Nhà máy L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl CAS 17193-40-7 H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl Assay >98,5% (HPLC)

Phương pháp Phân tích L-4-Nitrophenylalanine Metyl Ester HCl (H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl) (CAS: 17193-40-7)
Mô tả: Cho khoảng 2 g mẫu vào đĩa petri sạch và khô và quan sát sự xuất hiện của mẫu.Báo cáo: Báo cáo quan sát
Nhận dạng: So sánh thời gian lưu của pic chính trong sắc ký đồ của chế phẩm thử với thời gian lưu của pic chính trong sắc ký đồ của chuẩn độ phù hợp của hệ thống thu được ở độ tinh khiết sắc ký bằng HPLC.
Tổn hao khi sấy khô: Sấy khô bình cân nông, có nút thủy tinh ở 105±2℃ trong 30 phút.Để nguội đến nhiệt độ phòng trong bình hút ẩm.Cân chính xác bình cân có nút đậy và ghi lại khối lượng (W1).Chuyển khoảng 1 đến 2g lượng chất thử đã được cân chính xác vào bình cân.Bằng cách lắc nhẹ, lắc theo chiều ngang, phân bố mẫu thử càng đều càng tốt với độ sâu khoảng 5 mm.Cân bình cân đã nạp và ghi lại khối lượng (W2).Đặt chai đã nạp vào tủ sấy, tháo nút và để chai trong tủ.Sấy khô mẫu thử ở 105 ± 2oC trong 3 giờ.Khi mở buồng, đóng ngay chai và để chai ở nhiệt độ phòng trong bình hút ẩm.Cân chính xác bình cân có nút đậy và thu lại trọng lượng (W3).Tính phần trăm hao hụt khi làm khô mẫu bằng cách sử dụng công thức sau:
Tính toán Tổn thất khi sấy (% w/w)= (W2-W3) ÷ (W2-W1) x 100
Nội dung Enantiomer bằng HPLC:
Thuốc thử hóa học:
loại n-Hexan AR
Cấp độ metanol HPLC
Rượu Isopropyl loại HPLC
Diethylamine loại AR
Tiêu chuẩn: Tiêu chuẩn L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl;Chất chuẩn đồng phân đối quang L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl
Pha động: Chuẩn bị hỗn hợp đồng nhất gồm n-Hexane, Isopropyl Alcohol, Methanol và Diethylamine (65:20:15:0,1 v/v/v/v)
Chuẩn bị mẫu trắng: Chuyển 2,5ml Methanol vào bình định mức 10ml, pha loãng đến vạch mức bằng pha động và lắc đều.
Chuẩn bị tính phù hợp của hệ thống:
Cân chính xác và chuyển khoảng 5 mg mỗi chất chuẩn L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl và L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl chuẩn đồng phân đối quang vào bình định mức 10 ml, hòa tan trong khoảng 2,5 ml metanol, pha loãng đến vạch bằng dung dịch di động pha và trộn.
Luyện thi:
Cân chính xác và chuyển khoảng 5 mg mẫu vào bình định mức 10 mol, hòa tan trong khoảng 2,5 ml metanol, pha loãng đến vạch mức bằng pha động và lắc đều.
Thông số nhạc cụ:
Dụng cụ: HPLC được trang bị kim phun, Bơm, đầu dò UV và Máy ghi âm
Cột: ChirusPak-IC (4,6mm x 250mm) 5 μ hoặc tương đương
Tốc độ dòng chảy: 1,0 ml/phút
Bước sóng: 260nm
Thể tích tiêm: 10 μL
Cột coven temp.: 25 ℃
Thời gian chạy: 20 phút
Thủ tục
Tiêm các giải pháp như được đề cập trong trình tự sau đây.Ghi lại sắc ký đồ và xác nhận các tiêu chí:
Mô tả các lần tiêm Số lần tiêm Tiêu chí
Chuẩn bị mẫu trắng 1 Không nên quan sát thấy pic cản trở tại thời gian lưu của L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl hoặc đồng phân đối ảnh.
Chuẩn bị tính phù hợp của hệ thống 1 Độ phân giải giữa L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl và pic đồng phân đối quang không được nhỏ hơn 2,0
Chuẩn bị thử nghiệm 1 Sử dụng sắc ký đồ thử nghiệm để xác định hàm lượng đồng phân đối quang trong mẫu.
Thời gian lưu giữ tương đối:
L-4-Nitrophenylalanine Metyl Este HCl 1.0
Đồng phân đối ảnh Khoảng 1.11
Thời gian lưu của L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl là khoảng 9,8 phút.
Tính toán: Trong sắc ký đồ thu được từ quá trình chuẩn bị thử nghiệm, bỏ qua tất cả các pic mong đợi L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl và Enantiomer.Báo cáo hàm lượng đồng phân đối quang trong mẫu bằng phương pháp chuẩn hóa diện tích.
Độ tinh khiết và tạp chất sắc ký bằng HPLC:
Thuốc thử hóa học:
Cấp độ diammonium phosphate AR
Axit photphoric loại AR
Cấp độ metanol HPLC
Nước tinh khiết
Tiêu chuẩn
Tiêu chuẩn L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl
Tiêu chuẩn monohydrat 4-Nitro-L-Phenylalanine
Giai đoạn di động-A
Hòa tan 6,6 g Diammonium phosphate trong 1000ml nước tinh khiết.Điều chỉnh pH của dung dịch này đến 6,0 bằng axit photphoric.Lọc và khử khí.Trước khi đo pH của dung dịch, hiệu chuẩn máy đo pH bằng dung dịch đệm chuẩn pH 4,01 VÀ 7,00.
Giai đoạn di động-B
Cấp độ metanol HPLC
Chuẩn bị tính phù hợp của hệ thống
Cân chính xác và chuyển khoảng 25 mg mỗi chất chuẩn L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl và chất chuẩn 4-Nitro-L-Phenylalanine monohydrat vào bình định mức 50 ml, hòa tan trong và pha loãng đến vạch mức bằng metanol và trộn.
Luyện thi:
Cân chính xác và chuyển khoảng 25 mg mẫu vào bình định mức 50 ml, hòa tan và pha loãng đến vạch bằng metanol và trộn.
Thông số nhạc cụ:
Dụng cụ: HPLC được trang bị kim phun, Bơm, đầu dò UV và Máy ghi âm
Cột: XTerra RP-18 (4,6mm x 150mm) 5 μ hoặc tương đương
Tốc độ dòng chảy: 1,0 ml/phút
Bước sóng: 265nm
Thể tích tiêm: 20 μL
Cột coven temp.: 25 ℃
Thời gian chạy: 45 phút
chương trình chuyển màu
Thời gian (phút) Mobile Phase-A % Mobile Phase-B %
0,01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
Thủ tục:
Tiêm các giải pháp như được đề cập trong trình tự sau đây.Ghi lại sắc ký đồ và xác nhận các tiêu chí:
Chuẩn bị mẫu trắng 1 Không nên quan sát thấy pic cản trở tại thời gian lưu của L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl.
Chuẩn bị tính phù hợp của hệ thống 1 Hệ số đuôi cho pic L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl không được nhỏ hơn 2,0
Chuẩn bị thử nghiệm 1 Sử dụng sắc ký thử nghiệm để xác định độ tinh khiết và tạp chất sắc ký.
Thời gian lưu giữ tương đối:
L-4-Nitrophenylalanine Methyl Ester HCl 1,0 (thời gian lưu khoảng 11,4 phút)
4-Nitro-L-Phenylalanine Khoảng 0,4
Toluen Khoảng 2,3
Tính toán:
Trên sắc ký đồ thu được từ quá trình chuẩn bị thử, sau khi hiệu chỉnh mẫu trắng, bỏ qua pic toluen.Báo cáo độ tinh khiết sắc ký, hàm lượng 4-Nitro-L-Phenylalanine và tổng tạp chất trong mẫu bằng phương pháp chuẩn hóa diện tích.