Paklitaxel (Taxol) CAS 33069-62-4 analys (HPLC) 97,0~102,0%

Paklitaxel
C47H51NO14 853,91
Bensenpropansyra, -(bensoylamino)-hydroxi-, 6,12b-bis(acetyloxi)-12-(bensoyloxi)-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b -dodekahydro-4,11-dihydroxi-4a,8,13,13-tetrametyl-5-oxo-7,11-metano-1H-cyklodeka[3,4]bens[1,2-b]oxet-9-yl ester, [2aR-[2a,4,4a,6,9(R*,S*),11,12,12a,12b]]-.
(2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-1,2a,3,4,4a,6,9,10,11,12,12a,12b-Dodecahydro-4,6, 9,11,12,12b-hexahydroxi-4a,8,13,13-tetrametyl-7,11-metano-5H-cyklodeka[3,4]-bens[1,2-b]oxet-5-on 6, 12b-diacetat, 12-bensoat, 9-ester med (2R,3S)-N-bensoyl-3-fenylisoserin [33069-62-4].
Paklitaxel innehåller inte mindre än 97,0 procent och inte mer än 102,0 procent av C47H51NO14, beräknat på vattenfri, lösningsmedelsfri basis.
[Försiktighet - Paklitaxel är cytotoxiskt.Stor försiktighet bör iakttas för att förhindra att partiklar av paklitaxel andas in och att huden utsätts för det.]
Förpackning och förvaring - Förvara i täta, ljusbeständiga behållare och förvara i kontrollerad rumstemperatur.
Märkning-Märkningen anger vilken typ av process som används för att framställa materialet och testet för relaterade föreningar som materialet uppfyller.
USP Referensstandarder <11>-
USP Endotoxin RS
USP Paclitaxel RS Klicka för att se struktur
USP Paklitaxel-relaterad förening A RS
Cefalomannin.
USP Paklitaxel-relaterad förening B RS
10-deacetyl-7-epipaclitaxel.
USP Paklitaxel föroreningsblandning RS
Blandning av paklitaxel och följande besläktade föreningar: propylanalog, cefalomannin, sek-butylanalog, n-butylanalog, bensylanalog, baccatin VI, pentylanalog och 7-epipaclitaxel.
Identifiering-
S: Infraröd absorption <197K>.
B: Retentionstiden för huvudtoppen i analyspreparatets kromatogram motsvarar den i standardpreparatets kromatogram, som erhållits i analysen.
Specifik rotation 781S: mellan 49,0 och 55,0 vid 20, beräknat på vattenfri, lösningsmedelsfri basis.
Testlösning: 10 mg per ml, i metanol.
Mikrobiella uppräkningstester <61> och tester för specificerade mikroorganismer <62>-Det totala antalet aeroba mikrobiella överskrider inte 100 cfu per g.Den uppfyller kraven i testerna för frånvaro av Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella-arter och Escherichia coli.
Bakteriella endotoxiner 85-Det innehåller inte mer än 0,4 USP Endotoxin Unit per mg paklitaxel.
Vatten, Metod Ic <921>: inte mer än 4,0 %.
Återstod vid antändning <281>: inte mer än 0,2 %.
Tungmetaller, Metod II <231>: 0,002%.
Relaterade föreningar-
test 1 (för material märkt som isolerat från naturliga källor) - Om materialet uppfyller detta test, indikerar märkningen att det uppfyller USP-relaterade föreningar Test 1.
Spädningsmedel-Förbered enligt anvisningarna i analysen.
Lösning A-Förbered filtrerad och avgasad acetonitril.
Lösning B-Förbered filtrerat och avgasat vatten.
Mobil fas - Använd variabla blandningar av lösning A och lösning B enligt anvisningarna för kromatografiska system.Gör justeringar vid behov (se Systemlämplighet under Kromatografi 621).
Systemlämplighetslösning - Lös noggrant uppvägda mängder av USP Paklitaxel-relaterad förening A RS och USP-paklitaxel-relaterad förening B RS i metanol för att erhålla en lösning med kända koncentrationer på cirka 10 µg av vardera per ml.Överför 5,0 mL av denna lösning till en 50 mL mätkolv, späd med spädningsmedel till volym och blanda.
Standardlösning - Lös upp, med hjälp av sonikering, en noggrant uppvägd mängd USP Paclitaxel RS i spädningsmedel, och späd kvantitativt, och stegvis om nödvändigt, med spädningsmedel för att erhålla en lösning med en känd koncentration av cirka 5 µg per ml.
Testlösning - Använd analyspreparatet.
Kromatografiskt system (se Kromatografi <621>) - Vätskekromatografen är utrustad med en 227-nm detektor och en 4,6 mm × 25 cm kolonn som innehåller 5 µm packning L43.Flödeshastigheten är cirka 2,6 ml per minut.Kolonntemperaturen hålls vid 30°C. Kromatografen programmeras enligt följande.
Tid (minuter) Lösning A (%) Lösning B (%) Eluering
0–35 35 65 isokratisk
35–60 35®80 65®20 linjär gradient
60–70 80®35 20®65 linjär gradient
70–80 35 65 isokratiskKromatografera systemlämplighetslösningen och registrera toppsvar enligt anvisningarna för Procedur: de relativa retentionstiderna är cirka 0,78 för paklitaxelrelaterad förening A och 0,86 för paklitaxelrelaterad förening B (relativt retentionstiden för paklitaxel erhållen från testlösningen);och upplösningen R mellan paklitaxelrelaterade förening A och paklitaxelrelaterade förening B är inte mindre än 1,0.Kromatografera standardlösningen och registrera toppsvar enligt anvisningarna för Procedur: den relativa standardavvikelsen för replikatinjektioner är inte mer än 2,0 %.
Procedur – Injicera en volym (cirka 15 µL) av testlösningen i kromatografen, registrera kromatogrammet och mät ytorna för de största topparna.Beräkna procentandelen av varje förorening i den del av paklitaxel som tas med formeln:
100 (fre/rU)
där F är den relativa svarsfaktorn för varje föroreningstopp (se tabell 1 för värden);ri är topparean för varje enskild förorening;och rU är topparean för paklitaxel.
bord 1
Relativ retentionstid Relativ svarsfaktor (F) Namngräns (%)
0,24 1,29 Baccatin III 0,2
0,53 1,00 10-Deacetylpaclitaxel 0,5
0,57 1,00 7-xylosylpaklitaxel 0,2
0,78 1,26 Cefalomannin (Paclitaxel-relaterad förening A) a11
0,78 1,26 2'',3''-dihydrocefalomannin a21
0,86 1,00 10-deacetyl-7-epipaclitaxel (Paclitaxel-relaterad förening B) 0,5
1,10 1,00 Bensylanalog3 b12
1,10 1,00 3'',4''-Dehydropaclitaxel C b22
1,40 1,00 7-Epicefalomannin 0,3
1,85 1,00 7-Epipaclitaxel 0,5
1 Upplösningen kan vara ofullständig för dessa toppar, beroende på de relativa mängderna närvarande;summan av a1 och a2 är inte mer än 0,5 %.
2 Upplösningen kan vara ofullständig för dessa toppar, beroende på de relativa mängderna närvarande;summan av b1 och b2 är inte mer än 0,5 %.
3 Följande kemiska namn tilldelas den relaterade föreningen, bensylanalog: Baccatin III 13-ester med (2R,3S)-2-hydroxi-3-fenyl-3-(2-fenylacetylamino)propansyra.
Förutom att inte överskrida gränserna för paklitaxelrelaterade föroreningar i Tabell 1, påträffas inte mer än 0,1 % av någon annan enskild förorening;och inte mer än 2,0 % av de totala föroreningarna påträffas.
test 2 (för material märkt som framställt genom en semisyntetisk process)— Om materialet uppfyller detta test indikerar märkningen att det uppfyller USP-relaterade föreningar Test 2.
Spädningsmedel - Använd acetonitril.
Lösning A-Använd en filtrerad och avgasad blandning av vatten och acetonitril (3:2).
Lösning B-Använd filtrerad och avgasad acetonitril.
Mobil fas - Använd variabla blandningar av lösning A och lösning B enligt anvisningarna för kromatografiska system.Gör justeringar vid behov (se Systemlämplighet under Kromatografi 621).
Systemlämplighetslösning - Lös upp noggrant uppvägda mängder av USP Paclitaxel RS och USP Paclitaxel-relaterad förening B RS i spädningsmedel, skaka och sonikera vid behov, för att erhålla en lösning med kända koncentrationer på cirka 0,96 mg respektive 0,008 mg per ml.
Testlösning – Överför cirka 10 mg paklitaxel, noggrant vägd, till en 10 ml mätkolv, lös upp i och späd med spädningsmedel till volym, skaka och sonikera vid behov, och blanda.
Kromatografiskt system (se kromatografi 621)— Vätskekromatografen är utrustad med en 227-nm-detektor och en 4,6 mm × 15-cm kolonn som innehåller 3-µm packning L1.Flödeshastigheten är cirka 1,2 ml per minut.Kolonntemperaturen hålls vid 35°C. Kromatografen programmeras enligt följande.
Tid (minuter) Lösning A (%) Lösning B (%) Eluering
0-20 100 0 isokratisk
20-60 100®10 0®90 linjär gradient
60-62 10®100 90®0 linjär gradient
62-70 100 0 isokratiskKromatografera systemlämplighetslösningen och registrera toppsvaren enligt anvisningarna för Procedur: de relativa retentionstiderna är cirka 0,94 för paklitaxelrelaterad förening B och 1,0 för paklitaxel;upplösningen, R, mellan paklitaxelrelaterade förening B och paklitaxel är inte mindre än 1,2;och den relativa standardavvikelsen för replikatinjektioner är inte mer än 2,0 %.
Procedur - Injicera lika volymer (ca 15 µL) av spädningsvätskan och testlösningen separat i kromatografen, registrera kromatogrammen och mät ytorna för alla toppar.Bortse från eventuella toppar på grund av spädningsmedlet.Beräkna procentandelen av varje förorening i den del av paklitaxel som tas med formeln:
100 (fre/rs)
där F är den relativa svarsfaktorn för varje förorening (se tabell 2 för värden);ri är topparean för varje förorening som erhålls från testlösningen;och rs är summan av areorna av alla toppar som erhållits från testlösningen.
Tabell 2
Relativ retentionstid Relativ svarsfaktor (F) Namngräns (%)
0,11 1,24 10-deacetylbaccatin III 0,1
0,20 1,29 Baccatin III 0,2
0,42 1,39 Fotodegradant2 0,1
0,47 1,00 10-Deacetylpaclitaxel 0,5
0,80 1,00 2-Debensoylpaklitaxel-2-pentenoat 0,7
0,921 1,00 Oxetanring öppnad, acetyl och bensoyl migrerade 2 x 1
0,921 1,00 10-Acetoacetylpaclitaxel x2
0,941 1,00 10-deacetyl-7-epipaclitaxel (Paclitaxel-relaterad förening B) x3
1,37 1,00 7-Epipaclitaxel 0,4
1,45 1,00 10,13-Bissidechainpaclitaxel2 0,5
1,54 1,00 7-acetylpaklitaxel 0,6
1,80 1,75 13-Tes-baccatin III 0,1
2,14 1,00 7-Tes-paklitaxel 0,3
1 Upplösningen kan vara ofullständig för dessa toppar, beroende på de relativa mängderna närvarande;summan av x1, x2 och x3 är inte mer än 0,4 %.
2 Följande kemiska namn tilldelas de relaterade föreningarna Photodegradant;Oxetanring öppnad, acetyl och bensoyl migrerade;och 10,13-bissidechainpaclitaxel:
Fotonedbrytande medel
(1R,2R,4S,5S,7R,10S,11R,12S,13S,15S,16S)-2,10-diacetyloxi-5,13-dihydroxi-4,16,17,17-tetrametyl-8-oxa- 3-oxo-12-fenylkarbonyloxipentacyklo[11.3.1.01,11.04,11.07,10]heptadec-15-yl
(2R,3S)-2-hydroxi-3-fenyl-3-(fenylkarbonylamino)propanoat
Oxetanring öppnade, acetyl och bensoyl migrerade
(1S,2S,3R,4S,5S,7S,8S,10R,13S)-5,10-diacetyloxi-1,2,4,7-tetrahydroxi-8,12,15,15-tetrametyl-9-oxo- 4-(fenylkarbonyloximetyl)tricyklo[9.3.1.03,8]pentadek-11-en-13-yl
(2R,3S)-2-hydroxi-3-fenyl-3-(fenylkarbonylamino)propanoat
10,13-Bissidechainpaclitaxel
Baccatin III 13-ester med (2R,3S)-2-hydroxi-3-fenyl-3-(fenylkarbonylamino)propansyra, 10-ester med (2S,3S)-2-hydroxi-3-fenyl-3-(fenylkarbonylamino) )propansyra
Förutom att inte överskrida gränserna för paklitaxelrelaterade föroreningar i Tabell 2, påträffas inte mer än 0,1 % av någon annan enskild förorening;och inte mer än 2,0 % av de totala föroreningarna påträffas.
test 3 (för material märkt som producerat av en växtcellsfermenteringsprocess)— Om materialet uppfyller detta test, indikerar märkningen att det uppfyller USP-relaterade föreningar Test 3.
Lösning A-Förbered en filtrerad och avgasad blandning av vatten och acetonitril (3:2).
Lösning B-Förbered filtrerad och avgasad acetonitril.
Mobil fas - Använd variabla blandningar av lösning A och lösning B enligt anvisningarna för kromatografiska system.Gör justeringar vid behov (se Systemlämplighet under Kromatografi 621).
Systemlämplighetslösning - Lös upp USP Paclitaxel Impurity Mixture RS i acetonitril, sonikera vid behov, för att erhålla en lösning med en känd koncentration på cirka 1 mg per ml.
Standardlösning – Lös upp en noggrant uppvägd mängd USP Paclitaxel RS i acetonitril, sonikera vid behov, för att erhålla en lösning med en känd koncentration på cirka 1 mg per ml.
Testlösning – Överför cirka 10 mg paklitaxel, noggrant vägd, till en 10 ml mätkolv.Lös upp i och späd med acetonitril till volym, sonikera vid behov och blanda.
Kromatografiskt system (se kromatografi 621)— Vätskekromatografen är utrustad med en 227-nm-detektor och en 4,6 mm × 15-cm kolonn som innehåller 3-µm packning L1.Flödeshastigheten är cirka 1,2 ml per minut.Kromatografen programmeras enligt följande.
Tid (minuter) Lösning A (%) Lösning B (%) Eluering
0-28 100 0 isokratisk
28-33 100®98 0®2 linjär gradient
33–58 98®10 2®90 linjär gradient
58-60 10 90 isokratisk
60-63 10®100 90®0 linjär gradient
63-70 100 0 isokratiskKromatografera systemets lämplighetslösning och registrera toppsvaren enligt anvisningarna för Procedur: upplösningen, R, mellan paklitaxel och bensylanalog är inte mindre än 1,8.Kromatografera standardlösningen och registrera toppsvar enligt anvisningarna för Procedur: den relativa standardavvikelsen för replikatinjektioner är inte mer än 2,0 %.[notering—I syfte att identifiera topparna anges de ungefärliga relativa retentionstiderna i tabell 3. De relativa retentionstiderna mäts mot paklitaxel.]
Tabell 3
Namn Relativ lagringstidsgräns (%)
Propylanalog1 0,54 0,2
Cefalomannin (Paclitaxel-relaterad förening A) 0,76 0,5
sek-butylanalog2 0,81 0,2
n-butylanalog3 0,89 0,1
Bensylanalog 1,10 0,4
Baccatin VI 1,23 0,2
Pentylanalog4 1,31 0,2
7-Epipaclitaxel 1,51 0,4
1 Följande kemiska namn tilldelas den relaterade föreningen Propylanalog: Baccatin III 13-ester med (2R,3S)-3-butanoylamino-2-hydroxi-3-fenylpropansyra.
2 Följande kemiska namn tilldelas den relaterade föreningen sec-Butylanalog: Baccatin III 13-ester med (2R,3S)-2-hydroxi-3-(2-metylbutanoylamino)-3-fenylpropansyra.
3 Följande kemiska namn tilldelas den relaterade föreningen n-butylanalog: Baccatin III 13-ester med (2S,3S)-2-hydroxi-3-(pentanoylamino)-3-fenylpropansyra.
4 Följande kemiska namn tilldelas den relaterade föreningen Pentylanalog: Baccatin III 13-ester med (2R,3S)-3-(hexanoylamino)-2-hydroxi-3-fenylpropansyra.
Procedur – Injicera en volym (cirka 12 µL) av testlösningen i kromatografen, registrera kromatogrammet och mät ytorna för alla toppar.Beräkna procentandelen av varje förorening i den del av paklitaxel som tas med formeln:
100(ri/rU)
där ri är svaret för varje enskild orenhet;och rU är summan av areorna av alla toppar som erhållits från testlösningen.Förutom att inte överskrida gränserna för paklitaxelrelaterade föroreningar i Tabell 3, påträffas inte mer än 0,1 % av någon annan enskild förorening;och inte mer än 2,0 % av de totala föroreningarna påträffas.
Analysera-
Spädningsmedel-Förbered en blandning av metanol och ättiksyra (200:1).
Mobil fas-Förbered en filtrerad och avgasad blandning av vatten och acetonitril (11:9).Gör justeringar vid behov (se Systemlämplighet under Kromatografi 621).
Standardberedning - Lös upp, med hjälp av ultraljudbehandling om nödvändigt, en noggrant uppvägd mängd USP Paclitaxel RS i spädningsmedel, och späd kvantitativt, och stegvis om nödvändigt, med spädningsmedel för att erhålla en lösning med en känd koncentration på cirka 1 mg per ml.
Analysförberedelse - Överför cirka 10 mg paklitaxel, noggrant vägd, till en 10 ml mätkolv.Lös upp i spädningsmedel, med ultraljudbehandling om nödvändigt, späd med spädningsmedel till volym och blanda.
Kromatografiskt system (se Kromatografi <621>) - Vätskekromatografen är utrustad med en 227-nm detektor och en 4,6 mm × 25 cm kolonn som innehåller 5 µm packning L43.Flödeshastigheten är cirka 1,5 ml per minut.Kromatografera standardberedningen och registrera toppsvaren enligt anvisningarna för Procedur: svansfaktorn är mellan 0,7 och 1,3;och den relativa standardavvikelsen för replikatinjektioner är inte mer än 1,5 %.
Procedur - Injicera lika volymer (ca 10 µL) av standardpreparatet och analyspreparatet separat i kromatografen, registrera kromatogrammen och mät ytorna för de största topparna.Beräkna mängden, i mg, av C47H51NO14 i den del av paklitaxel som tas med formeln:
10C(rU/rS)
där C är koncentrationen, i mg per ml, av USP Paclitaxel RS i standardberedningen;och rU och rS är toppsvaren för paklitaxel erhållna från analysberedningen respektive standardberedningen.