L-4-Nitrofenylalanin Metylester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl analys >98,5% (HPLC) Fabrik

Metod för analys av L-4-nitrofenylalaninmetylester-HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Beskrivning: Lägg cirka 2 g prov i en ren och torr petriskål och observera provets utseende.Rapportering: Rapportera observationen
Identifiering: Jämför retentionstiden för huvudtoppen i kromatogrammet för testpreparatet med retentionstiden för huvudtoppen i kromatogrammet för systemlämplighetsberedning som erhållits i kromatografisk renhet med HPLC.
Förlust vid torkning: Torka en grund vägningsflaska med glaspropp vid 105±2℃ i 30 minuter.Låt den svalna till rumstemperatur i en exsciccator.Väg vägningsflaskan med propp noggrant och notera vikten (W1).Överför cirka 1 till 2 g noggrant uppvägd mängd testämne till vägningsflaskan.Fördela provexemplaret så jämnt som möjligt till ett djup av cirka 5 mm genom att skaka försiktigt i sidled.Väg den laddade vågflaskan och registrera vikten (W2).Placera den laddade flaskan i torkugnen, ta bort proppen och lämna den också i kammaren.Torka testprovet vid 105±2℃ i 3 timmar.När du öppnar kammaren, stäng flaskan omedelbart och låt den komma till rumstemperatur i en exsickator.Väg vägningsflaskan med propp noggrant och räkna upp vikten (W3).Beräkna den procentuella förlusten vid torkning av provet med hjälp av följande formel:
Beräkningsförlust vid torkning (% vikt/vikt)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Enantiomerinnehåll enligt HPLC:
Kemikalier och reagenser:
n-hexan AR-klass
Metanol HPLC-kvalitet
Isopropylalkohol HPLC-kvalitet
Dietylamin AR-kvalitet
Standarder: L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl-standard;L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl-enantiomerstandard
Mobil fas: Förbered en homogen blandning av n-hexan, isopropylalkohol, metanol och dietylamin (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Blankberedning: Överför 2,5 ml metanol i en 10 ml mätkolv, späd till volym med mobil fas och blanda.
Systemets lämplighet förberedelse:
Väg noggrant och överför cirka 5 mg vardera av L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl-standard och L-4-nitrofenylalaninmetylester-HCl-enantiomerstandard i en 10 ml mätkolv, lös upp i cirka 2,5 ml metanol, späd till volym med mobil fas och blanda.
Provförberedelse:
Väg noggrant och överför cirka 5 mg prov i en 10-mol mätkolv, lös upp i cirka 2,5 ml metanol, späd till volym med mobil fas och blanda.
Instrumentella parametrar:
Instrument: HPLC utrustad med injektor, pump, UV-detektor och Recorder
Kolumn: ChiralPak-IC (4,6 mm x 250 mm) 5 μ eller motsvarande
Flödeshastighet: 1,0 ml/minut
Våglängd: 260nm
Injektionsvolym: 10 μL
Kolumn coven temp.: 25℃
Speltid: 20 minuter
Procedur
Injicera lösningarna enligt följande sekvens.Spela in kromatogrammen och bekräfta kriterierna:
Beskrivning av injektioner Antal injektionskriterier
Blankberedning 1 Ingen störande topp bör observeras vid retentionstiden för L-4-nitrofenylalaninmetylester-HCl eller enantiomer.
Systemlämplighetsförberedelse 1 Upplösningen mellan L-4-Nitrofenylalanin Methyl Ester HCl och enantiomertopp bör inte vara mindre än 2,0
Testförberedelse 1 Använd testkromatogram för att bestämma enantiomerhalten i provet.
Relativa retentionstider:
L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl 1,0
Enantiomer Ungefär 1.11
Retentionstiden för L-4-nitrofenylalaninmetylester-HCl är cirka 9,8 minuter.
Beräkning: I kromatogrammet erhållet från testberedningen, bortse från alla toppar förvänta L-4-nitrofenylalanin metylester HCl och enantiomer.Rapportera enantiomerhalten i provet efter areanormaliseringsmetod.
Kromatografisk renhet och föroreningar med HPLC:
Kemikalier och reagenser:
Diammoniumfosfat AR-kvalitet
Fosforsyra AR-klass
Metanol HPLC-kvalitet
Renat vatten
Standarder
L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl-standard
4-Nitro-L-Fenylalaninmonohydratstandard
Mobil Fas-A
Lös 6,6 g diammoniumfosfat i 1000 ml renat vatten.Justera pH för denna lösning till 6,0 med fosforsyra.Filtrera och avgasa.Innan du mäter lösningens pH, kalibrera pH-mätaren med standardbuffertlösning pH 4,01 OCH 7,00.
Mobil Fas-B
Metanol HPLC-kvalitet
Systemlämplighetsförberedelse
Väg noggrant och överför cirka 25 mg vardera av L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl-standard och 4-nitro-L-fenylalaninmonohydratstandard i en 50 ml mätkolv, lös upp i och späd till volym med metanol och blanda.
Provförberedelse:
Väg noggrant och överför cirka 25 mg prov i en 50 ml mätkolv, lös upp i och späd till volym med metanol och blanda.
Instrumentella parametrar:
Instrument: HPLC utrustad med injektor, pump, UV-detektor och Recorder
Kolumn: XTerra RP-18 (4,6 mm x 150 mm) 5 μ eller motsvarande
Flödeshastighet: 1,0 ml/minut
Våglängd: 265nm
Injektionsvolym: 20 μL
Kolumn coven temp.: 25℃
Speltid: 45 minuter
Gradientprogram
Tid (min) Mobil Fas-A % Mobil Fas-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Procedur:
Injicera lösningarna enligt följande sekvens.Spela in kromatogrammen och bekräfta kriterierna:
Blankberedning 1 Ingen störande topp bör observeras vid retentionstiden för L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl.
Systemlämplighetsförberedelse 1 Slutfaktor för L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl-topp bör inte vara mindre än 2,0
Testförberedelse 1 Använd testkromatogram för att bestämma kromatografisk renhet och föroreningar.
Relativa retentionstider:
L-4-nitrofenylalaninmetylester HCl 1,0 (retentionstid ca 11,4 minuter)
4-Nitro-L-Fenylalanin Cirka 0,4
Toluen Cirka 2,3
Beräkningar:
I kromatogrammet som erhållits från testberedningen, efter blankkorrigering, bortse från toppen på grund av toluen.Rapportera den kromatografiska renheten, 4-Nitro-L-Fenylalaninhalten och totala föroreningar i provet efter areanormaliseringsmetod.