Ester metylowy L-4-nitrofenyloalaniny HCl CAS 17193-40-7 H-Phe (4-NO2) -OMe·HCl Test > 98,5% (HPLC) Fabryka

Metoda analizy chlorowodorku estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Opis: Umieść około 2 g próbki na czystej i suchej szalce Petriego i obserwuj wygląd próbki.Raportowanie: Zgłoś obserwację
Identyfikacja: Porównać czas retencji głównego piku na chromatogramie badanego preparatu z czasem retencji głównego piku na chromatogramie preparatu przydatności układu otrzymanego w czystości chromatograficznej metodą HPLC.
Straty podczas suszenia: Suszyć płytką butelkę ważącą ze szklanym korkiem w temperaturze 105 ± 2 ℃ przez 30 minut.Pozostawić do ostygnięcia do temperatury pokojowej w eksykatorze.Zważyć dokładnie naczynko wagowe z korkiem i zanotować wagę (W1).Przenieść około 1 do 2 g dokładnie odważonej ilości substancji badanej do naczynia wagowego.Delikatnie wstrząsając na boki, rozprowadzić próbkę badaną możliwie równomiernie na głębokość około 5 mm.Zważyć załadowaną szalkę wagową i zapisać wagę (W2).Umieścić załadowaną butelkę w suszarce, usuwając korek i pozostawiając ją również w komorze.Suszyć próbkę testową w temperaturze 105±2℃ przez 3 godziny.Po otwarciu komory natychmiast zamknij butelkę i pozwól jej osiągnąć temperaturę pokojową w eksykatorze.Zważyć dokładnie naczynko wagowe z korkiem i ponownie odważyć (W3).Oblicz ubytek procentowy podczas suszenia próbki, korzystając z następującego wzoru:
Obliczenie Strata przy suszeniu (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Zawartość enancjomerów metodą HPLC:
Chemikalia i odczynniki:
klasa n-heksan AR
Stopień czystości metanolu HPLC
Klasa HPLC alkoholu izopropylowego
Stopień dietyloaminy AR
Wzorce: wzorzec HCl estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny;Wzorzec enancjomeru estru metylowego HCl L-4-nitrofenyloalaniny
Faza ruchoma: Przygotuj jednorodną mieszaninę n-heksanu, alkoholu izopropylowego, metanolu i dietyloaminy (65:20:15:0,1 obj./obj./obj./obj.)
Przygotowanie próby ślepej: Przenieść 2,5 ml metanolu do kolby miarowej o pojemności 10 ml, dopełnić do kreski fazą ruchomą i wymieszać.
Przygotowanie systemu pod kątem przydatności:
Zważyć dokładnie i przenieść po około 5 mg wzorca chlorowodorku estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny i enancjomeru chlorowodorku estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny do kolby miarowej o pojemności 10 ml, rozpuścić w około 2,5 ml metanolu, rozcieńczyć do kreski za pomocą ruchomości fazować i mieszać.
Przygotowanie testu:
Odważyć dokładnie i przenieść ok. 5 mg próbki do 10-molowej kolby miarowej, rozpuścić w ok. 2,5 ml metanolu, rozcieńczyć do kreski fazą ruchomą i wymieszać.
Parametry instrumentalne:
Instrument: HPLC wyposażony w inżektor, pompę, detektor UV i rejestrator
Kolumna: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ lub odpowiednik
Szybkość przepływu: 1,0 ml/minutę
Długość fali: 260nm
Objętość wstrzyknięcia: 10 μl
Temp. sabatu kolumny: 25℃
Czas trwania: 20 minut
Procedura
Wstrzyknąć roztwory zgodnie z następującą kolejnością.Zapisz chromatogramy i potwierdź kryteria:
Opis wtrysków Liczba wtrysków Kryteria
Próba ślepa 1 W czasie retencji chlorowodorku lub enancjomeru estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny nie należy zaobserwować piku zakłócającego.
Przygotowanie odpowiedniego systemu 1 Rozdzielczość między HCl estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny a pikiem enancjomeru nie powinna być mniejsza niż 2,0
Przygotowanie testu 1 Za pomocą chromatogramu testowego określ zawartość enancjomerów w próbce.
Względne czasy retencji:
Ester metylowy L-4-nitrofenyloalaniny HCl 1,0
Enancjomer Około 1,11
Czas retencji estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny HCl wynosi około 9,8 minuty.
Obliczenia: Na chromatogramie otrzymanym z preparatu testowego należy pominąć wszystkie piki poza estrem metylowym L-4-nitrofenyloalaniny HCl i enancjomerem.Podać zawartość enancjomerów w próbce metodą normalizacji powierzchni.
Czystość chromatograficzna i zanieczyszczenia metodą HPLC:
Chemikalia i odczynniki:
Fosforan dwuamonowy klasy AR
Klasa kwasu fosforowego AR
Stopień czystości metanolu HPLC
Woda oczyszczona
Normy
Wzorzec HCl estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny
Standard monohydratu 4-nitro-L-fenyloalaniny
Faza mobilna-A
Rozpuścić 6,6 g fosforanu dwuamonowego w 1000 ml oczyszczonej wody.Dostosuj pH tego roztworu do 6,0 za pomocą kwasu fosforowego.Przefiltrować i odgazować.Przed pomiarem pH roztworu należy skalibrować pehametr standardowym roztworem buforowym o pH 4,01 ORAZ 7,00.
Mobilna faza B
Stopień czystości metanolu HPLC
Przygotowanie przydatności systemu
Odważyć dokładnie i przenieść po około 25 mg wzorca HCl estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny i monohydratu 4-nitro-L-fenyloalaniny do kolby miarowej o pojemności 50 ml, rozpuścić i rozcieńczyć do kreski metanolem i wymieszać.
Przygotowanie testu:
Zważyć dokładnie i przenieść około 25 mg próbki do kolby miarowej o pojemności 50 ml, rozpuścić i rozcieńczyć do kreski metanolem i wymieszać.
Parametry instrumentalne:
Instrument: HPLC wyposażony w inżektor, pompę, detektor UV i rejestrator
Kolumna: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ lub odpowiednik
Szybkość przepływu: 1,0 ml/minutę
Długość fali: 265nm
Objętość wstrzyknięcia: 20 μl
Temp. sabatu kolumny: 25℃
Czas trwania: 45 minut
Program gradientu
Czas (min) Faza ruchoma-A % Faza ruchoma-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedura:
Wstrzyknąć roztwory zgodnie z następującą kolejnością.Zapisz chromatogramy i potwierdź kryteria:
Próba ślepa 1 W czasie retencji chlorowodorku estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny nie należy zaobserwować piku zakłócającego.
Przygotowanie przydatności systemu 1 Współczynnik ogonowy dla piku estru metylowego L-4-nitrofenyloalaniny HCl nie powinien być mniejszy niż 2,0
Przygotowanie testu 1 Za pomocą chromatogramu testowego określić czystość chromatograficzną i zanieczyszczenia.
Względne czasy retencji:
Ester metylowy L-4-nitrofenyloalaniny HCl 1,0 (czas retencji ok. 11,4 minuty)
4-nitro-L-fenyloalanina Około 0,4
Toluen Około 2,3
Obliczenia:
Na chromatogramie otrzymanym z preparatu testowego, po korekcie próby ślepej, pominąć pik spowodowany toluenem.Podać czystość chromatograficzną, zawartość 4-nitro-L-fenyloalaniny i całkowitą ilość zanieczyszczeń w próbce metodą normalizacji powierzchni.