Паклитаксел (таксол) Анализ CAS 33069-62-4 (ВЭЖХ) 97,0~102,0%

Паклитаксел
C47H51NO14 853,91
Бензолпропановая кислота, -(бензоиламино)--гидрокси-, 6,12b-бис(ацетилокси)-12-(бензоилокси)-2а,3,4,4а,5,6,9,10,11,12,12а,12б -додекагидро-4,11-дигидрокси-4а,8,13,13-тетраметил-5-оксо-7,11-метано-1Н-циклодека[3,4]бенз[1,2-b]оксет-9-ил сложный эфир, [2aR-[2a,4,4a,6,9(R*,S*),11,12,12a,12b]]-.
(2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-1,2a,3,4,4a,6,9,10,11,12,12a,12b-додекагидро-4,6, 9,11,12,12b-гексагидрокси-4а,8,13,13-тетраметил-7,11-метано-5H-циклодека[3,4]-бенз[1,2-b]оксет-5-он 6, 12b-диацетат, 12-бензоат, 9-эфир с (2R,3S)-N-бензоил-3-фенилизосерином [33069-62-4].
Паклитаксел содержит не менее 97,0% и не более 102,0% C47H51NO14 в пересчете на безводную, не содержащую растворителей основу.
[Осторожно! Паклитаксел цитотоксичен.Следует проявлять большую осторожность, чтобы предотвратить вдыхание частиц паклитаксела и их воздействие на кожу.]
Упаковка и хранение. Хранить в плотных светостойких контейнерах при контролируемой комнатной температуре.
Маркировка. Маркировка указывает тип процесса, использованного для производства материала, и тест родственных соединений, которому соответствует материал.
Справочные стандарты USP <11>-
USP Эндотоксин RS
USP Paclitaxel RS Нажмите, чтобы просмотреть структуру
USP Родственное соединение А паклитаксела RS
Цефаломаннин.
USP Соединение B, родственное паклитакселу, RS
10-деацетил-7-эпипаклитаксел.
Смесь примесей паклитаксела USP RS
Смесь паклитаксела и следующих родственных соединений: аналог пропила, цефаломаннин, аналог втор-бутила, аналог н-бутила, аналог бензила, баккатин VI, аналог пентила и 7-эпипаклитаксел.
Идентификация-
A: Инфракрасное поглощение <197K>.
B: Время удерживания основного пика на хроматограмме препарата для анализа соответствует времени удерживания на хроматограмме стандартного препарата, полученного в ходе анализа.
Удельное вращение 781S: от 49,0 до 55,0 при 20, в расчете на безводную основу без растворителя.
Тестовый раствор: 10 мг на мл в метаноле.
Тесты подсчета микробов <61> и тесты на определенные микроорганизмы <62> - Общее количество аэробных микробов не превышает 100 КОЕ на г.Соответствует требованиям тестов на отсутствие Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, видов Salmonella и Escherichia coli.
Бактериальные эндотоксины 85-Он содержит не более 0,4 единицы эндотоксина USP на мг паклитаксела.
Вода, метод Ic <921>: не более 4,0%.
Остаток при прокаливании <281>: не более 0,2%.
Тяжелые металлы, метод II <231>: 0,002%.
Родственные соединения-
тест 1 (для материала, помеченного как выделенный из природных источников). Если материал соответствует этому тесту, маркировка указывает, что он соответствует тесту 1 соединений, связанных с Фармакопеей США.
Разбавитель-приготовьте, как указано в анализе.
Раствор А-Приготовьте отфильтрованный и дегазированный ацетонитрил.
Решение B-Подготовьте фильтрованную и дегазированную воду.
Подвижная фаза. Используйте переменные смеси раствора А и раствора В, как указано для хроматографической системы.При необходимости внесите коррективы (см. «Пригодность системы» в разделе «Хроматография 621»).
Раствор для пригодности системы. Растворите точно взвешенные количества USP, родственного паклитакселу соединения A, RS и USP, родственного паклитакселу соединения B, RS в метаноле, чтобы получить раствор с известной концентрацией примерно 10 мкг каждого на мл.Перенесите 5,0 мл этого раствора в мерную колбу вместимостью 50 мл, разбавьте разбавителем до нужного объема и перемешайте.
Стандартный раствор. Растворите с помощью ультразвука точно взвешенное количество USP паклитаксела RS в разбавителе и разбавьте разбавителем количественно и поэтапно, если необходимо, чтобы получить раствор с известной концентрацией около 5 мкг на мл.
Тестовый раствор – используйте препарат для анализа.
Хроматографическая система (см. Хроматография <621>). Жидкостный хроматограф оснащен детектором с длиной волны 227 нм и колонкой размером 4,6 мм × 25 см с насадкой L43 размером 5 мкм.Скорость потока составляет около 2,6 мл в минуту.Температуру колонки поддерживают на уровне 30°С. Хроматограф запрограммирован следующим образом.
Время (минуты) Раствор A (%) Раствор B (%) Элюирование
0–35 35 65 изократический
35–60 35®80 65®20 линейный градиент
60–70 80®35 20®65 линейный градиент
70–80 35 65 Изократическая хроматография раствора пригодности системы и запись пиковых откликов, как указано в процедуре: относительное время удерживания составляет около 0,78 для родственного паклитакселу соединения А и 0,86 для родственного паклитакселу соединения В (относительно времени удерживания паклитаксела, полученного из Тестовый раствор);и разрешение R между родственным паклитакселу соединением А и родственным паклитакселу соединением В составляет не менее 1,0.Хроматографируйте стандартный раствор и запишите пиковые отклики, как указано в процедуре: относительное стандартное отклонение для повторных инъекций не превышает 2,0%.
Процедура. Введите объем (около 15 мкл) тестового раствора в хроматограф, запишите хроматограмму и измерьте площади основных пиков.Рассчитайте процентное содержание каждой примеси в взятой порции паклитаксела по формуле:
100(Пт/Пт)
где F — относительный коэффициент отклика для каждого примесного пика (значения см. в таблице 1);ri – площадь пика для каждой отдельной примеси;и rU представляет собой площадь пика паклитаксела.
Таблица 1
Относительное время удерживания Относительный коэффициент отклика (F) Название Предел (%)
0,24 1,29 Баккатин III 0,2
0,53 1,00 10-деацетилпаклитаксел 0,5
0,57 1,00 7-ксилозилпаклитаксел 0,2
0,78 1,26 Цефаломаннин (родственное паклитакселу соединение А) a11
0,78 1,26 2'',3''-Дигидроцефаломаннин а21
0,86 1,00 10-Деацетил-7-эпипаклитаксел (родственное паклитакселу соединение В) 0,5
1,10 1,00 Аналог бензила3 b12
1,10 1,00 3'',4''-Дегидропаклитаксел С b22
1,40 1,00 7-Эпицефаломаннин 0,3
1,85 1,00 7-Эпипаклитаксел 0,5
1 Разрешение может быть неполным для этих пиков, в зависимости от присутствующих относительных количеств;сумма а1 и а2 не более 0,5%.
2 Разрешение этих пиков может быть неполным, в зависимости от присутствующих относительных количеств;сумма b1 и b2 не более 0,5%.
3 Следующее химическое название присвоено родственному соединению, бензиловому аналогу: 13-эфир баккатина III с (2R,3S)-2-гидрокси-3-фенил-3-(2-фенилацетиламино)пропановой кислотой.
В дополнение к непревышению пределов для связанных с паклитакселом примесей в таблице 1 обнаружено не более 0,1% любой другой одиночной примеси;и обнаружено не более 2,0% от суммы примесей.
тест 2 (для материала, маркированного как полученный полусинтетическим процессом) — если материал соответствует этому тесту, маркировка указывает, что он соответствует тесту 2 родственных соединений Фармакопеи США.
Разбавитель: используйте ацетонитрил.
Решение А. Используйте отфильтрованную и дегазированную смесь воды и ацетонитрила (3:2).
Решение B – используйте отфильтрованный и дегазированный ацетонитрил.
Подвижная фаза. Используйте переменные смеси раствора А и раствора В, как указано для хроматографической системы.При необходимости внесите коррективы (см. «Пригодность системы» в разделе «Хроматография 621»).
Раствор для пригодности системы. Растворите точно взвешенные количества паклитаксела USP и родственного паклитаксела соединения B RS в разбавителе, при необходимости встряхивая и обрабатывая ультразвуком, чтобы получить раствор с известными концентрациями около 0,96 мг и 0,008 мг на мл соответственно.
Тестовый раствор. Перенесите точно взвешенные около 10 мг паклитаксела в мерную колбу на 10 мл, растворите и разбавьте разбавителем до нужного объема, встряхивая и обрабатывая ультразвуком, если это необходимо, и перемешивайте.
Хроматографическая система (см. Хроматография 621). Жидкостный хроматограф оснащен детектором с длиной волны 227 нм и колонкой размером 4,6 мм × 15 см с насадкой L1 размером 3 мкм.Скорость потока составляет около 1,2 мл в минуту.Температуру колонки поддерживают на уровне 35°С. Хроматограф запрограммирован следующим образом.
Время (минуты) Раствор A (%) Раствор B (%) Элюирование
0-20 100 0 изократический
20-60 100®10 0®90 линейный градиент
60-62 10®100 90®0 линейный градиент
62-70 100 0 Изократическая хроматография раствора пригодности системы и запись пиковых откликов, как указано для процедуры: относительное время удерживания составляет около 0,94 для родственного паклитакселу соединения В и 1,0 для паклитаксела;разрешение R между родственным паклитакселу соединением В и паклитакселом составляет не менее 1,2;и относительное стандартное отклонение для повторных инъекций не более 2,0%.
Процедура. Отдельно введите равные объемы (около 15 мкл) разбавителя и тестового раствора в хроматограф, запишите хроматограммы и измерьте площади всех пиков.Не обращайте внимания на любые пики из-за разбавителя.Рассчитайте процентное содержание каждой примеси в взятой порции паклитаксела по формуле:
100 (пт / рс)
где F — относительный коэффициент отклика для каждой примеси (значения см. в таблице 2);ri — площадь пика для каждой примеси, полученная из испытуемого раствора;rs представляет собой сумму площадей всех пиков, полученных из тестового раствора.
Таблица 2
Относительное время удерживания Относительный коэффициент отклика (F) Название Предел (%)
0,11 1,24 10-деацетилбаккатин III 0,1
0,20 1,29 Баккатин III 0,2
0,42 1,39 Фотодеградант2 0,1
0,47 1,00 10-деацетилпаклитаксел 0,5
0,80 1,00 2-дебензоилпаклитаксел-2-пентеноат 0,7
0,921 1,00 Оксетановое кольцо разомкнуто, мигрируют ацетил и бензоил2 x1
0,921 1,00 10-ацетоацетилпаклитаксел x2
0,941 1,00 10-деацетил-7-эпипаклитаксел (родственное паклитакселу соединение B) x3
1,37 1,00 7-Эпипаклитаксел 0,4
1,45 1,00 10,13-биссидецепенпаклитаксел2 0,5
1,54 1,00 7-ацетилпаклитаксел 0,6
1,80 1,75 13-Тес-баккатин III 0,1
2,14 1,00 7-Тес-паклитаксел 0,3
1 Разрешение может быть неполным для этих пиков, в зависимости от присутствующих относительных количеств;сумма х1, х2 и х3 не более 0,4%.
2 Родственным соединениям присвоены следующие химические названия. Фотодеградант;Оксетановое кольцо размыкается, мигрируют ацетил и бензоил;и 10,13-биссайдцепенпаклитаксел:
Фотодеградант
(1R,2R,4S,5S,7R,10S,11R,12S,13S,15S,16S)-2,10-диацетилокси-5,13-дигидрокси-4,16,17,17-тетраметил-8-окса- 3-оксо-12-фенилкарбонилоксипентацикло[11.3.1.01,11.04,11.07,10]гептадек-15-ил
(2R,3S)-2-гидрокси-3-фенил-3-(фенилкарбониламино)пропаноат
Оксетановое кольцо разомкнуто, ацетил и бензоил мигрируют
(1S,2S,3R,4S,5S,7S,8S,10R,13S)-5,10-диацетилокси-1,2,4,7-тетрагидрокси-8,12,15,15-тетраметил-9-оксо- 4-(фенилкарбонилоксиметил)трицикло[9.3.1.03,8]пентадек-11-ен-13-ил
(2R,3S)-2-гидрокси-3-фенил-3-(фенилкарбониламино)пропаноат
10,13-биссайдцепенпаклитаксел
Баккатин III 13-эфир с (2R,3S)-2-гидрокси-3-фенил-3-(фенилкарбониламино)пропановой кислотой, 10-эфир с (2S,3S)-2-гидрокси-3-фенил-3-(фенилкарбониламино) ) пропановая кислота
В дополнение к непревышению пределов для связанных с паклитакселом примесей в таблице 2 обнаружено не более 0,1% любой другой одиночной примеси;и обнаружено не более 2,0% от суммы примесей.
тест 3 (для материала, помеченного как полученный в процессе ферментации растительных клеток) — если материал соответствует этому тесту, маркировка указывает, что он соответствует тесту 3 родственных соединений USP.
Решение А. Приготовьте отфильтрованную и дегазированную смесь воды и ацетонитрила (3:2).
Раствор B-Подготовьте отфильтрованный и дегазированный ацетонитрил.
Подвижная фаза. Используйте переменные смеси раствора А и раствора В, как указано для хроматографической системы.При необходимости внесите коррективы (см. «Пригодность системы» в разделе «Хроматография 621»).
Раствор для пригодности системы. Растворите USP Paclitaxel Impurity Mixture RS в ацетонитриле, при необходимости обработав ультразвуком, чтобы получить раствор с известной концентрацией около 1 мг на мл.
Стандартный раствор. Растворяют точно взвешенное количество паклитаксела RS в ацетонитриле, при необходимости обрабатывая ультразвуком, чтобы получить раствор с известной концентрацией около 1 мг на мл.
Тестовый раствор. Перенесите точно взвешенные около 10 мг паклитаксела в мерную колбу на 10 мл.Растворяют и разбавляют ацетонитрилом до нужного объема, при необходимости обрабатывая ультразвуком, и перемешивают.
Хроматографическая система (см. Хроматография 621). Жидкостный хроматограф оснащен детектором с длиной волны 227 нм и колонкой размером 4,6 мм × 15 см с насадкой L1 размером 3 мкм.Скорость потока составляет около 1,2 мл в минуту.Хроматограф запрограммирован следующим образом.
Время (минуты) Раствор A (%) Раствор B (%) Элюирование
0-28 100 0 изократический
28-33 100®98 0®2 линейный градиент
33–58 98®10 2®90 линейный градиент
58-60 10 90 изократический
60-63 10®100 90®0 линейный градиент
63-70 100 0 изократическая хроматография раствора пригодности системы и запись пиковых ответов, как указано для процедуры: разрешение R между паклитакселом и бензиловым аналогом составляет не менее 1,8.Хроматографируйте стандартный раствор и запишите пиковые отклики, как указано в процедуре: относительное стандартное отклонение для повторных инъекций не превышает 2,0%.[примечание — в целях идентификации пиков приблизительные относительные времена удерживания приведены в таблице 3. Относительные времена удерживания измеряются по сравнению с паклитакселом.]
Таблица 3
Название Относительный срок удерживания (%)
Аналог пропила1 0,54 0,2
Цефаломаннин (родственное паклитакселу соединение А) 0,76 0,5
Аналог втор-бутила2 0,81 0,2
Аналог н-бутила3 0,89 0,1
Аналог бензила 1,10 0,4
Баккатин VI 1,23 0,2
Аналог пентила4 1,31 0,2
7-эпипаклитаксел 1,51 0,4
1 Следующее химическое название присвоено родственному аналогу пропила: 13-эфир баккатина III с (2R,3S)-3-бутаноиламино-2-гидрокси-3-фенилпропановой кислотой.
2 Следующее химическое название присвоено родственному аналогу втор-бутила соединения: 13-эфир баккатина III с (2R,3S)-2-гидрокси-3-(2-метилбутаноиламино)-3-фенилпропановой кислотой.
3 Следующее химическое название присвоено родственному аналогу н-бутила соединения: 13-эфир баккатина III с (2S,3S)-2-гидрокси-3-(пентаноиламино)-3-фенилпропановой кислотой.
4 Родственному аналогу пентила присвоено следующее химическое название: 13-эфир баккатина III с (2R,3S)-3-(гексаноиламино)-2-гидрокси-3-фенилпропановой кислотой.
Процедура. Введите объем (около 12 мкл) тестового раствора в хроматограф, запишите хроматограмму и измерьте площади всех пиков.Рассчитайте процентное содержание каждой примеси в взятой порции паклитаксела по формуле:
100(ри/ру)
где ri — отклик каждой отдельной примеси;и rU — сумма площадей всех пиков, полученных из испытуемого раствора.В дополнение к непревышению пределов для связанных с паклитакселом примесей в таблице 3 обнаружено не более 0,1% любой другой одиночной примеси;и обнаружено не более 2,0% от суммы примесей.
анализ-
Разбавитель. Приготовьте смесь метанола и уксусной кислоты (200:1).
Подвижная фаза. Приготовьте отфильтрованную и дегазированную смесь воды и ацетонитрила (11:9).При необходимости внесите коррективы (см. «Пригодность системы» в разделе «Хроматография 621»).
Стандартный препарат. Растворите, при необходимости обработав ультразвуком, точно взвешенное количество USP паклитаксела RS в разбавителе и разбавьте разбавителем количественно и поэтапно, если необходимо, чтобы получить раствор с известной концентрацией около 1 мг на мл.
Подготовка к анализу. Перенесите точно взвешенные около 10 мг паклитаксела в мерную колбу на 10 мл.Растворить в разбавителе, при необходимости обработать ультразвуком, разбавить разбавителем до нужного объема и перемешать.
Хроматографическая система (см. Хроматография <621>). Жидкостный хроматограф оснащен детектором с длиной волны 227 нм и колонкой размером 4,6 мм × 25 см с насадкой L43 размером 5 мкм.Скорость потока составляет около 1,5 мл в минуту.Хроматографируйте стандартный препарат и запишите отклики пиков, как указано в процедуре: коэффициент хвоста составляет от 0,7 до 1,3;и относительное стандартное отклонение для повторных инъекций не более 1,5%.
Процедура. Отдельно введите равные объемы (около 10 мкл) препарата стандарта и препарата для анализа в хроматограф, запишите хроматограммы и измерьте площади основных пиков.Рассчитайте количество, мг, C47H51NO14 в порции паклитаксела, взятой по формуле:
10С(рУ/рС)
где C представляет собой концентрацию в мг на мл USP паклитаксела RS в стандартном препарате;и rU и rS представляют собой пиковые ответы для паклитаксела, полученные из препарата для анализа и стандартного препарата, соответственно.