L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl စစ်ဆေးမှု >98.5% (HPLC) စက်ရုံ

L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7) ကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနည်းလမ်း
ဖော်ပြချက်- နမူနာ ၂ ဂရမ်ခန့်ကို သန့်ရှင်းပြီး ခြောက်သွေ့သော ပန်းကန်ထဲတွင် ထားကာ နမူနာ၏ အသွင်အပြင်ကို စောင့်ကြည့်ပါ။အစီရင်ခံခြင်း- စောင့်ကြည့်မှုကို အစီရင်ခံပါ။
ခွဲခြားသတ်မှတ်- HPLC မှ ခရိုမာတိုဂရမ် သန့်စင်မှုတွင်ရရှိသည့် စနစ်သင့်လျော်မှု ပရောဖက်ဂရမ်ရှိ အဓိကအထွတ်အထိပ်၏ သိုလှောင်ချိန်နှင့် ခရိုမာတိုဂရမ်ရှိ အဓိကအထွတ်အထိပ်၏ ထိန်းသိမ်းချိန်ကို နှိုင်းယှဉ်ပါ။
အခြောက်ခံခြင်းတွင် ဆုံးရှုံးမှု- 105±2℃ တွင် အလေးချိန် 105±2 ℃ ရှိသော ဖန်ခွက်ကို ရပ်တန့်ကာ အခြောက်ခံပါ။အအေးခံစက်ဖြင့် အခန်းအပူချိန်တွင် အအေးခံထားပါ။အလေးချိန်ပုလင်းကို ဆို့ပါဖြင့် အတိအကျ ချိန်ပြီး အလေးချိန် (W1) ကို မှတ်တမ်းတင်ပါ။1 မှ 2 ဂရမ်ခန့်ကို တိကျစွာ ချိန်တွယ်ထားသော စမ်းသပ်ပစ္စည်းပမာဏကို အလေးချိန်ပုလင်းထဲသို့ လွှဲပြောင်းပါ။ဖြည်းညှင်းစွာ၊ ဘေးတိုက်လှုပ်ခါခြင်းဖြင့်၊ လက်တွေ့လုပ်ဆောင်နိုင်သော အနက် ၅ မီလီမီတာအထိ စမ်းသပ်နမူနာကို အညီအမျှ ဖြန့်ဝေပါ။တင်ထားသော အလေးချိန်ပုလင်းကို ချိန်ဆပြီး အလေးချိန် (W2) ကို မှတ်တမ်းတင်ပါ။တင်ထားသော ပုလင်းကို အခြောက်ခံသော မီးဖိုတွင် ထားကာ အဆို့ပါကို ဖယ်ရှားပြီး အခန်းထဲတွင်လည်း ထားလိုက်ပါ။စမ်းသပ်နမူနာကို 105 ± 2 ℃ 3 နာရီကြာ အခြောက်ခံပါ။အခန်းကိုဖွင့်ပြီးသည်နှင့် ပုလင်းကို ချက်ခြင်းပိတ်ပြီး ချွေးထုတ်ခန်းထဲတွင် အခန်းအပူချိန်သို့ ရောက်အောင်ခွင့်ပြုပါ။အလေးချိန်ပုလင်းကို ဆို့ပါဖြင့် အတိအကျ ချိန်ဆပြီး အလေးချိန် (W3) ကို ပြန်ယူပါ။အောက်ပါဖော်မြူလာကို အသုံးပြု၍ နမူနာ၏ အခြောက်ခံခြင်းတွင် ဆုံးရှုံးမှု ရာခိုင်နှုန်းကို တွက်ချက်ပါ။
အခြောက်ခံခြင်းအတွက် တွက်ချက်မှုဆုံးရှုံးမှု (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
HPLC မှ Enantiomer အကြောင်းအရာ-
ဓာတုနှင့် ဓာတ်ပြုပစ္စည်းများ-
n-Hexane AR အဆင့်
မီသနော HPLC အဆင့်
Isopropyl အရက် HPLC အဆင့်
Diethylamine AR အဆင့်
စံချိန်စံညွှန်းများ- L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl စံနှုန်း၊L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer စံနှုန်း
မိုဘိုင်းအဆင့်- n-Hexane၊ Isopropyl အရက်၊ Methanol နှင့် Diethylamine တို့၏ တစ်သားတည်းဖြစ်သော အရောအနှောကို ပြင်ဆင်ပါ။
အလွတ်ပြင်ဆင်ခြင်း- 10-ml volumetric ဘူးထဲတွင် မီသနော 2.5ml ကို လွှဲပြောင်းပါ၊ မိုဘိုင်းအဆင့်ဖြင့် ထုထည်သို့ ရောမွှေပါ။
စနစ်သင့်လျော်မှုပြင်ဆင်မှု-
တိကျစွာချိန်ဆပြီး L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl စံနှုန်းနှင့် L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer စံနှုန်း 10-ml volumetric ဘူးတစ်ခုတွင် 5 mg ခန့်ကို လွှဲပြောင်းပါ၊ မီသနော၏ 2.5ml ခန့်တွင် ပျော်ဝင်ကာ မိုဘိုင်းဖြင့် အသံအတိုးအလျှော့လုပ်ပါ။ အဆင့်နှင့်ရောနှော။
စမ်းသပ်ပြင်ဆင်မှု-
တိကျစွာချိန်ဆပြီး 10-mol volumetric ဘူးတစ်ခုတွင် နမူနာ၏ 5 mg ခန့်ကို လွှဲပြောင်းပါ၊ မီသနော၏ 2.5ml ခန့်တွင် ပျော်ဝင်ကာ၊ မိုဘိုင်းအဆင့်ဖြင့် ထုထည်သို့ ရောမွှေပါ။
တူရိယာဆိုင်ရာ ကန့်သတ်ချက်များ-
Instrument- HPLC တွင် injector၊ Pump၊ UV detector နှင့် Recorder ပါရှိသည်။
ကော်လံ- ChiralPak-IC (4.6mm x 250mm) 5 μ သို့မဟုတ် ညီမျှ
စီးဆင်းမှုနှုန်း- 1.0 ml/မိနစ်
လှိုင်းအလျား- 260nm
ထိုးဆေးပမာဏ- 10 μL
ကော်လံ အပူချိန် : 25 ℃
လည်ပတ်ချိန်- 20 မိနစ်
လုပ်ထုံးလုပ်နည်း
အောက်ပါအစီအစဥ်တွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ဖြေရှင်းချက်များကို ထိုးသွင်းပါ။ခရိုမာတိုဂရမ်များကို မှတ်တမ်းတင်ပြီး သတ်မှတ်ချက်များကို အတည်ပြုပါ-
Injections Number of Injections Criteria ၏ ရှင်းလင်းချက်
အလွတ်ပြင်ဆင်ခြင်း 1 L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl သို့မဟုတ် enantiomer ၏ ထိန်းသိမ်းထားချိန်၌ အနှောင့်အယှက်အထွတ်အထိပ်ကို မတွေ့ရပါ။
စနစ်သင့်လျော်မှုပြင်ဆင်မှု 1 L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl နှင့် enantiomer peak အကြား ကြည်လင်ပြတ်သားမှု 2.0 ထက် မနည်းသင့်ပါ။
စမ်းသပ်ပြင်ဆင်မှု 1 နမူနာရှိ enantiomer အကြောင်းအရာကို ဆုံးဖြတ်ရန် စမ်းသပ်မှု chromatogram ကိုအသုံးပြုပါ။
ဆွေမျိုးထိန်းသိမ်းချိန်များ-
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0
Enantiomer အကြောင်း ၁.၁၁
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ၏ ထိန်းသိမ်းထားချိန်သည် ၉.၈ မိနစ်ခန့်ဖြစ်သည်။
တွက်ချက်မှု- စမ်းသပ်ပြင်ဆင်မှုမှရရှိသော chromatogram တွင် L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl နှင့် Enantiomer တို့မျှော်လင့်ထားသည့် အထွတ်အထိပ်အားလုံးကို လျစ်လျူရှုပါ။ဧရိယာပုံမှန်ပြုလုပ်ခြင်းနည်းလမ်းဖြင့် နမူနာရှိ enantiomer အကြောင်းအရာကို သတင်းပို့ပါ။
HPLC မှ Chromatogrpahic သန့်ရှင်းမှုနှင့် အညစ်အကြေးများ-
ဓာတုနှင့် ဓာတ်ပြုပစ္စည်းများ-
Diammonium phosphate AR အဆင့်
ဖော့စဖရစ်အက်ဆစ် AR အဆင့်
မီသနော HPLC အဆင့်
သန့်စင်သောရေ
စံနှုန်းများ
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl စံနှုန်း
4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate စံနှုန်း
မိုဘိုင်းအဆင့်-A
သန့်စင်သောရေ 1000ml တွင် Diammonium phosphate 6.6 g ကို အရည်ဖျော်ပါ။ဤဖြေရှင်းချက်၏ pH ကို Phosphoric acid ဖြင့် 6.0 သို့ ချိန်ညှိပါ။စစ်ထုတ်ခြင်းနှင့် degas ။ဖြေရှင်းချက်၏ pH ကို မတိုင်းတာမီ၊ pH မီတာကို စံကြားခံဖြေရှင်းချက် pH 4.01 နှင့် 7.00 ဖြင့် ချိန်ညှိပါ။
မိုဘိုင်းအဆင့်-B
မီသနော HPLC အဆင့်
စနစ်သင့်လျော်မှုပြင်ဆင်ခြင်း။
တိကျစွာချိန်ဆပြီး L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl စံနှုန်းနှင့် 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate စံနှုန်းတစ်ခုစီ၏ 25 mg ခန့်ကို 50-ml volumetric ဘူးထဲတွင် အရည်ဖျော်ပြီး မီသနောနှင့် ရောနှောကာ ထုထည်ဆီသို့ ရောမွှေပါ။
စမ်းသပ်ပြင်ဆင်မှု-
တိကျစွာ ချိန်ဆပြီး 50-ml volumetric ဘူးထဲတွင် ၂၅မီလီဂရမ်နမူနာကို လွှဲပြောင်းပါ၊ ပျော်ဝင်ပြီး မီသနောနှင့် ရောပြီး ထုထည်ဆီသို့ ရောမွှေပါ။
တူရိယာဆိုင်ရာ ကန့်သတ်ချက်များ-
Instrument- HPLC တွင် injector၊ Pump၊ UV detector နှင့် Recorder ပါရှိသည်။
ကော်လံ- XTerra RP-18 (4.6mm x 150mm) 5 μ သို့မဟုတ် ညီမျှ
စီးဆင်းမှုနှုန်း- 1.0 ml/မိနစ်
လှိုင်းအလျား 265nm
ထိုးဆေးပမာဏ- 20 μL
ကော်လံ အပူချိန် : 25 ℃
လည်ပတ်ချိန်: 45 မိနစ်
Gradient အစီအစဉ်
အချိန် (မိနစ်) မိုဘိုင်းအဆင့်-A % မိုဘိုင်းအဆင့်-B %
၀.၀၁ ၉၀ ၁၀
၁၅း၆၀း၄၀
၃၅ ၄၀ ၆၀
၄၀း၃၅း၆၅
၄၁ ၉၀ ၁၀
၄၅း၉၀ ၁၀
လုပ်ထုံးလုပ်နည်း-
အောက်ပါအစီအစဥ်တွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ဖြေရှင်းချက်များကို ထိုးသွင်းပါ။ခရိုမာတိုဂရမ်များကို မှတ်တမ်းတင်ပြီး သတ်မှတ်ချက်များကို အတည်ပြုပါ-
အလွတ်ပြင်ဆင်ခြင်း 1 L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl ၏ ထိန်းသိမ်းထားချိန်၌ ဝင်ရောက်စွက်ဖက်သည့် အထွတ်အထိပ်ကို မတွေ့သင့်ပါ။
စနစ်အတွက် သင့်လျော်မှု ပြင်ဆင်မှု 1 L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl အထွတ်အထိပ်အတွက် အကျိတ်အတက်အဆင်းအချက်သည် 2.0 ထက် မနည်းသင့်ပါ။
စမ်းသပ်ပြင်ဆင်မှု 1 chromatographic သန့်စင်မှုနှင့် အညစ်အကြေးများကို ဆုံးဖြတ်ရန် စမ်းသပ်ခရိုတိုဂရမ်ကို အသုံးပြုပါ။
ဆွေမျိုးထိန်းသိမ်းချိန်များ-
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (ထိန်းသိမ်းချိန် ၁၁.၄ မိနစ်ခန့်)
4-Nitro-L-Phenylalanine 0.4 ခန့်
Toluene 2.3 အကြောင်း
တွက်ချက်မှုများ-
စမ်းသပ်ပြင်ဆင်မှုမှရရှိသော ခရိုမာတိုဂရမ်တွင်၊ အလွတ်ပြင်ဆင်မှုပြီးနောက်၊ တိုလူနေကြောင့် အထွတ်အထိပ်ကို လျစ်လျူရှုပါ။ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ် သန့်စင်မှု၊ 4-Nitro-L-Phenylalanine ပါဝင်မှုနှင့် နမူနာရှိ စုစုပေါင်း အညစ်အကြေးများကို ဧရိယာပုံမှန်ဖြစ်အောင်ပြုလုပ်သည့်နည်းလမ်းဖြင့် သတင်းပို့ပါ။