L-4-nitrofenylalanine methylester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl-analyse >98,5% (HPLC) Fabriek

Analysemethode van L-4-nitrofenylalanine methylester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Beschrijving: Plaats ongeveer 2 g monster in een schone en droge petrischaal en observeer het uiterlijk van het monster.Rapporteren: Rapporteer de waarneming
Identificatie: Vergelijk de retentietijd van de hoofdpiek in het chromatogram van het testpreparaat met de retentietijd van de hoofdpiek in het chromatogram van de systeemgeschiktheidstest zoals verkregen in chromatografische zuiverheid door HPLC.
Verlies bij drogen: Droog een ondiepe weegfles met glazen stop gedurende 30 minuten bij 105 ± 2 ℃.Laat het afkoelen tot kamertemperatuur in een exsiccator.Weeg de weegfles met stop nauwkeurig en noteer het gewicht (W1).Breng ongeveer 1 tot 2 g nauwkeurig afgewogen hoeveelheid teststof over in het weegflesje.Verdeel het testmonster door zacht zijwaarts schudden zo gelijkmatig mogelijk tot een diepte van ongeveer 5 mm.Weeg de geladen weegfles en noteer het gewicht (W2).Plaats de geladen fles in de droogoven, verwijder de stop en laat deze ook in de kamer.Droog het testmonster gedurende 3 uur bij 105 ± 2 ℃.Bij het openen van de kamer, de fles onmiddellijk sluiten en in een exsiccator op kamertemperatuur laten komen.Weeg de weegfles met stop nauwkeurig af en meet het gewicht (W3).Bereken het procentuele verlies bij drogen van het monster met behulp van de volgende formule:
Berekening Verlies bij drogen (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomeergehalte door HPLC:
Chemische stof en reagentia:
n-hexaan AR-klasse
Methanol HPLC-kwaliteit
Isopropylalcohol HPLC-kwaliteit
Diethylamine AR-klasse
Standaarden: L-4-nitrofenylalanine methylester HCl-standaard;L-4-Nitrofenylalanine Methyl Ester HCl enantiomeer standaard
Mobiele fase: bereid een homogeen mengsel van n-hexaan, isopropylalcohol, methanol en diethylamine (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Blanco voorbereiding: Breng 2,5 ml methanol over in een maatkolf van 10 ml, verdun tot volume met mobiele fase en meng.
Voorbereiding systeemgeschiktheid:
Weeg nauwkeurig af en breng elk ongeveer 5 mg L-4-nitrofenylalanine methylester HCl-standaard en L-4-nitrofenylalanine methylester HCl enantiomeerstandaard over in een maatkolf van 10 ml, los op in ongeveer 2,5 ml methanol, verdun tot volume met mobiele fase en meng.
Proefvoorbereiding:
Weeg nauwkeurig en breng ongeveer 5 mg monster over in een maatkolf van 10 mol, los op in ongeveer 2,5 ml methanol, verdun tot volume met mobiele fase en meng.
Instrumentale parameters:
Instrument: HPLC uitgerust met injector, pomp, UV-detector en recorder
Kolom: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ of equivalent
Stroomsnelheid: 1,0 ml/minuut
Golflengte: 260nm
Injectievolume: 10 μL
Kolom coven temp.: 25℃
Looptijd: 20 minuten
Procedure
Injecteer de oplossingen zoals vermeld in de volgende volgorde.Neem de chromatogrammen op en bevestig de criteria:
Beschrijving van injecties Aantal injecties Criteria
Blanco Voorbereiding 1 Er mag geen storende piek worden waargenomen bij de retentietijd van L-4-nitrofenylalanine methylester HCl of enantiomeer.
Systeemgeschiktheid voorbereiding 1 Resolutie tussen L-4-nitrofenylalanine methylester HCl en enantiomeerpiek mag niet minder zijn dan 2,0
Testvoorbereiding 1 Gebruik een testchromatogram om het enantiomeergehalte in het monster te bepalen.
Relatieve retentietijden:
L-4-nitrofenylalanine methylester HCl 1.0
Enantiomeer Ongeveer 1.11
De retentietijd van L-4-nitrofenylalanine methylester HCl is ongeveer 9,8 minuten.
Berekening: Negeer in het chromatogram verkregen uit de testvoorbereiding alle pieken verwacht L-4-nitrofenylalanine methylester HCl en enantiomeer.Rapporteer het enantiomeergehalte in het monster per gebiedsnormalisatiemethode.
Chromatografische zuiverheid en onzuiverheden door HPLC:
Chemische stof en reagentia:
Diammoniumfosfaat AR-klasse
Fosforzuur AR-klasse
Methanol HPLC-kwaliteit
Gezuiverd water
Normen
L-4-nitrofenylalanine methylester HCl-standaard
4-Nitro-L-Phenylalanine monohydraat standaard
Mobiele Fase-A
Los 6,6 g diammoniumfosfaat op in 1000 ml gezuiverd water.Breng de pH van deze oplossing met fosforzuur op 6,0.Filteren en ontgassen.Alvorens de pH van de oplossing te meten, kalibreer de pH-meter met standaard bufferoplossing pH 4,01 EN 7,00.
Mobiele Fase-B
Methanol HPLC-kwaliteit
Voorbereiding van systeemgeschiktheid
Weeg nauwkeurig af en breng elk ongeveer 25 mg L-4-nitrofenylalanine methylester HCl standaard en 4-nitro-L-fenylalanine monohydraat standaard over in een maatkolf van 50 ml, los op in en verdun tot volume met methanol en meng.
Testvoorbereiding:
Weeg nauwkeurig en breng ongeveer 25 mg monster over in een maatkolf van 50 ml, los op in en verdun tot volume met methanol en meng.
Instrumentale parameters:
Instrument: HPLC uitgerust met injector, pomp, UV-detector en recorder
Kolom: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ of equivalent
Stroomsnelheid: 1,0 ml/minuut
Golflengte: 265nm
Injectievolume: 20 μL
Kolom coven temp.: 25℃
Looptijd: 45 minuten
Verloop programma
Tijd (min) Mobiele Fase-A % Mobiele Fase-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedure:
Injecteer de oplossingen zoals vermeld in de volgende volgorde.Neem de chromatogrammen op en bevestig de criteria:
Blanco Voorbereiding 1 Er mag geen storende piek worden waargenomen bij de retentietijd van L-4-nitrofenylalanine methylester HCl.
Systeemgeschiktheid voorbereiding 1 Tailing-factor voor L-4-nitrofenylalanine Methyl Ester HCl-piek mag niet lager zijn dan 2,0
Testvoorbereiding 1 Gebruik een testchromatogram om de chromatografische zuiverheid en onzuiverheden te bepalen.
Relatieve retentietijden:
L-4-Nitrofenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (retentietijd ongeveer 11,4 minuten)
4-nitro-L-fenylalanine Ongeveer 0,4
Tolueen Ongeveer 2.3
berekeningen:
Negeer in het chromatogram verkregen uit testvoorbereiding, na blancocorrectie, de piek als gevolg van tolueen.Rapporteer de chromatografische zuiverheid, het 4-nitro-L-fenylalaninegehalte en de totale onzuiverheden in het monster per gebiedsnormalisatiemethode.