L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl tyrimas >98,5 % (HPLC) gamykla

L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) analizės metodas (CAS: 17193-40-7)
Aprašymas: apie 2 g mėginio įdėkite į švarų ir sausą Petri lėkštelę ir stebėkite mėginio išvaizdą.Pranešimas: praneškite apie pastebėjimą
Identifikavimas: Palyginkite pagrindinės smailės sulaikymo trukmę bandomojo preparato chromatogramoje su pagrindinės smailės sulaikymo trukme sistemos tinkamumo chromatogramoje, gauta pagal chromatografinį grynumą HPLC.
Praradimas džiovinant: 30 minučių džiovinkite negilų svėrimo butelį su stikliniu kamščiu 105±2 ℃ temperatūroje.Leiskite jam atvėsti iki kambario temperatūros eksikatoriuje.Tiksliai pasverkite svėrimo indą su kamščiu ir užrašykite svorį (W1).Į svėrimo indą įpilkite maždaug 1–2 g tiksliai pasvertą bandomosios medžiagos kiekį.Švelniai pakratydami į šoną bandinį kuo tolygiau paskirstykite iki maždaug 5 mm gylio.Pasverkite prikrautą svėrimo indelį ir užrašykite svorį (W2).Įdėkite prikrautą butelį į džiovinimo krosnį, nuimdami kamštį ir palikdami jį kameroje.Tiriamasis mėginys džiovinamas 105±2 ℃ temperatūroje 3 valandas.Atidarę kamerą, nedelsdami uždarykite butelį ir leiskite jam sušilti eksikatoriuje iki kambario temperatūros.Tiksliai pasverkite svėrimo indelį su kamščiu ir perrašykite svorį (W3).Apskaičiuokite procentinį nuostolį džiovinant mėginį pagal šią formulę:
Skaičiavimo nuostoliai džiovinant (% m/m) = (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomero kiekis pagal HPLC:
Cheminės medžiagos ir reagentai:
n-heksano AR klasė
Metanolio HPLC klasė
Izopropilo alkoholio HPLC klasė
Dietilamino AR klasė
Standartai: L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl standartas;L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl enantiomero standartas
Judanti fazė: paruoškite homogeninį n-heksano, izopropilo alkoholio, metanolio ir dietilamino mišinį (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Tuščias ruošimas: 2,5 ml metanolio perpilkite į 10 ml matavimo kolbą, praskieskite iki žymės judančia faze ir sumaišykite.
Sistemos tinkamumo paruošimas:
Tiksliai pasverkite ir perkelkite apie 5 mg L-4-nitrofenilalanino metilesterio HCl standarto ir L-4-nitrofenilalanino metilesterio HCl enantiomero standarto į 10 ml matavimo kolbą, ištirpinkite apie 2,5 ml metanolio, praskieskite iki tūrio mobiliuoju prietaisu. fazę ir išmaišykite.
Bandymo paruošimas:
Tiksliai pasverkite ir supilkite apie 5 mg mėginio į 10 mol matavimo kolbą, ištirpinkite apie 2,5 ml metanolio, praskieskite iki žymės judančia faze ir sumaišykite.
Instrumentiniai parametrai:
Prietaisas: HPLC su purkštuvu, siurbliu, UV detektoriumi ir registratoriumi
Stulpelis: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ arba lygiavertis
Srauto greitis: 1,0 ml/min
Bangos ilgis: 260 nm
Įpurškimo tūris: 10 μL
Kolonėlės temperatūra: 25 ℃
Veikimo laikas: 20 minučių
Procedūra
Sušvirkškite tirpalus, kaip nurodyta toliau pateikta seka.Užrašykite chromatogramas ir patvirtinkite kriterijus:
Injekcijų aprašymas Injekcijų skaičiaus kriterijai
1 tuščiasis paruošimas L-4-nitrofenilalanino metilesterio HCl arba enantiomero sulaikymo metu neturėtų būti stebima jokių trukdančių smailių.
Sistemos tinkamumo paruošimas 1 Skiriamoji geba tarp L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl ir enantiomero smailės turi būti ne mažesnė kaip 2,0
Bandymo paruošimas 1 Naudokite bandomąją chromatogramą enantiomerų kiekiui mėginyje nustatyti.
Santykinis saugojimo laikas:
L-4-nitrofenilalanino metilo esteris HCl 1.0
Enantiomeras apie 1.11
L-4-nitrofenilalanino metilesterio HCl sulaikymo laikas yra apie 9,8 minutės.
Skaičiavimas: chromatogramoje, gautoje ruošiant bandymą, neatsižvelgti į visas numatomas L-4-nitrofenilalanino metilesterio HCl ir enantiomero smailes.Praneškite apie enantiomerų kiekį mėginyje pagal ploto normalizavimo metodą.
Chromatografinis grynumas ir priemaišos pagal HPLC:
Cheminės medžiagos ir reagentai:
Diamonio fosfato AR klasė
Fosforo rūgšties AR klasė
Metanolio HPLC klasė
Išgrynintas vanduo
Standartai
L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl standartas
4-nitro-L-fenilalanino monohidrato standartas
Mobilusis A etapas
Ištirpinkite 6,6 g diamonio fosfato 1000 ml išgryninto vandens.Šio tirpalo pH sureguliuokite iki 6,0 su fosforo rūgštimi.Filtras ir degazavimas.Prieš matuodami tirpalo pH, sukalibruokite pH metrą standartiniu buferiniu tirpalu pH 4,01 IR 7,00.
Mobilioji fazė-B
Metanolio HPLC klasė
Sistemos tinkamumo paruošimas
Tiksliai pasverkite ir perpilkite apie 25 mg L-4-nitrofenilalanino metilesterio HCl etaloną ir 4-nitro-L-fenilalanino monohidrato etaloną į 50 ml matavimo kolbą, ištirpinkite ir praskieskite iki žymės metanoliu ir sumaišykite.
Bandymo paruošimas:
Tiksliai pasverkite ir perpilkite apie 25 mg mėginio į 50 ml matavimo kolbą, ištirpinkite ir praskieskite iki žymės metanoliu ir sumaišykite.
Instrumentiniai parametrai:
Prietaisas: HPLC su purkštuvu, siurbliu, UV detektoriumi ir registratoriumi
Stulpelis: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ arba lygiavertis
Srauto greitis: 1,0 ml/min
Bangos ilgis: 265 nm
Įpurškimo tūris: 20 μL
Kolonėlės temperatūra: 25 ℃
Veikimo laikas: 45 minutės
Gradiento programa
Laikas (min.) Mobilioji fazė-A % Mobilioji fazė-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedūra:
Sušvirkškite tirpalus, kaip nurodyta toliau pateikta seka.Užrašykite chromatogramas ir patvirtinkite kriterijus:
1 tuščiasis paruošimas L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl sulaikymo metu neturėtų būti stebima jokių trukdančių smailių.
Sistemos tinkamumo paruošimas 1 L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl smailės atliekos koeficientas turi būti ne mažesnis kaip 2,0
Bandymo paruošimas 1 Naudokite bandomąją chromatogramą chromatografiniam grynumui ir priemaišoms nustatyti.
Santykinis saugojimo laikas:
L-4-nitrofenilalanino metilo esterio HCl 1,0 (laikymo laikas apie 11,4 min.)
4-nitro-L-fenilalaninas Apie 0,4
Toluenas Apie 2,3
Skaičiavimai:
Chromatogramoje, gautoje ruošiant bandymą, po tuščiojo bandymo pataisymo į smailę, atsirandančią dėl tolueno, neatsižvelgiama.Praneškite apie chromatografinį grynumą, 4-nitro-L-fenilalanino kiekį ir visas priemaišas mėginyje pagal ploto normalizavimo metodą.