Метиловий ефір L-4-нітрофенілаланіну HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Аналіз >98,5% (ВЕРХ) завод

Метод аналізу метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Опис: Помістіть приблизно 2 г зразка в чисту і суху чашку Петрі та спостерігайте за зовнішнім виглядом зразка.Звітність: повідомте про спостереження
Ідентифікація: Порівняйте час утримування основного піку на хроматограмі досліджуваного препарату з часом утримування основного піку на хроматограмі препарату придатності системи, отриманого в хроматографічній чистоті за допомогою ВЕРХ.
Втрати при висиханні: висушіть закриту скляною пробкою неглибоку пляшку для зважування при 105±2℃ протягом 30 хвилин.Дайте йому охолонути до кімнатної температури в ексикаторі.Точно зважте вагову пляшку з пробкою та запишіть вагу (W1).Перенесіть приблизно від 1 до 2 г точно зваженої кількості досліджуваної речовини у пляшку для зважування.Обережним струшуванням збоку розподіліть досліджуваний зразок настільки рівномірно, наскільки це можливо, на глибину приблизно 5 мм.Зважте завантажену пляшку для ваг і запишіть вагу (W2).Помістіть завантажену пляшку в сушильну шафу, видаливши пробку і залишивши її також у камері.Висушіть тестовий зразок при 105±2℃ протягом 3 годин.Відкривши камеру, негайно закрийте пляшку та дайте їй нагрітися до кімнатної температури в ексикаторі.Точно зважте пляшку для ваг із пробкою та відновіть вагу (W3).Обчисліть відсоток втрат при висиханні зразка за такою формулою:
Розрахунок Втрати при висиханні (% мас./мас.)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Вміст енантіомерів за ВЕРХ:
Хімічні речовини та реагенти:
n-Гексан марки AR
Клас метанолу ВЕРХ
Клас ізопропілового спирту ВЕРХ
Діетиламін марки АР
Стандарти: L-4-нітрофенілаланін метиловий ефір HCl стандарт;Стандарт енантіомеру метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl
Рухома фаза: приготуйте гомогенну суміш н-гексану, ізопропілового спирту, метанолу та діетиламіну (65:20:15:0,1 об./об./об./об.)
Приготування холостої проби: перенесіть 2,5 мл метанолу в мірну колбу на 10 мл, доведіть до об’єму рухомою фазою та перемішайте.
Підготовка системи до придатності:
Ретельно зважте та перенесіть приблизно по 5 мг кожного стандарту метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl та стандарту енантіомера метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl у 10-мл мірну колбу, розчиніть у приблизно 2,5 мл метанолу, розведіть до об’єму за допомогою мобілки. фази і перемішайте.
Підготовка до тесту:
Ретельно зважте та перенесіть приблизно 5 мг зразка в 10-мольну мірну колбу, розчиніть у приблизно 2,5 мл метанолу, розведіть до об’єму рухомою фазою та перемішайте.
Інструментальні параметри:
Прилад: ВЕРХ, оснащений інжектором, насосом, УФ-детектором і реєстратором
Колонка: ChiralPak-IC (4,6 мм x 250 мм) 5 мкм або еквівалент
Швидкість потоку: 1,0 мл/хв
Довжина хвилі: 260 нм
Об'єм ін'єкції: 10 мкл
Температура колонки: 25 ℃
Час виконання: 20 хвилин
Процедура
Введіть розчини, як зазначено в наступній послідовності.Запишіть хроматограми та підтвердіть критерії:
Опис критеріїв кількості ін'єкцій
Порожній препарат 1 Не повинно спостерігатися інтерферентного піку під час утримування метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl або енантіомеру.
Підготовка придатності системи 1 Роздільна здатність між метиловим ефіром L-4-нітрофенілаланіну HCl і піком енантіомеру має бути не менше 2,0
Підготовка тесту 1 Використовуйте тестову хроматограму, щоб визначити вміст енантіомерів у зразку.
Відносний час зберігання:
Метиловий ефір L-4-нітрофенілаланіну HCl 1,0
Енантіомер Про 1.11
Час утримання метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl становить близько 9,8 хвилин.
Розрахунок: на хроматограмі, отриманій під час приготування тесту, не враховуйте всі піки, за винятком метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl та енантіомеру.Повідомте про вміст енантіомерів у зразку методом нормалізації площі.
Хроматографічна чистота та домішки за ВЕРХ:
Хімічні речовини та реагенти:
Діамонійфосфат марки АР
Фосфорна кислота марки АР
Клас метанолу ВЕРХ
Очищена вода
Стандарти
Стандарт метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl
Стандарт моногідрату 4-нітро-L-фенілаланіну
Мобільна фаза-А
Розчиніть 6,6 г діамоній фосфату в 1000 мл очищеної води.Доведіть рН цього розчину до 6,0 за допомогою фосфорної кислоти.Відфільтрувати та дегазувати.Перед вимірюванням pH розчину відкалібруйте pH-метр стандартним буферним розчином pH 4,01 ТА 7,00.
Мобільна фаза-B
Клас метанолу ВЕРХ
Підготовка системи до придатності
Ретельно зважте та перенесіть приблизно по 25 мг стандарту метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl та стандарту моногідрату 4-нітро-L-фенілаланіну в 50-мл мірну колбу, розчиніть у ній і розведіть метанолом до об’єму та перемішайте.
Підготовка до тесту:
Точно зважте та перенесіть приблизно 25 мг зразка в 50-мл мірну колбу, розчиніть у ній і розведіть метанолом до об’єму та перемішайте.
Інструментальні параметри:
Прилад: ВЕРХ, оснащений інжектором, насосом, УФ-детектором і реєстратором
Колонка: XTerra RP-18 (4,6 мм x 150 мм) 5 мкм або еквівалент
Швидкість потоку: 1,0 мл/хв
Довжина хвилі: 265 нм
Об'єм ін'єкції: 20 мкл
Температура колонки: 25 ℃
Тривалість: 45 хвилин
Програма градієнта
Час (хв) Мобільна фаза-A % Мобільна фаза-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Процедура:
Введіть розчини, як зазначено в наступній послідовності.Запишіть хроматограми та підтвердіть критерії:
Приготування холостого зразка 1 Не повинно спостерігатися заважаючого піку під час утримування метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl.
Підготовка придатності системи 1 Коефіцієнт хвоста для піка метилового ефіру L-4-нітрофенілаланіну HCl має бути не менше 2,0
Підготовка тесту 1 Використовуйте тестову хроматограму для визначення хроматографічної чистоти та домішок.
Відносний час зберігання:
Метиловий ефір L-4-нітрофенілаланіну HCl 1,0 (час утримання приблизно 11,4 хвилини)
4-нітро-L-фенілаланін приблизно 0,4
Толуол Про 2,3
Розрахунки:
На хроматограмі, отриманій під час приготування тесту, після корекції холостого зразка не враховуйте пік, який виникає через толуол.Повідомте про хроматографічну чистоту, вміст 4-нітро-L-фенілаланіну та загальну кількість домішок у зразку методом нормалізації площі.