L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Ensaio >98,5% (HPLC) Fábrica

Método de Análise de L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Descrição: Colocar cerca de 2 g de amostra em uma placa de Petri limpa e seca e observar o aspecto da amostra.Relatando: Relate a observação
Identificação: Compare o tempo de retenção do pico principal no cromatograma da preparação de teste com o tempo de retenção do pico principal no cromatograma de preparação de adequação do sistema obtido em pureza cromatográfica por HPLC.
Perda na secagem: Seque um frasco de pesagem raso com rolha de vidro a 105±2℃ por 30 minutos.Deixe esfriar até a temperatura ambiente em um dessecador.Pese com precisão o frasco de pesagem com rolha e registre o peso (W1).Transfira cerca de 1 a 2g de quantidade de substância de teste pesada com precisão para o frasco de pesagem.Agitando suavemente de lado, distribua a amostra de teste o mais uniformemente possível até uma profundidade de cerca de 5 mm.Pese o frasco de pesagem carregado e registre o peso (W2).Colocar a garrafa carregada na estufa de secagem, retirando a rolha e deixando-a também na câmara.Seque a amostra de teste a 105±2℃ por 3 horas.Ao abrir a câmara, feche imediatamente o frasco e deixe-o atingir a temperatura ambiente em um dessecador.Pese com precisão o frasco de pesagem com tampa e recupere o peso (W3).Calcule a porcentagem de perda na secagem da amostra usando a seguinte fórmula:
Cálculo Perda na secagem (% p/p)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Conteúdo de enantiômero por HPLC:
Produtos Químicos e Reagentes:
grau AR n-hexano
Metanol grau HPLC
Álcool Isopropílico grau HPLC
Dietilamina grau AR
Padrões: L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl padrão;L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl enantiômero padrão
Fase Móvel: Prepare uma mistura homogênea de n-hexano, álcool isopropílico, metanol e dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Preparação do Branco: Transferir 2,5ml de Metanol para balão volumétrico de 10ml, completar o volume com fase móvel e misturar.
Preparação de adequação do sistema:
Pesar com precisão e transferir cerca de 5 mg de cada padrão de L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl e L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl padrão em um balão volumétrico de 10 ml, dissolver em cerca de 2,5 ml de metanol, diluir até o volume com fase e misture.
Preparação do teste:
Pesar com precisão e transferir cerca de 5 mg de amostra para balão volumétrico de 10 mol, dissolver em cerca de 2,5 ml de metanol, completar o volume com fase móvel e misturar.
Parâmetros instrumentais:
Instrumento: HPLC equipado com injetor, bomba, detector UV e registrador
Coluna: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ ou equivalente
Taxa de fluxo: 1,0 ml/minuto
Comprimento de onda: 260nm
Volume de injeção: 10 μL
Temperatura do coven da coluna: 25 ℃
Tempo de execução: 20 minutos
Procedimento
Injete as soluções conforme mencionado na sequência a seguir.Registre os cromatogramas e confirme os critérios:
Descrição dos Critérios de Número de Injeções de Injeções
Preparação em branco 1 Nenhum pico de interferência deve ser observado no tempo de retenção de L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl ou enantiômero.
Preparação de adequação do sistema 1 A resolução entre L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl e o pico do enantiômero não deve ser inferior a 2,0
Preparação do teste 1 Use o cromatograma de teste para determinar o teor de enantiômeros na amostra.
Tempos de Retenção Relativos:
L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl 1,0
Enantiômero Cerca de 1,11
O tempo de retenção do L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl é de cerca de 9,8 minutos.
Cálculo: No cromatograma obtido da preparação do teste, desconsidere todos os picos esperados L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl e Enantiômero.Relate o teor de enantiômero na amostra pelo método de normalização de área.
Pureza e impurezas cromatográficas por HPLC:
Produtos Químicos e Reagentes:
Grau AR de fosfato de diamônio
Ácido fosfórico grau AR
Metanol grau HPLC
Água purificada
Padrões
L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl padrão
Padrão de monohidrato de 4-nitro-L-fenilalanina
Fase Móvel-A
Dissolva 6,6 g de fosfato de diamônio em 1000ml de água purificada.Ajustar o pH desta solução para 6,0 com ácido fosfórico.Filtre e desgaseifique.Antes de medir o pH da solução, calibre o medidor de pH com solução tampão padrão pH 4,01 E 7,00.
Fase móvel-B
Metanol grau HPLC
Preparação de adequação do sistema
Pese com precisão e transfira cerca de 25 mg de L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl padrão e 4-Nitro-L-Fenilalanina monohidratado padrão em um balão volumétrico de 50 ml, dissolva e dilua até o volume com metanol e misture.
Preparação do teste:
Pesar com precisão e transferir cerca de 25 mg de amostra para um balão volumétrico de 50 ml, dissolver e diluir até o volume com metanol e misturar.
Parâmetros instrumentais:
Instrumento: HPLC equipado com injetor, bomba, detector UV e registrador
Coluna: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ ou equivalente
Taxa de fluxo: 1,0 ml/minuto
Comprimento de onda: 265nm
Volume de injeção: 20 μL
Temperatura do coven da coluna: 25 ℃
Tempo de execução: 45 minutos
Programa Gradiente
Tempo (min) Fase móvel-A % Fase móvel-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedimento:
Injete as soluções conforme mencionado na sequência a seguir.Registre os cromatogramas e confirme os critérios:
Preparação em branco 1 Nenhum pico de interferência deve ser observado no tempo de retenção de L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl.
Preparação de adequação do sistema 1 O fator de cauda para L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl não deve ser inferior a 2,0
Preparação do teste 1 Use o cromatograma de teste para determinar a pureza cromatográfica e as impurezas.
Tempos de Retenção Relativos:
L-4-Nitrofenilalanina Metil Ester HCl 1,0 (tempo de retenção de cerca de 11,4 minutos)
4-Nitro-L-Fenilalanina Cerca de 0,4
Tolueno Cerca de 2,3
Cálculos:
No cromatograma obtido na preparação do teste, após a correção do branco, desconsiderar o pico devido ao tolueno.Relate a pureza cromatográfica, o teor de 4-Nitro-L-Fenilalanina e o total de impurezas na amostra pelo método de normalização de área.