L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98.5% (HPLC) Kilang

Kaedah Analisis L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Penerangan: Letakkan kira-kira 2 g sampel dalam cawan petri yang bersih dan kering dan perhatikan rupa sampel.Pelaporan: Laporkan pemerhatian
Pengenalpastian: Bandingkan masa pengekalan puncak utama dalam kromatogram penyediaan ujian dengan masa pengekalan puncak utama dalam kromatogram praparasi kesesuaian sistem seperti yang diperoleh dalam ketulenan kromatografi oleh HPLC.
Kerugian akibat Pengeringan: Keringkan botol penimbang cetek bersumbat kaca pada 105±2℃ selama 30 minit.Biarkan ia sejuk pada suhu bilik dalam desikator.Timbang dengan tepat botol penimbang dengan penyumbat dan rekodkan berat (W1).Pindahkan kira-kira 1 hingga 2g kuantiti bahan ujian yang ditimbang dengan tepat ke dalam botol penimbang.Dengan goncangan perlahan-lahan, mengedarkan spesimen ujian sekata yang boleh praktik pada kedalaman kira-kira 5 mm.Timbang botol penimbang yang dimuatkan dan rekodkan beratnya (W2).Letakkan botol yang dimuatkan di dalam ketuhar pengeringan, tanggalkan penyumbat dan biarkan juga di dalam ruang.Keringkan sampel ujian pada suhu 105±2 ℃ selama 3 jam.Selepas membuka ruang, tutup botol dengan segera, dan biarkan ia mencapai suhu bilik dalam desikator.Timbang dengan tepat botol penimbang dengan penyumbat dan hitung semula beratnya (W3).Kira peratusan kehilangan pada pengeringan sampel dengan menggunakan formula berikut:
Kerugian Pengiraan semasa pengeringan (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Kandungan Enantiomer oleh HPLC:
Kimia & Reagen:
gred AR n-Heksana
Gred metanol HPLC
Gred HPLC Isopropil Alkohol
Gred AR diethylamine
Piawaian: L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl standard;L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enansiomer standard
Fasa Mudah Alih: Sediakan campuran homogen n-Heksana, Isopropil Alkohol, Metanol dan Diethylamine (65:20:15:0.1 v/v/v/v)
Penyediaan Kosong: Pindahkan 2.5ml Metanol ke dalam kelalang volumetrik 10 ml, cairkan kepada isipadu dengan fasa bergerak dan campurkan.
Penyediaan kesesuaian sistem:
Timbang dengan tepat dan pindahkan kira-kira 5 mg setiap satu standard L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl dan L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer standard dalam kelalang volumetrik 10 ml, larutkan dalam kira-kira 2.5ml metanol, cairkan kepada isipadu dengan mudah alih fasa dan campuran.
Penyediaan ujian:
Timbang dengan tepat dan pindahkan kira-kira 5 mg sampel dalam kelalang isipadu 10-mol, larutkan dalam kira-kira 2.5ml metanol, cairkan kepada isipadu dengan fasa bergerak dan campurkan.
Parameter instrumental:
Instrumen: HPLC dilengkapi dengan penyuntik, Pam, pengesan UV dan Perakam
Lajur: ChiralPak-IC (4.6mm x 250mm) 5 μ atau setara
Kadar aliran: 1.0 ml/minit
Panjang gelombang: 260nm
Isipadu suntikan: 10 μL
Suhu coven lajur: 25℃
Masa larian: 20 minit
Prosedur
Suntikan penyelesaian seperti yang dinyatakan dalam urutan berikut.Rekod kromatogram dan sahkan kriteria:
Perihalan Suntikan Bilangan Kriteria Suntikan
Penyediaan Kosong 1 Tiada puncak mengganggu harus diperhatikan pada masa pengekalan L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl atau enansiomer.
Penyediaan kesesuaian sistem 1 Resolusi antara L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl dan puncak enantiomer hendaklah tidak kurang daripada 2.0
Penyediaan ujian 1 Gunakan kromatogram ujian untuk menentukan kandungan enansiomer dalam sampel.
Masa Pengekalan Relatif:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0
Enantiomer Mengenai 1.11
Masa pengekalan L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ialah kira-kira 9.8 minit.
Pengiraan: Dalam kromatogram yang diperoleh daripada penyediaan ujian, abaikan semua puncak mengharapkan L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl dan Enantiomer.Laporkan kandungan enansiomer dalam sampel mengikut kaedah normalisasi kawasan.
Ketulenan dan Kekotoran Kromatogrpah oleh HPLC:
Kimia & Reagen:
Gred AR diamonium fosfat
Asid fosforik gred AR
Gred metanol HPLC
Air Bersuci
Piawaian
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl standard
4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate standard
Fasa Mudah Alih-A
Larutkan 6.6 g Diammonium fosfat dalam 1000ml air tulen.Laraskan pH larutan ini kepada 6.0 dengan asid Fosforik.Penapis dan degas.Sebelum mengukur pH larutan, kalibrasi meter pH dengan larutan penimbal piawai pH 4.01 DAN 7.00.
Mudah Alih Fasa-B
Gred metanol HPLC
Penyediaan Kesesuaian Sistem
Timbang dengan tepat dan pindahkan kira-kira 25 mg setiap satu standard L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl dan 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate standard dalam kelalang volumetrik 50 ml, larutkan dan cairkan kepada isipadu dengan metanol dan campurkan.
Persediaan Ujian:
Timbang dengan tepat dan pindahkan kira-kira 25 mg sampel dalam kelalang volumetrik 50 ml, larutkan dan cairkan kepada isipadu dengan metanol dan campurkan.
Parameter instrumental:
Instrumen: HPLC dilengkapi dengan penyuntik, Pam, pengesan UV dan Perakam
Lajur: XTerra RP-18 (4.6mm x 150mm) 5 μ atau setara
Kadar aliran: 1.0 ml/minit
Panjang gelombang: 265nm
Isipadu suntikan: 20 μL
Suhu coven lajur: 25℃
Masa larian: 45 minit
Program Kecerunan
Masa (min) Mudah Alih Fasa-A % Mudah Alih Fasa-B %
0.01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Prosedur:
Suntikan penyelesaian seperti yang dinyatakan dalam urutan berikut.Rekod kromatogram dan sahkan kriteria:
Penyediaan Kosong 1 Tiada puncak mengganggu perlu diperhatikan pada masa pengekalan L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl.
Penyediaan kesesuaian sistem 1 Faktor tailing untuk puncak L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl hendaklah tidak kurang daripada 2.0
Penyediaan ujian 1 Gunakan kromatogram ujian untuk menentukan ketulenan dan kekotoran kromatografi.
Masa Pengekalan Relatif:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (masa pengekalan kira-kira 11.4 minit)
4-Nitro-L-Phenylalanine Kira-kira 0.4
Toluene Kira-kira 2.3
Pengiraan:
Dalam kromatogram yang diperoleh daripada penyediaan ujian, selepas pembetulan kosong, abaikan puncak akibat toluena.Laporkan ketulenan kromatografi, kandungan 4-Nitro-L-Phenylalanine dan jumlah kekotoran dalam sampel mengikut kaedah normalisasi kawasan.