄື່ອງກວດຈັບ UV ແລະເຄື່ອງບັນທຶກ
ຖັນ: XTerra RP-18 (4.6mm x 150mm) 5 μ ຫຼື ທຽບເທົ່າ
ອັດຕາການໄຫຼ: 1.0 ມລ/ນາທີ
ຄວາມຍາວຄື້ນ: 265nm
ປະລິມານການສັກຢາ: 20 μL
ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຂອງ​ຖັນ​: 25 ℃​
ເວລາແລ່ນ: 45 ນາທີ
ໂຄງການ Gradient
ເວລາ (ນາທີ) Mobile Phase-A % Mobile Phase-B %
0.01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
ຂັ້ນຕອນ:
ສັກຢາແກ້ໄຂດັ່ງທີ່ໄດ້ກ່າວມາໃນລໍາດັບຕໍ່ໄປນີ້.ບັນທຶກ chromatograms ແລະຢືນຢັນເງື່ອນໄຂ:
ການກະກຽມຫວ່າງເປົ່າ 1 ບໍ່ມີການແຊກແຊງສູງສຸດຄວນຈະຖືກສັງເກດເຫັນໃນເວລາທີ່ເກັບຮັກສາໄວ້ຂອງ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl.
ການກະກຽມຄວາມເໝາະສົມຂອງລະບົບ 1 ປັດໄຈຫາງສຳລັບ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ສູງສຸດຄວນຈະບໍ່ຕໍ່າກວ່າ 2.0.
ການກະກຽມການທົດສອບ 1 ໃຊ້ chromatogram ທົດສອບເພື່ອກໍານົດຄວາມບໍລິສຸດ chromatographic ແລະ impurities.
ເວລາຮັກສາພີ່ນ້ອງ:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (ເວລາເກັບຮັກສາປະມານ 11.4 ນາທີ)
4-Nitro-L-Phenylalanine ປະມານ 0.4
Toluene ກ່ຽວກັບ 2.3
ການຄິດໄລ່:
ໃນ chromatogram ທີ່ໄດ້ຮັບຈາກການກະກຽມການທົດສອບ, ຫຼັງຈາກການແກ້ໄຂເປົ່າ, ບໍ່ສົນໃຈຈຸດສູງສຸດເນື່ອງຈາກ toluene.ລາຍງານຄວາມບໍລິສຸດ chromatographic, ເນື້ອໃນ 4-Nitro-L-Phenylalanine ແລະ impurities ທັງຫມົດໃນຕົວຢ່າງໂດຍວິທີການປົກກະຕິພື້ນທີ່.