L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl test >98,5 % (HPLC) tovarna

Metoda analize L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Opis: približno 2 g vzorca damo v čisto in suho petrijevko in opazujemo videz vzorca.Poročanje: poročajte o opazovanju
Identifikacija: Primerjajte retenzijski čas glavnega vrha v kromatogramu preskusnega pripravka z retenzijskim časom glavnega vrha v kromatogramu pripravka za primernost sistema, kot je dobljen v kromatografski čistosti s HPLC.
Izguba pri sušenju: 30 minut sušite plitvo tehtičo s steklenim zamaškom pri 105±2 ℃.Pustite, da se ohladi na sobno temperaturo v eksikatorju.Natančno stehtajte tehtič z zamaškom in zabeležite težo (W1).Prenesite približno 1 do 2 g natančno stehtane količine preskusne snovi v tehtič.Z nežnim bočnim stresanjem preskusni vzorec čim bolj enakomerno porazdelite do globine približno 5 mm.Stehtajte naloženo tehtičo in zabeležite težo (W2).Napolnjeno steklenico postavite v sušilnik, odstranite zamašek in jo pustite prav tako v komori.Preskusni vzorec sušite 3 ure pri 105 ± 2 ℃.Ko odprete komoro, steklenico takoj zaprite in pustite, da se segreje na sobno temperaturo v eksikatorju.Natančno stehtajte tehtič z zamaškom in ponovno izračunajte težo (W3).Izračunajte odstotek izgube pri sušenju vzorca z uporabo naslednje formule:
Izračun Izguba pri sušenju (% w/w) = (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Vsebnost enantiomera s HPLC:
Kemikalije in reagenti:
n-heksan stopnje AR
Stopnja metanola HPLC
Stopnja izopropilnega alkohola HPLC
Dietilamin stopnje AR
Standardi: L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard;L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard enantiomera
Mobilna faza: Pripravite homogeno mešanico n-heksana, izopropilnega alkohola, metanola in dietilamina (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Priprava slepega vzorca: 2,5 ml metanola prenesite v 10-mililitrsko merilno bučko, razredčite na prostornino z mobilno fazo in premešajte.
Priprava na ustreznost sistema:
Natančno stehtajte in prenesite približno 5 mg standarda L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl in standarda enantiomera L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl v 10-mililitrsko merilno bučko, raztopite v približno 2,5 ml metanola, razredčite na prostornino z mobilno faze in premešamo.
Priprava testa:
Natančno stehtajte in prenesite približno 5 mg vzorca v 10-molsko merilno bučko, raztopite v približno 2,5 ml metanola, razredčite na prostornino z mobilno fazo in premešajte.
Instrumentalni parametri:
Instrument: HPLC opremljen z injektorjem, črpalko, UV detektorjem in snemalnikom
Kolona: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ ali enakovredna
Hitrost pretoka: 1,0 ml/minuto
Valovna dolžina: 260nm
Injekcijski volumen: 10 μL
Temperatura koven kolone: ​​25 ℃
Čas delovanja: 20 minut
Postopek
Vbrizgajte raztopine, kot je navedeno v naslednjem zaporedju.Zapišite kromatograme in potrdite kriterije:
Opis meril za število injekcij
Slepa priprava 1 Pri retenzijskem času L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl ali enantiomera ne bi smeli opaziti motečega vrha.
Priprava primernosti sistema 1 Ločljivost med L-4-nitrofenilalanin metil estrom HCl in vrhom enantiomera ne sme biti nižja od 2,0
Priprava testa 1 S testnim kromatogramom določite vsebnost enantiomera v vzorcu.
Relativni retencijski časi:
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl 1.0
Enantiomer Približno 1.11
Retencijski čas L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl je približno 9,8 minut.
Izračun: V kromatogramu, dobljenem s pripravo testa, zanemarite vse vrhove, pričakujete L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl in enantiomer.Navedite vsebnost enantiomera v vzorcu po metodi površinske normalizacije.
Kromatografska čistost in nečistoče s HPLC:
Kemikalije in reagenti:
Diamonijev fosfat stopnje AR
Fosforna kislina stopnje AR
Stopnja metanola HPLC
Očiščena voda
Standardi
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl standard
Standard 4-nitro-L-fenilalanin monohidrata
Mobilna faza-A
Raztopite 6,6 g diamonijevega fosfata v 1000 ml prečiščene vode.Naravnajte pH te raztopine na 6,0 s fosforno kislino.Filtrirajte in razplinite.Pred merjenjem pH raztopine umerite pH meter s standardno pufrsko raztopino pH 4,01 IN 7,00.
Mobilna faza-B
Stopnja metanola HPLC
Priprava na ustreznost sistema
Natančno stehtajte in prenesite približno 25 mg standarda L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl in standarda 4-nitro-L-fenilalanin monohidrata v 50-mililitrsko merilno bučko, raztopite in razredčite na prostornino z metanolom ter premešajte.
Priprava testa:
Natančno stehtajte in prenesite približno 25 mg vzorca v 50-mililitrsko merilno bučko, raztopite in razredčite na prostornino z metanolom ter premešajte.
Instrumentalni parametri:
Instrument: HPLC opremljen z injektorjem, črpalko, UV detektorjem in snemalnikom
Kolona: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ ali enakovredno
Hitrost pretoka: 1,0 ml/minuto
Valovna dolžina: 265nm
Injekcijski volumen: 20 μL
Temperatura koven kolone: ​​25 ℃
Čas delovanja: 45 minut
Gradientni program
Čas (min) Mobilna faza-A % Mobilna faza-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Postopek:
Vbrizgajte raztopine, kot je navedeno v naslednjem zaporedju.Zapišite kromatograme in potrdite kriterije:
Slepa priprava 1 Pri retenzijskem času L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl ne smemo opaziti motečega vrha.
Priprava primernosti sistema 1 Faktor repa za vrh L-4-nitrofenilalanin metil estra HCl ne sme biti manjši od 2,0
Priprava testa 1 S testnim kromatogramom določite kromatografsko čistost in nečistoče.
Relativni retencijski časi:
L-4-nitrofenilalanin metil ester HCl 1,0 (retenzijski čas približno 11,4 minute)
4-nitro-L-fenilalanin Približno 0,4
Toluen Približno 2,3
Izračuni:
V kromatogramu, dobljenem s pripravo preskusa, po korekciji slepega vzorca zanemarite vrh zaradi toluena.Navedite kromatografsko čistost, vsebnost 4-nitro-L-fenilalanina in skupne nečistoče v vzorcu z metodo površinske normalizacije.