L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98.5% (HPLC) โรงงาน

วิธีการวิเคราะห์ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
คำอธิบาย: วางตัวอย่างประมาณ 2 กรัมในจานเพาะเชื้อที่สะอาดและแห้ง แล้วสังเกตลักษณะของตัวอย่างการรายงาน: รายงานการสังเกต
การระบุ: เปรียบเทียบเวลาคงอยู่ของพีคหลักในโครมาโตแกรมของการเตรียมการทดสอบกับเวลาคงอยู่ของพีคหลักในโครมาโตแกรมของการปรับความเหมาะสมของระบบที่ได้รับในความบริสุทธิ์ทางโครมาโตกราฟีโดย HPLC
การสูญเสียจากการทำให้แห้ง: ทำให้ขวดชั่งน้ำหนักก้นตื้นที่มีจุกแก้วแห้งที่อุณหภูมิ 105 ± 2 ℃ เป็นเวลา 30 นาทีปล่อยให้เย็นลงที่อุณหภูมิห้องใน descicatorชั่งน้ำหนักขวดชั่งที่มีจุกปิดอย่างแม่นยำและบันทึกน้ำหนัก (W1)ถ่ายโอนปริมาณสารทดสอบที่ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำประมาณ 1 ถึง 2 กรัมลงในขวดชั่งน้ำหนักโดยการเขย่าเบา ๆ ไปด้านข้าง กระจายชิ้นงานทดสอบให้เท่า ๆ กันเท่าที่จะทำได้จนถึงความลึกประมาณ 5 มม.ชั่งน้ำหนักขวดชั่งน้ำหนักที่บรรจุและบันทึกน้ำหนัก (W2)วางขวดที่บรรจุไว้ในเตาอบเพื่อการทำให้แห้ง ถอดจุกออกและทิ้งไว้ในห้องด้วยทำให้ตัวอย่างทดสอบแห้งที่อุณหภูมิ 105±2℃ เป็นเวลา 3 ชั่วโมงเมื่อเปิดขวดแล้ว ให้ปิดขวดทันที และปล่อยให้อุณหภูมิห้องอยู่ในเครื่องดูดความชื้นชั่งน้ำหนักขวดชั่งอย่างแม่นยำด้วยจุกปิดและคืนน้ำหนัก (W3)คำนวณเปอร์เซ็นต์การสูญเสียจากการทำให้ตัวอย่างแห้งโดยใช้สูตรต่อไปนี้:
การคำนวณการสูญเสียจากการทำให้แห้ง (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
เนื้อหา Enantiomer โดย HPLC:
สารเคมีและรีเอเจนต์:
เกรด n-เฮกเซน AR
เกรดเมทานอล HPLC
ไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์ HPLC เกรด
ไดเอทิลามีน AR เกรด
มาตรฐาน: มาตรฐาน L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl;มาตรฐาน L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer
Mobile Phase: เตรียมส่วนผสมที่เป็นเนื้อเดียวกันของ n-Hexane, Isopropyl Alcohol, Methanol และ Diethylamine (65:20:15:0.1 v/v/v/v)
การเตรียมเปล่า: ถ่ายเมทานอล 2.5 มล. ในขวดวัดปริมาตร 10 มล. เจือจางให้ได้ปริมาตรด้วยเฟสเคลื่อนที่แล้วผสม
การเตรียมความเหมาะสมของระบบ:
ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำและถ่ายโอนมาตรฐาน L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl อย่างละประมาณ 5 มก. และ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl enantiomer มาตรฐานในขวดวัดปริมาตร 10 มล. ละลายในเมทานอลประมาณ 2.5 มล. เจือจางให้ได้ปริมาตรด้วยมือถือ เฟสและผสม
เตรียมการทดสอบ:
ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำและถ่ายโอนตัวอย่างประมาณ 5 มก. ในขวดวัดปริมาตร 10 โมล ละลายในเมทานอลประมาณ 2.5 มล. เจือจางให้ได้ปริมาตรด้วยเฟสเคลื่อนที่แล้วผสม
พารามิเตอร์เครื่องมือ:
เครื่องมือ: HPLC ที่ติดตั้งหัวฉีด ปั๊ม เครื่องตรวจจับ UV และเครื่องบันทึก
คอลัมน์: ChiralPak-IC (4.6 มม. x 250 มม.) 5 μ หรือเทียบเท่า
อัตราการไหล: 1.0 มล./นาที
ความยาวคลื่น: 260nm
ปริมาณการฉีด: 10 ไมโครลิตร
อุณหภูมิ coven ของคอลัมน์: 25 ℃
เวลาดำเนินการ: 20 นาที
ขั้นตอน
ฉีดน้ำยาดังกล่าวตามลำดับต่อไปนี้บันทึกโครมาโตแกรมและยืนยันเกณฑ์:
คำอธิบายของเกณฑ์จำนวนการฉีดของการฉีด
การเตรียมเปล่า 1 ไม่ควรสังเกตจุดสูงสุดที่รบกวนในเวลาการเก็บรักษาของ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl หรือ enantiomer
การเตรียมความเหมาะสมของระบบ 1 ความละเอียดระหว่าง L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl และ enantiomer peak ไม่ควรน้อยกว่า 2.0
การเตรียมการทดสอบ 1 ใช้โครมาโตแกรมทดสอบเพื่อหาปริมาณอิแนนทิโอเมอร์ในตัวอย่าง
เวลาการเก็บรักษาสัมพัทธ์:
L-4-Nitrophenylalanine เมทิลเอสเทอร์ HCl 1.0
Enantiomer เกี่ยวกับ 1.11
เวลากักเก็บของ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl คือประมาณ 9.8 นาที
การคำนวณ: ในโครมาโตกราฟีที่ได้จากการเตรียมการทดสอบ ไม่ต้องสนใจค่าพีคทั้งหมดที่คาดว่า L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl และ Enantiomerรายงานเนื้อหาอิแนนทิโอเมอร์ในตัวอย่างด้วยวิธีการปรับพื้นที่ให้เป็นมาตรฐาน
Chromatogrpahic ความบริสุทธิ์และสิ่งเจือปนโดย HPLC:
สารเคมีและรีเอเจนต์:
ไดแอมโมเนียมฟอสเฟต เกรด AR
กรดฟอสฟอริก AR เกรด
เกรดเมทานอล HPLC
น้ำบริสุทธิ์
มาตรฐาน
มาตรฐาน L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl
มาตรฐาน 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate
เฟสมือถือ-A
ละลายไดแอมโมเนียมฟอสเฟต 6.6 กรัมในน้ำบริสุทธิ์ 1,000 มล.ปรับ pH ของสารละลายนี้เป็น 6.0 ด้วยกรดฟอสฟอริกกรองและไล่ก๊าซก่อนวัดค่า pH ของสารละลาย ให้สอบเทียบเครื่องวัดค่า pH ด้วยสารละลายบัฟเฟอร์มาตรฐาน pH 4.01 และ 7.00
โมบายเฟส-บี
เกรดเมทานอล HPLC
การเตรียมความเหมาะสมของระบบ
ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำและถ่ายโอนมาตรฐาน L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl อย่างละ 25 มก. และมาตรฐาน 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrate อย่างละ 25 มก. ในขวดวัดปริมาตร 50 มล. ละลายและเจือจางให้ได้ปริมาตรด้วยเมทานอลแล้วผสม
การเตรียมการทดสอบ:
ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำและถ่ายโอนตัวอย่างประมาณ 25 มก. ในขวดวัดปริมาตรขนาด 50 มล. ละลายและเจือจางให้ได้ปริมาตรด้วยเมทานอลแล้วผสม
พารามิเตอร์เครื่องมือ:
เครื่องมือ: HPLC ที่ติดตั้งหัวฉีด ปั๊ม เครื่องตรวจจับ UV และเครื่องบันทึก
คอลัมน์: XTerra RP-18 (4.6 มม. x 150 มม.) 5 μ หรือเทียบเท่า
อัตราการไหล: 1.0 มล./นาที
ความยาวคลื่น: 265nm
ปริมาณการฉีด: 20 ไมโครลิตร
อุณหภูมิ coven ของคอลัมน์: 25 ℃
เวลาดำเนินการ: 45 นาที
โปรแกรมไล่ระดับสี
เวลา (นาที) Mobile Phase-A % Mobile Phase-B %
0.01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
ขั้นตอน:
ฉีดน้ำยาดังกล่าวตามลำดับต่อไปนี้บันทึกโครมาโตแกรมและยืนยันเกณฑ์:
การเตรียมเปล่า 1 ไม่ควรสังเกตจุดสูงสุดที่รบกวนในเวลาการเก็บรักษาของ L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl
การเตรียมความเหมาะสมของระบบ 1 Tailing factor for L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl peak ควรมีค่าไม่ต่ำกว่า 2.0
การเตรียมการทดสอบ 1 ใช้โครมาโตแกรมทดสอบเพื่อตรวจสอบความบริสุทธิ์และสิ่งเจือปนด้วยโครมาโตกราฟี
เวลาการเก็บรักษาสัมพัทธ์:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1.0 (ระยะเวลาการเก็บรักษาประมาณ 11.4 นาที)
4-ไนโตร-แอล-ฟีนิลอะลานีน ประมาณ 0.4
โทลูอีน ประมาณ 2.3
การคำนวณ:
ในโครมาโตแกรมที่ได้จากการเตรียมการทดสอบ หลังจากการแก้ไขค่าว่างแล้ว ไม่ต้องคำนึงถึงค่าพีคเนื่องจากโทลูอีนรายงานความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟี ปริมาณ 4-Nitro-L-Phenylalanine และสิ่งเจือปนทั้งหมดในตัวอย่างด้วยวิธีการปรับพื้นที่ให้เป็นมาตรฐาน