L-4-Nitrofenylalanin Metylester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl-analyse >98,5 % (HPLC) Fabrikk

Metode for analyse av L-4-nitrofenylalanin-metylester-HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Beskrivelse: Plasser ca. 2 g prøve i en ren og tørr petriskål og observer prøvens utseende.Rapportering: Rapporter observasjonen
Identifikasjon: Sammenlign retensjonstiden for hovedtoppen i kromatogrammet til testpreparatet med retensjonstiden for hovedtoppen i kromatogrammet for systemegnethetspreparatet som oppnådd i kromatografisk renhet ved HPLC.
Tap ved tørking: Tørk en grunt veieflaske med glasspropp ved 105±2℃ i 30 minutter.La den avkjøles til romtemperatur i en ekssikkator.Vei veieflasken med propp nøyaktig og noter vekten (W1).Overfør ca. 1 til 2 g nøyaktig veid mengde teststoff til veieflasken.Ved forsiktig, sideveis risting, fordel testprøven så jevnt som praktisk mulig til en dybde på ca. 5 mm.Vei den lastede veieflasken og noter vekten (W2).Plasser den fylte flasken i tørkeovnen, fjern proppen og la den også være i kammeret.Tørk testprøven ved 105±2℃ i 3 timer.Når du åpner kammeret, lukk flasken umiddelbart, og la den få romtemperatur i en ekssikkator.Vei nøyaktig veieflasken med propp og recoed vekten (W3).Beregn det prosentvise tapet ved tørking av prøven ved å bruke følgende formel:
Beregningstap ved tørking (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomerinnhold ved HPLC:
Kjemikalier og reagenser:
n-heksan AR karakter
Metanol HPLC-kvalitet
Isopropylalkohol HPLC-kvalitet
Dietylamin AR-kvalitet
Standarder: L-4-Nitrofenylalanin Metylester HCl standard;L-4-Nitrofenylalanin Methyl Ester HCl enantiomer standard
Mobil fase: Forbered en homogen blanding av n-heksan, isopropylalkohol, metanol og dietylamin (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Blankforberedelse: Overfør 2,5 ml metanol i en 10 ml målekolbe, fortynn til volum med mobil fase og bland.
Klargjøring av systemegnethet:
Vei nøyaktig og overfør ca. 5 mg hver av L-4-nitrofenylalanin-metylester-HCl-standarden og L-4-nitrofenylalanin-metylester-HCl-enantiomerstandarden i en 10 ml målekolbe, løs opp i ca. 2,5 ml metanol, fortynn til volum med mobilen fase og bland.
Testforberedelse:
Vei nøyaktig og overfør ca. 5 mg prøve i en 10-mol målekolbe, løs opp i ca. 2,5 ml metanol, fortynn til volum med mobil fase og bland.
Instrumentelle parametere:
Instrument: HPLC utstyrt med injektor, pumpe, UV-detektor og opptaker
Kolonne: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ eller tilsvarende
Strømningshastighet: 1,0 ml/minutt
Bølgelengde: 260nm
Injeksjonsvolum: 10 μL
Kolonnetemperatur: 25 ℃
Kjøretid: 20 minutter
Fremgangsmåte
Injiser oppløsningene som nevnt i følgende sekvens.Ta opp kromatogrammene og bekreft kriteriene:
Beskrivelse av injeksjoner Antall injeksjonskriterier
Blankforberedelse 1 Ingen forstyrrende topp bør observeres ved retensjonstiden for L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl eller enantiomer.
Klargjøring av systemegnethet 1 Oppløsning mellom L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl og enantiomertopp bør ikke være mindre enn 2,0
Testforberedelse 1 Bruk testkromatogram for å bestemme enantiomerinnholdet i prøven.
Relative oppbevaringstider:
L-4-nitrofenylalanin-metylester-HCl 1,0
Enantiomer ca. 1.11
Retensjonstid for L-4-nitrofenylalanin-metylester-HCl er ca. 9,8 minutter.
Beregning: I kromatogrammet oppnådd fra testforberedelsen, se bort fra alle topper forvente L-4-nitrofenylalanin metylester HCl og enantiomer.Rapporter enantiomerinnholdet i prøven etter områdenormaliseringsmetode.
Kromatografisk renhet og urenheter ved HPLC:
Kjemikalier og reagenser:
Diammoniumfosfat AR-kvalitet
Fosforsyre AR-grad
Metanol HPLC-kvalitet
Renset vann
Standarder
L-4-nitrofenylalanin metylester HCl standard
4-Nitro-L-Fenylalanin monohydrat standard
Mobil fase-A
Løs opp 6,6 g diammoniumfosfat i 1000 ml renset vann.Juster pH til denne løsningen til 6,0 med fosforsyre.Filter og avgass.Før du måler pH i løsningen, kalibrer pH-meteret med standard bufferløsning pH 4,01 OG 7,00.
Mobil fase-B
Metanol HPLC-kvalitet
Forberedelse av systemegnethet
Vei nøyaktig og overfør ca. 25 mg hver av L-4-nitrofenylalanin-metylester-HCl-standarden og 4-nitro-L-fenylalanin-monohydratstandarden i en 50 ml målekolbe, løs opp i og fortynn til volum med metanol og bland.
Testforberedelse:
Vei nøyaktig og overfør ca. 25 mg prøve i en 50 ml målekolbe, løs opp i og fortynn til volum med metanol og bland.
Instrumentelle parametere:
Instrument: HPLC utstyrt med injektor, pumpe, UV-detektor og opptaker
Kolonne: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ eller tilsvarende
Strømningshastighet: 1,0 ml/minutt
Bølgelengde: 265nm
Injeksjonsvolum: 20 μL
Kolonnetemperatur: 25 ℃
Kjøretid: 45 minutter
Gradientprogram
Tid (min) Mobil fase-A % Mobil fase-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Fremgangsmåte:
Injiser oppløsningene som nevnt i følgende sekvens.Ta opp kromatogrammene og bekreft kriteriene:
Blankforberedelse 1 Ingen forstyrrende topp bør observeres ved retensjonstiden for L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl.
Forberedelse av systemegnethet 1 Avstandsfaktor for L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl-topp bør ikke være mindre enn 2,0
Testforberedelse 1 Bruk testkromatogram for å bestemme kromatografisk renhet og urenheter.
Relative oppbevaringstider:
L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl 1,0 (retensjonstid ca. 11,4 minutter)
4-Nitro-L-Fenylalanin Omtrent 0,4
Toluen Omtrent 2,3
Beregninger:
I kromatogrammet som er oppnådd fra testforberedelsen, se etter blindkorreksjon, se bort fra toppen på grunn av toluen.Rapporter kromatografisk renhet, 4-nitro-L-fenylalanin-innhold og totale urenheter i prøven etter områdenormaliseringsmetode.