L-4-nitrofenylalanín metylester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl test >98,5 % (HPLC) Továreň

Spôsob analýzy metylesteru L-4-nitrofenylalanínu HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe.HCl) (CAS: 17193-40-7)
Opis: Vložte asi 2 g vzorky do čistej a suchej Petriho misky a sledujte vzhľad vzorky.Hlásenie: Oznámte pozorovanie
Identifikácia: Porovnajte retenčný čas hlavného píku v chromatograme testovaného prípravku s retenčným časom hlavného píku v chromatograme prípravku vhodnosti systému, ktorý sa získal pri chromatografickej čistote pomocou HPLC.
Strata sušením: Plytkú navažovačku so sklenenou zátkou sušte 30 minút pri teplote 105 ± 2 °C.Nechajte ho vychladnúť na izbovú teplotu v exsikátore.Odvážte presne navažovačku so zátkou a zaznamenajte hmotnosť (W1).Preneste približne 1 až 2 g presne odváženého množstva testovanej látky do navažovačky.Jemným potrasením do strán rozmiestnite skúšobnú vzorku čo najrovnomernejšie do hĺbky asi 5 mm.Odvážte naplnenú navažovačku a zaznamenajte hmotnosť (W2).Vložte naplnenú fľašu do sušiacej pece, odstráňte zátku a nechajte ju tiež v komore.Skúšobnú vzorku sušte pri teplote 105 ± 2 °C počas 3 hodín.Po otvorení komory fľašu ihneď zatvorte a nechajte ju zohriať na izbovú teplotu v exsikátore.Odvážte presne navažovačku so zátkou a zmeňte hmotnosť (W3).Vypočítajte percentuálnu stratu sušením vzorky pomocou nasledujúceho vzorca:
Výpočet Strata sušením (% w/w) = (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Obsah enantioméru podľa HPLC:
Chemikálie a činidlá:
triedy n-Hexane AR
Metanol akosti pre HPLC
Izopropylalkohol HPLC kvality
Dietylamín AR triedy
Štandardy: L-4-nitrofenylalanín metylester HCl štandard;L-4-nitrofenylalanín metylester HCl štandardný enantiomér
Mobilná fáza: Pripravte homogénnu zmes n-hexánu, izopropylalkoholu, metanolu a dietylamínu (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Príprava slepého pokusu: Preneste 2,5 ml metanolu do 10 ml odmernej banky, rozrieďte na objem mobilnou fázou a premiešajte.
Príprava na vhodnosť systému:
Presne odvážte a preneste približne 5 mg každého štandardu L-4-nitrofenylalanín metylester HCl a štandardného enantioméru L-4-nitrofenylalanín metylester HCl do 10 ml odmernej banky, rozpustite v približne 2,5 ml metanolu, rozrieďte na požadovaný objem mobilom fázy a premiešajte.
Príprava na test:
Presne odvážte a preneste asi 5 mg vzorky do 10-molovej odmernej banky, rozpustite v asi 2,5 ml metanolu, rozrieďte na objem mobilnou fázou a premiešajte.
Prístrojové parametre:
Prístroj: HPLC vybavená injektorom, pumpou, UV detektorom a zapisovačom
Stĺpec: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ alebo ekvivalent
Prietok: 1,0 ml/min
Vlnová dĺžka: 260nm
Objem vstreku: 10 μL
Teplota pece kolóny: 25 ℃
Doba chodu: 20 minút
Postup
Vstreknite roztoky, ako je uvedené v nasledujúcom poradí.Zaznamenajte chromatogramy a potvrďte kritériá:
Opis injekcií Kritériá počtu injekcií
Slepý pokus 1 Pri retenčnom čase L-4-nitrofenylalanínmetylester HCl alebo enantioméru by sa nemal pozorovať žiadny rušivý pík.
Príprava vhodnosti systému 1 Rozlíšenie medzi L-4-nitrofenylalanín metylester HCl a pikom enantioméru by nemalo byť menšie ako 2,0
Príprava testu 1 Na stanovenie obsahu enantioméru vo vzorke použite testovací chromatogram.
Relatívne časy uchovávania:
Metylester L-4-nitrofenylalanínu HCl 1,0
Enantiomér Približne 1.11
Retenčný čas L-4-nitrofenylalanín metylester HCl je približne 9,8 minúty.
Výpočet: V chromatograme získanom z testovaného prípravku sa neberú do úvahy všetky píky očakávané L-4-nitrofenylalanín metylester HCl a enantiomér.Uveďte obsah enantioméru vo vzorke metódou plošnej normalizácie.
Chromatografická čistota a nečistoty pomocou HPLC:
Chemikálie a činidlá:
Diamóniumfosfát triedy AR
Kyselina fosforečná triedy AR
Metanol akosti pre HPLC
Vyčistená voda
Normy
L-4-nitrofenylalanín metylester HCl štandard
Štandard monohydrátu 4-nitro-L-fenylalanínu
Mobilná fáza-A
Rozpustite 6,6 g fosforečnanu amónneho v 1000 ml čistenej vody.Upravte pH tohto roztoku na 6,0 pomocou kyseliny fosforečnej.Filtrovať a odplyňovať.Pred meraním pH roztoku nakalibrujte pH meter pomocou štandardného tlmivého roztoku pH 4,01 A 7,00.
Mobilná fáza-B
Metanol akosti pre HPLC
Príprava vhodnosti systému
Presne odvážte a preneste asi 25 mg každého štandardu L-4-nitrofenylalanín metylester HCl a štandardu monohydrátu 4-nitro-L-fenylalanínu do 50 ml odmernej banky, rozpustite v metanole a rozrieďte na požadovaný objem a premiešajte.
Príprava na test:
Presne odvážte a preneste približne 25 mg vzorky do 50 ml odmernej banky, rozpustite v nej a zrieďte na objem metanolom a premiešajte.
Prístrojové parametre:
Prístroj: HPLC vybavená injektorom, pumpou, UV detektorom a zapisovačom
Stĺpec: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ alebo ekvivalent
Prietok: 1,0 ml/min
Vlnová dĺžka: 265nm
Objem vstreku: 20 μL
Teplota pece kolóny: 25 ℃
Doba chodu: 45 minút
Gradientový program
Čas (min) Mobilná fáza-A % Mobilná fáza-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Postup:
Vstreknite roztoky, ako je uvedené v nasledujúcom poradí.Zaznamenajte chromatogramy a potvrďte kritériá:
Slepý pokus 1 Pri retenčnom čase L-4-nitrofenylalanín metylester HCl by sa nemal pozorovať žiadny rušivý pík.
Príprava vhodnosti systému 1 Koncový faktor pre vrchol L-4-nitrofenylalanín metylester HCl by nemal byť menší ako 2,0
Príprava testu 1 Na stanovenie chromatografickej čistoty a nečistôt použite testovací chromatogram.
Relatívne časy uchovávania:
L-4-nitrofenylalanín metylester HCl 1,0 (retenčný čas približne 11,4 minúty)
4-nitro-L-fenylalanín Približne 0,4
Toluén Približne 2,3
Výpočty:
Na chromatograme získanom zo skúšobného prípravku po korekcii slepého pokusu neberte do úvahy pík toluénu.Uveďte chromatografickú čistotu, obsah 4-nitro-L-fenylalanínu a celkové nečistoty vo vzorke metódou normalizácie plochy.