L-4-нитрофенилаланин метиловый эфир HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Анализ >98,5% (ВЭЖХ) Фабрика

Метод анализа метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Описание: Поместите около 2 г образца в чистую и сухую чашку Петри и наблюдайте за внешним видом образца.Отчетность: сообщите о наблюдении
Идентификация: Сравните время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого препарата со временем удерживания основного пика на хроматограмме препарата пригодности системы, полученное с хроматографической чистотой с помощью ВЭЖХ.
Потери при сушке: Высушите неглубокую бутыль для взвешивания со стеклянной пробкой при температуре 105 ± 2 ℃ в течение 30 минут.Дайте ему остыть до комнатной температуры в эксикаторе.Точно взвесьте бюкс с пробкой и запишите вес (W1).Перенесите точно взвешенное количество испытуемого вещества примерно от 1 до 2 г в колбу для взвешивания.Осторожным встряхиванием из стороны в сторону распределите испытуемый образец как можно более равномерно на глубину около 5 мм.Взвесьте загруженную бутыль для взвешивания и запишите вес (W2).Поместите загруженную бутылку в сушильный шкаф, сняв пробку и оставив ее также в камере.Высушите тестовый образец при 105 ± 2 ℃ в течение 3 часов.После открытия камеры немедленно закройте флакон и дайте ему нагреться до комнатной температуры в эксикаторе.Точно взвесьте бутылку для взвешивания с пробкой и зафиксируйте вес (W3).Рассчитайте процент потерь при сушке образца по следующей формуле:
Расчет Потери при сушке (% по массе) = (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Содержание энантиомеров по данным ВЭЖХ:
Химикаты и реагенты:
н-Гексан марки AR
Метанол класса ВЭЖХ
Изопропиловый спирт для ВЭЖХ
Диэтиламин марки АР
Стандарты: стандарт HCl метилового эфира L-4-нитрофенилаланина;Стандарт энантиомера метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl
Подвижная фаза: приготовьте гомогенную смесь н-гексана, изопропилового спирта, метанола и диэтиламина (65:20:15:0,1 об./об./об./об.).
Приготовление бланка: 2,5 мл метанола переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки подвижной фазой и перемешивают.
Подготовка к пригодности системы:
Точно взвесьте и перенесите примерно по 5 мг стандарта L-4-нитрофенилаланина метилового эфира HCl и стандартного энантиомера метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl в мерную колбу на 10 мл, растворите примерно в 2,5 мл метанола, разбавьте до нужного объема подвижной фазы и перемешать.
Подготовка к тесту:
Точно взвесьте и перенесите около 5 мг образца в мерную колбу на 10 моль, растворите примерно в 2,5 мл метанола, доведите до нужного объема подвижной фазой и перемешайте.
Инструментальные параметры:
Прибор: ВЭЖХ с инжектором, насосом, УФ-детектором и регистратором
Колонка: ChiralPak-IC (4,6 мм x 250 мм) 5 мкм или эквивалентная
Скорость потока: 1,0 мл/мин.
Длина волны: 260 нм
Объем инъекции: 10 мкл
Температура ковена колонки: 25℃
Продолжительность: 20 минут
Процедура
Введите решения, как указано в следующей последовательности.Запишите хроматограммы и подтвердите критерии:
Описание инъекций Количество инъекций Критерии
Приготовление холостого опыта 1 Не должно наблюдаться мешающего пика во время удерживания метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl или энантиомера.
Пригодность системы Подготовка 1 Разрешение между метиловым эфиром L-4-нитрофенилаланина HCl и пиком энантиомера должно быть не менее 2,0.
Подготовка к тесту 1 Используйте тестовую хроматограмму для определения содержания энантиомеров в образце.
Относительное время удерживания:
Метиловый эфир L-4-нитрофенилаланина HCl 1,0
Энантиомер О 1,11
Время удерживания метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl составляет около 9,8 минут.
Расчет: На хроматограмме, полученной при приготовлении теста, не учитывайте все пики, за исключением L-4-нитрофенилаланина, метилового эфира HCl и энантиомера.Запишите содержание энантиомеров в образце методом нормализации площади.
Хроматографическая чистота и примеси по данным ВЭЖХ:
Химикаты и реагенты:
Диаммонийфосфат марки АР
Фосфорная кислота марки АР
Метанол класса ВЭЖХ
Дистиллированная вода
Стандарты
Стандарт метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl
Стандарт моногидрата 4-нитро-L-фенилаланина
Мобильная фаза-А
Растворить 6,6 г диаммонийфосфата в 1000 мл очищенной воды.Доведите рН этого раствора до 6,0 с помощью фосфорной кислоты.Фильтровать и дегазировать.Перед измерением рН раствора откалибруйте рН-метр с помощью стандартного буферного раствора с рН 4,01 И 7,00.
Мобильная фаза-B
Метанол класса ВЭЖХ
Подготовка к пригодности системы
Тщательно взвесьте и перенесите примерно по 25 мг стандарта метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl и стандарта моногидрата 4-нитро-L-фенилаланина в мерную колбу на 50 мл, растворите и доведите до нужного объема метанолом и перемешайте.
Подготовка к тесту:
Тщательно взвесьте и перенесите примерно 25 мг образца в мерную колбу на 50 мл, растворите и доведите до нужного объема метанолом и перемешайте.
Инструментальные параметры:
Прибор: ВЭЖХ с инжектором, насосом, УФ-детектором и регистратором
Колонка: XTerra RP-18 (4,6 мм x 150 мм) 5 мкм или эквивалент
Скорость потока: 1,0 мл/мин.
Длина волны: 265 нм
Объем инъекции: 20 мкл
Температура ковена колонки: 25℃
Продолжительность: 45 минут
Градиентная программа
Время (мин) Подвижная фаза-A % Подвижная фаза-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Процедура:
Введите решения, как указано в следующей последовательности.Запишите хроматограммы и подтвердите критерии:
Контрольный образец 1 Не должно наблюдаться мешающего пика во время удерживания метилового эфира L-4-нитрофенилаланина HCl.
Подготовка к пригодности системы 1 Коэффициент хвоста пика L-4-нитрофенилаланинметилового эфира HCl должен быть не менее 2,0.
Подготовка к тесту 1 Используйте тестовую хроматограмму для определения хроматографической чистоты и примесей.
Относительное время удерживания:
L-4-нитрофенилаланин метиловый эфир HCl 1,0 (время удерживания около 11,4 минут)
4-нитро-L-фенилаланин около 0,4
Толуол Около 2,3
Расчеты:
На хроматограмме, полученной из препарата для испытаний, после корректировки холостого опыта не учитывают пик, обусловленный толуолом.Запишите хроматографическую чистоту, содержание 4-нитро-L-фенилаланина и общее количество примесей в образце методом нормализации площади.