Ester metilic al L-4-nitrofenilalaninei HCI CAS 17193-40-7 Analiza H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl >98,5% (HPLC) Fabrică

Metoda de analiză a esterului metilic al L-4-nitrofenilalaninei HCI (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Descriere: Puneți aproximativ 2 g de probă într-o cutie Petri curată și uscată și observați aspectul probei.Raportare: Raportați observația
Identificare: Se compară timpul de retenție al vârfului major din cromatograma preparatului de testat cu timpul de retenție al vârfului major din cromatograma de pregătire a adecvării sistemului, așa cum este obținut în puritatea cromatografică prin HPLC.
Pierdere la uscare: Uscați o sticlă de cântărire mică, cu dop de sticlă, la 105±2℃ timp de 30 de minute.Lăsați-l să se răcească la temperatura camerei într-un descicator.Cântăriți cu precizie sticla de cântărire cu dop și înregistrați greutatea (W1).Transferați aproximativ 1 până la 2 g cantitate cântărită cu precizie de substanță de testat în sticla de cântărire.Prin agitare ușoară, în lateral, distribuiți eșantionul de testat cât mai uniform posibil la o adâncime de aproximativ 5 mm.Cântăriți sticla de cântărire încărcată și înregistrați greutatea (W2).Puneți sticla încărcată în cuptorul de uscare, îndepărtând dopul și lăsând-o și în cameră.Uscați proba de testat la 105±2℃ timp de 3 ore.La deschiderea camerei, închideți imediat sticla și lăsați-o să ajungă la temperatura camerei într-un desicator.Cântăriți cu precizie sticla de cântărire cu dop și recunoașteți greutatea (W3).Calculați pierderea procentuală la uscare a probei utilizând următoarea formulă:
Calcul Pierdere la uscare (% g/g)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Conținut de enantiomer prin HPLC:
Chimice și reactivi:
n-Hexan grad AR
Metanol de calitate HPLC
Alcool izopropilic de calitate HPLC
Dietilamină clasa AR
Standarde: L-4-nitrofenilalanină ester metilic HCI standard;L-4-nitrofenilalanină ester metilic HCI enantiomer standard
Faza mobilă: Se prepară un amestec omogen de n-hexan, alcool izopropilic, metanol și dietilamină (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Preparare martor: Se transferă 2,5 ml de metanol într-un balon cotat de 10 ml, se diluează la volum cu fază mobilă și se amestecă.
Pregătirea adecvării sistemului:
Se cântărește cu precizie și se transferă aproximativ 5 mg de L-4-nitrofenilalanină metil ester HCI standard și L-4-nitrofenilalanină metil ester HCI standard enantiomer într-un balon cotat de 10 ml, se dizolvă în aproximativ 2,5 ml de metanol, se diluează la volum cu mobil faza si se amesteca.
Pregatire pentru test:
Se cântărește cu precizie și se transferă aproximativ 5 mg de probă într-un balon cotat de 10 moli, se dizolvă în aproximativ 2,5 ml de metanol, se diluează la volum cu fază mobilă și se amestecă.
Parametri instrumentali:
Instrument: HPLC echipat cu injector, Pompă, detector UV și Recorder
Coloană: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ sau echivalent
Debit: 1,0 ml/minut
Lungime de unda: 260 nm
Volumul de injectare: 10 μL
Temp. coloană coven: 25℃
Timp de rulare: 20 de minute
Procedură
Injectați soluțiile așa cum este menționat în următoarea secvență.Înregistrați cromatogramele și confirmați criteriile:
Descrierea injecțiilor Numărul de injecții Criterii
Prepararea martor 1 Nu trebuie observat niciun vârf de interferență la timpul de retenție a L-4-nitrofenilalaninei metil ester HCI sau enantiomer.
Pregătirea adecvată a sistemului 1 Rezoluția dintre esterul metilic al L-4-nitrofenilalaninei HCI și vârful enantiomerului nu trebuie să fie mai mică de 2,0
Pregătirea testului 1 Utilizați cromatograma de testare pentru a determina conținutul de enantiomeri din probă.
Perioade relative de retenție:
Ester metilic al L-4-nitrofenilalaninei HCI 1,0
Enantiomer Despre 1.11
Timpul de retenție al L-4-nitrofenilalaninei ester metilic HCI este de aproximativ 9,8 minute.
Calcul: În cromatograma obținută din prepararea testului, ignorați toate vârfurile așteptate L-4-nitrofenilalaninei ester metilic HCI și enantiomer.Raportați conținutul de enantiomeri din probă prin metoda de normalizare a zonei.
Puritatea și impuritățile cromatografice prin HPLC:
Chimice și reactivi:
Fosfat de diamoniu clasa AR
Acid fosforic clasa AR
Metanol de calitate HPLC
Apa purificata
Standarde
Ester metilic al L-4-nitrofenilalaninei HCI standard
Standard de 4-nitro-L-fenilalanină monohidrat
Faza mobilă-A
Se dizolvă 6,6 g de fosfat de diamoniu în 1000 ml de apă purificată.Ajustați pH-ul acestei soluții la 6,0 cu acid fosforic.Se filtrează și se degazează.Înainte de a măsura pH-ul soluției, calibrați pH-metrul cu soluție tampon standard pH 4,01 ȘI 7,00.
Faza mobilă-B
Metanol de calitate HPLC
Pregătirea adecvarea sistemului
Se cântărește cu precizie și se transferă aproximativ 25 mg de standard ester metilic de L-4-nitrofenilalanină HCI și standard de 4-nitro-L-fenilalanină monohidrat într-un balon cotat de 50 ml, se dizolvă și se diluează la volum cu metanol și se amestecă.
Pregatire pentru test:
Se cântărește cu precizie și se transferă aproximativ 25 mg de probă într-un balon cotat de 50 ml, se dizolvă și se diluează la volum cu metanol și se amestecă.
Parametri instrumentali:
Instrument: HPLC echipat cu injector, Pompă, detector UV și Recorder
Coloană: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ sau echivalent
Debit: 1,0 ml/minut
Lungime de unda: 265 nm
Volumul de injectare: 20 μL
Temp. coloană coven: 25℃
Timp de rulare: 45 de minute
Program de gradient
Timp (min) Faza mobilă-A % Faza mobilă-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedură:
Injectați soluțiile așa cum este menționat în următoarea secvență.Înregistrați cromatogramele și confirmați criteriile:
Prepararea martor 1 Nu trebuie observat niciun vârf de interferență la timpul de retenție al L-4-nitrofenilalaninei ester metilic HCI.
Pregătirea adecvată a sistemului 1 Factorul de decantare pentru L-4-nitrofenilalanină ester metilic HCI nu trebuie să fie mai mic de 2,0
Pregătirea testului 1 Utilizați cromatograma de testare pentru a determina puritatea cromatografică și impuritățile.
Perioade relative de retenție:
Ester metilic al L-4-nitrofenilalaninei HCI 1,0 (timp de retenție aproximativ 11,4 minute)
4-Nitro-L-fenilalanină Aproximativ 0,4
Toluen Aproximativ 2,3
Calcule:
În cromatograma obținută din prepararea testului, după corectarea martor, nu se ține cont de vârful datorat toluenului.Se raportează puritatea cromatografică, conținutul de 4-nitro-L-fenilalanină și impuritățile totale din probă prin metoda de normalizare a zonei.